依达拉奉对原代海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

目的:研究依达拉奉对原代培养海马神经元缺氧复氧损伤的保护机制.方法:建立离体海马神经元缺氧复氧的细胞损伤模型,实验分组为正常对照组、缺氧复氧组、依达拉奉干预组,其中依达拉奉干预浓度分为1、10、100和300 μmol/L.观察海马细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率、丙二醛(MDA)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性的变化,流式细胞仪观察细胞凋亡.结果:与缺氧复氧组相比,依达拉奉100μmol/L组和300 μmol/L组的MTT代谢率显著增高(P＜0.01),MDA含量降低(P＜0.05),NOS活性降低(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.01).结论:依达拉奉能够有效地抑制脂质过氧化作用,降低MDA及NOS活性,减少细胞凋亡率,对缺氧损伤的神经元具有显著的神经保护作用.     

Toll-like receptor 7/8 agonist resiquimod induces late preconditioning in neonatal cardiac myocytes

Aim:

To investigate whether R-848 (resiquimod, toll-like receptor 7/8 agonist) can induce late preconditioning in neonatal cardiac myocytes.

Methods:

The protective effects of R-848 on neonatal myocytes against anoxia-reoxygenation-induced injury were tested, and intracellular reactive oxygen species (ROS) were determined. The protein synthesis inhibitor cyclohexamide (CH) and the ROS scavenger N-acetylcysteine (NAC) were used in this model to test if new protein synthesis and oxidative stress were necessary for their cardioprotective effects. The activation of nuclear factor kappa B (NFκB) and hypoxia inducible factor 1 (HIF1) was investigated by electrophoretic mobility shift assays (EMSA), and inducible nitric oxide synthase (iNOS) was assessed by immunoblotting. After iNOS was down-regulated by small interfering RNA (siRNA) transfection, the cardioprotective effect was reassessed.

Results:

ROS were triggered soon after R-848 (0.01–1.0 μg/L) administration, however, the cardioprotective effect of which was induced 24 h later. This protection was abolished by CH or NAC pretreatment. NFκB and HIF1 activation and iNOS up-regulation were involved in this protective mechanism. The cardioprotective effect was also attenuated after iNOS was knocked down.

Conclusion:

R-848 provided a cardioprotective effect through a late preconditioning mechanism via a ROS/NFκB-HIF1/iNOS-dependent pathway.     

地高辛抗血清对大鼠心肌缺氧复氧损伤心功能的影响及机制研究

目的研究内洋地黄素特异性拮抗剂地高辛抗血清对大鼠心肌缺氧复氧损伤心功能的影响及其作用机制。方法制备离体大鼠心肌缺氧复氧损伤模型,60只SD大鼠随机分为6组,每组10只。对照组,缺氧复氧组,维拉帕米组,小剂量、中剂量、高剂量地高辛抗血清组。连续纪录各组ECG、HR、LVDP、±dp/dtmax。各组于复氧结束后测定心肌组织中内洋地黄素水平、线粒体内Ca2+含量和冠脉流出液中NO含量。电镜观察心肌线粒体及血管内皮细胞结构的变化。结果缺氧复氧组心肌组织内洋地黄素水平升高,线粒体内Ca2+含量升高,NO含量降低,心肌线粒体及内皮细胞明显损伤,心功能明显受抑制。中、高剂量地高辛抗血清能降低心肌组织内洋地黄素水平和线粒体内Ca2+含量,升高NO含量,减轻缺氧复氧所致的心肌线粒体及内皮细胞的损伤,改善心肌收缩和舒张功能。结论地高辛抗血清抑制心肌缺氧复氧损伤所致的心功能减弱,其机制可能与拮抗内洋地黄素,减轻线粒体内Ca2+超载,升高NO浓度,保护了线粒体及内皮细胞功能有关。     

金丝桃苷对新生大鼠神经细胞缺氧/再给氧损伤的保护作用及其机制

目的探讨金丝桃苷(hyperin,Hyp)对新生大鼠脑细胞缺氧/再给氧损伤的保护作用及其机制。方法将分离的新生大鼠脑细胞缺氧30min或缺氧30min后再给氧40min造成细胞缺氧或再给氧损伤模型,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平的变化,用Fura2-AM方法测定脑细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果脑细胞缺氧时,细胞培养上清液中LDH从(62.0±13.0)U·L-1(Sham组)增高到(116.0±16.6)U·L-1(Control组,P<0.01),再给氧时,LDH和MDA分别从(45.6±9.2)U·L-1和(9.1±0.9)μmol·L-1(Sham组)增高到(106.0±17.4)U·L-1和(16.4±2.7)μmol·L-1(Control组,P<0.01)。Hyp在1.0～16.0μmol·L-1范围内,明显地抑制缺氧及再给氧损伤诱导的上述LDH和NO增高,并呈一定的浓度依赖性。1.0～16.0μmol·L-1的Hyp不仅可明显地抑制缺氧诱导的细胞培养上清液中NO和脑细胞内[Ca2+]i的增高(P<0.05或P<0.01),也可明显地抑制再给氧时NO和脑细胞内[Ca2+]i的升高(P<0.05或P<0.01),16.0μmol·L-1的Hyp可将再给氧时NO和[Ca2+]i分别从(34.4±6.3)μmol·L-1和(640±94)nmol·L-1(Control组)降至(25.0±5.1)μmol·L-1(P<0.05)和(331±56)nmol·L-1(P<0.01)。结论Hyp对神经细胞缺氧/再给氧损伤保护作用可能与抑制NO的释放、钙超载及自由基脂质过氧化有关。     

异氟烷改善离体鼠肝缺氧-复氧后氧供耗平衡

目的:研究异氟烷对离体鼠肝在缺氧-复氧状态下肝流量和肝氧耗的作用.方法:建立离体鼠肝灌流模型.将大鼠肝脏取下,置于离体鼠肝灌流仪中,以经95%O2/5%CO2饱和的改良克-林碳酸氢盐缓冲液恒压灌流(有氧状态用1.2 kPa,缺氧状态用0.2 kPa),另外加入葡萄糖10 mmol/L维持营养,加入1%牛血清白蛋白维持胶体渗透压,控制在生理pH值和温度,实时监测氧分压和肝流量变化.不同浓度异氟烷随混合气带入离体鼠肝灌注的人工肺.结果: (1)异氟烷对基础状态下鼠肝流量无明显影响,但可改善缺氧后复氧状态下鼠肝流量的减少.(2)异氟烷对基础状态下鼠肝氧耗有降低作用,但在复氧状态下却改善了鼠肝氧耗的下降.结论:异氟烷能改善离体鼠肝缺氧-复氧后氧供耗平衡,保护肝脏功能.     

黄连素对缺氧复氧心肌细胞Bcl-2和Bax基因表达变化的免疫组织化学研究

目的 研究黄连素对心肌细胞缺氧复氧损伤后的保护作用.方法 把培养3d的心肌细胞分为对照组和黄连素浓度组,同时于缺氧环境(95%N2 5%CO2)中培养24h后,再置常氧培养箱内培养1h.于不同时间取出,分别用抗Bcl-2、Bax的抗血清进行免疫组织化学染色,观察缺氧复氧后心肌细胞中Bcl-2、Bax的表达情况.结果 与缺氧前相比,缺氧24h和复氧1h,心肌细胞Bcl-2表达明显减弱,Bax表达明显增强;经黄连素预处理的心肌细胞与对照组相比,缺氧24h、复氧1h,Bcl-2表达明显增强,Bax表达明显减弱.结论 黄连素对心肌细胞缺氧复氧损伤有一定的保护作用.     

卡托普利和依那普利拉对培养心肌细胞缺氧再复氧损伤的保护作用

为探讨血管紧张素转化酶抑制剂卡托普利和依那普利拉对心肌细胞缺氧再复氧损伤的保护作用，应用培养心肌细胞缺氧再复氧模型，分别测定细胞内乳酸脱氢酶及琥珀酸脱氢酶活性，细胞脂质过氧化物含量和细胞搏动率。结果显示，卡托普利和依那普利拉均能提高缺氧心肌细胞内乳酸脱氢酶活性（Ｐ＜０．０１），不同程度减少缺氧后再复氧心肌细胞脂质过氧化物的形成（Ｐ＜０．０５－０．０１），促进再复氧阶段心肌细胞搏动功能的恢复（Ｐ＜０．０５）．上述结果表明卡托普利和依那普利拉能明显改善缺氧心肌细胞的糖代谢，加速糖酵解，拮抗缺氧再复氧脂质过氧化损伤作用，维护细胞功能，对缺氧再复氧心肌细胞具有明显的保护作用。     

拆方研究降香总萜、降香黄酮、丹参酮在冠心丹参 方中抗大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤作用

目的:研究冠心丹参处方中,分别除去降香总萜和降香总黄酮,或是加入丹参酮,研究其对抗心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的保护作用,探讨各组分对药效的贡献.方法:取培养4d的大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为:对照组(Cont组)、(1)A/R组、(2)1％的DSMO对照组、(3)冠心丹参组、(4)～(6)降香总萜与/和降香总黄酮阴性组、或是冠心丹参处方中分别加入终浓度为1,2,4 mg的丹参酮;检测细胞存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(catalase)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量及孵育液乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:在冠心丹参处方中分别除去降香总萜与/和降香总黄酮后,样品对抗心肌细胞的A/R的作用显著减弱,尤其以反映细胞抗脂质氧化状态指标SOD,catalase,GPx活性以及MDA含量更为明显;而加人丹参酮后,其对抗心肌细胞A/R的作用有不同程度的增强,尤其以反映细胞存活状态指标细胞存活率以及LDH更为明显,以2 mg丹参酮最为理想.结论:冠心丹参处方中在对抗心肌细胞A/R损伤的作用上,降香总萜和降香总黄酮不可缺如;加入2 mg丹参酮可增强其心肌保护作用.     

福辛普利对缺氧复氧豚鼠心室肌细胞动作电位及其离子通道的影响

 目的观察福辛普利预处理对缺氧复氧豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)、L-型钙通道电流(ICa-L)和ATP敏感钾通道电流(I_K-ATP)的影响,探讨其抗再灌注性心律失常的电生理机制。方法采用全细胞电流钳和膜片钳技术分别记录AP和ICa-L,I_K-ATP。结果缺氧复氧使心室肌细胞AP时程(APD₅₀,APD₉₀)缩短;ICa-L峰值降低,I-V曲线上移,激活曲线右移,半数激活电压(V_1/2)增大,失活曲线左移,失活V_1/2减低;ATP敏感钾通道由正常关闭状态到完全开放。与缺氧复氧组相比,福辛普利预处理使APD₅₀,APD₉₀相对延长;ICa-L峰值增加,I-V曲线上移幅度减小,激活曲线左移,失活曲线右移,激活与失活V_1/2均接近正常,ATP敏感钾通道进一步开放,电流明显增加。结论福辛普利预处理能显著改善缺氧复氧状态下L-钙通道的抑制状态,促进动作电位参数的恢复,减少有效不应期的离散度及折返形成;通过药物预适应机制,进一步开放ATP敏感钾通道,增加ATP敏感钾电流,而发挥抗再灌注心律失常的作用。     

三磷酸腺苷与神经生长因子对缺氧复氧后大鼠皮质神经元细胞活性及凋亡的影响

目的探讨体外三磷酸腺苷(ATP)、神经生长因子(NGF)对缺氧复氧大鼠皮质神经元的保护作用。方法取体外培养8d的Wistar大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组、缺氧组、ATP组和NGF组。用噻唑盐比色法(MTT)、乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞活性变化,流式细胞仪术、透射电镜检测细胞凋亡率和凋亡。结果与对照组比较,缺氧组神经元细胞活性明显降低,细胞凋亡率显著增加;ATP和NGF能明显改善缺氧对神经元细胞活性的影响,细胞凋亡率降低(P<0.05);与NGF组比较,ATP组神经元细胞活性增高,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论缺氧能够造成大鼠大脑皮质神经元的损伤并诱导其凋亡,ATP及NGF对缺氧复氧后大脑皮质神经元有保护作用。