A UFLC/MS/MS method for simultaneous quantitation of alisol A and alisol B 23-acetate from Alisma orientale (Sam.) Juz. in rat plasma

A sensitive and reliable ultra fast liquid chromatography tandem mass spectrometry (UFLC-MS/MS) method has been developed and validated for simultaneous quantitation of alisol A and alisol B 23-acetate from Alisma orientale (Sam.) Juz. in rat plasma using diazepam as an internal standard (IS). The plasma samples were extracted by liquid–liquid extraction with methyl tert-butyl ether and separated on a Venusil MP C18 column (100 mm × 2.1 mm, 3.0 mm) (Venusil, China) using gradient elution with the mobile phase consisting of methanol and 0.1% acetic acid in water at a flow rate of 0.4 ml/min. The two analytes were monitored with positive electrospray ionization by multiple reaction monitoring mode (MRM). The lower limit of quantitation was 5.00 ng/ml for alisol A and 5.00 ng/ml for alisol B 23-acetate. The calibration curves were linear in the range of 5.00–2500 ng/ml for alisol A and 5–2500 ng/ml for alisol B 23-acetate. The mean extraction recoveries were above 63.8% for alisol A and 68.0% for alisol B 23-acetate from biological matrixes. Both intra-day and inter-day precision and accuracy of analytes were well within acceptance criteria (15%). The validated method was successfully applied to the pharmacokinetic study of alisol A and alisol B 23-acetate in rat plasma after oral administration of alcohol extract of Alismatis Rhizoma.     

基于UFLC-Q-TOF-MS/MS技术及PCA分析的不同产地杏香兔耳风药材差异研究

该研究建立UFLC-Q-TOF-MS/MS技术结合多元统计分析法快速、简便、准确鉴别不同产地杏香兔耳风药材差异性的方法。采用超高速液相-飞行时间串联质谱仪(UFLC-Q-TOF-MS/MS)对江西、云南、江苏和河南地区等产地的杏香兔耳风药材进行检测,质谱采用ESI源的负离子模式,利用Markerview等软件对数据结果进行PCA和OPLS-DA聚类分析及t检验。结果显示在负离子模式下不同产地的药材主成分得到了良好的区分,聚类结果同时体现了杏香兔耳风药材在地域间的差异性和相似性,共鉴定出40种差异成分。该研究建立的鉴别杏香兔耳风药材产地差异性的方法具有快速准确和简便等优势,为杏香兔耳风不同产地的药材质量评价奠定了基础。     

Rapid and highly sensitive analysis of benzodiazepines and tandospirone in human plasma by automated on-line column-switching UFLC-MS/MS

A high-throughput method was developed for the detection of 31 benzodiazepine drugs and tandospirone in human plasma by on-line column-switching ultra-fast liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Plasma samples (100 μl) spiked with the 32 drugs and oxazepam-d₅ (internal standard) were diluted with 300 μl of 13.3 mM ammonium acetate/acetonitrile (33:67, v/v). After centrifugation and filtration, the clear supernatant was injected directly onto the extraction column (Oasis HLB cartridge column). The following procedure was fully automated. The analytes retained on the extraction column were eluted by backflushing of the extraction column and introduced into an analytical column (SUMIPAX ODS D-Swifter column, 30 mm × 3.0 mm i.d.; particle size 2 μm) by column switching. Quantification was performed by multiple reaction monitoring with positive-ion electrospray ionization. Distinct peaks appeared for each drug and the internal standard on each channel within 7 min, including the extraction time. All drugs spiked into plasma showed recoveries of 83–95%. The regression equations for the 32 drugs showed excellent linearities in the range of 50–2000 pg/ml of plasma and the limits of detection ranged from 20 to 50 pg/ml. The lower and upper limits of quantitation were 50–100 ng/ml and 2000 pg/ml, respectively. Intra- and interday coefficients of variation for none of the drugs were greater than 13.6%. The accuracies of quantitation were 87–112%. The multiple reaction monitoring information-dependent acquisition of enhanced product ions method enabled the quantification and confirmation of diazepam, triazolam, and lorazepam obtained from actual plasma.     

UFLC-MS/MS法同时测定宁泌泰胶囊中没食子酸、连翘苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和槲皮素在大鼠血浆中的含量

目的建立同时测定大鼠ig宁泌泰胶囊后血浆中没食子酸、连翘苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和槲皮素5种成分的超快速液相色谱串联质谱(UFLC-MS/MS)方法。方法大鼠ig宁泌泰胶囊(1.5、4.0g/kg)或iv没食子酸、连翘苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和槲皮素5种成分的混合溶液,采集不同时间点的血样。采用甲醇沉淀血浆蛋白,以乙酰对氨基酚为内标,进行UFLC-MS/MS分析。结果没食子酸、连翘苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和槲皮素5种成分在大鼠血浆中呈良好的线性关系。方法学考察均符合要求,日内、日间精密度RSD≤15%,稳定性良好,准确度为90.60%～113.50%,提取回收率为73.77%～94.86%,基质效应为83.80%～106.17%。结论建立的UFLC-MS/MS方法可以快速、灵敏地检测生物样品中没食子酸、连翘苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和槲皮素的血药浓度,可以用于宁泌泰胶囊中5种成分的药动学研究。     

基于液质联用技术对不同产地淡豆豉核苷和氨基酸类成分的分析

目的:建立液质联用技术同时测定不同产地淡豆豉中38种核苷和氨基酸类含量的方法。方法:采用超快速液相色谱和三重四极杆-线性离子阱串联质谱以及亲水色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm),流动相0.2%甲酸水-0.2%甲酸乙腈梯度洗脱,流速0.6 m L·min-1,采用电喷雾正离子化及多反应监测模式(MRM),对安徽、江苏、河南3个产区不同采收期共8个批次淡豆豉中的22种氨基酸类和16种核苷类成分进行含量测定;并对结果进行PCA-DA聚类分析及t检验。结果:所建方法使淡豆豉中22种氨基酸类和16种核苷类成分得到较好分离,浓度与峰面积呈良好的线性关系,加样回收率在93.74%~104.32%,RSD在0.6%~3.5%;8个批次样品基本可以测得22种氨基酸类和16种核苷类成分,各批次间核苷与氨基酸的含量都有明显差异,总氨基酸质量分数在7.241~34.21 mg·g-1,总核苷质量分数在14.21~82.53 mg·g-1;不同产地样品的氨基酸含量高低排序为安徽产江苏产河南产,不同产地样品的核苷含量高低排序为江苏产与安徽产河南产,同一产地贮存时间短的样品总氨基酸和总核苷含量也高于贮存时间长的。结论:该方法适用于38种核苷和氨基酸类成分含量的同时测定,比较了不同产地淡豆豉的差异性,在一定程度上反应了不同产区间淡豆豉的质量优劣,为后续药效活性研究提供参考。     

超快速液相色谱-质谱/质谱联用法测定丁螺环酮制剂中丁螺环酮含量

目的:建立简单超快速液相色谱-质谱/质谱联用法(UFLC-MS/MS)测定丁螺环酮制剂中丁螺环酮的含量。方法:样品以水提取、微孔滤膜滤过、离心后,通过电喷雾离子化(ESI),用于定量分析的检测离子为m/z 386.4→122.0。采用Shim-pack XR-ODS柱分离,以甲醇-水-甲酸(V∶V∶V=80∶20∶0.2)为流动相,在2 min内完成丁螺环酮定量分析。结果:线性范围为0.05～100 ng·mL-1,最低检测限为0.05 ng·mL-1。结论:本方法重复性好、灵敏度高、分析速度快、操作简单,可作为丁螺环酮制剂中丁螺环酮的质量控制方法。     

QTRAP-UFLC-MS/MS同时测定不同产地番荔枝子中氨基酸和核苷类成分的含量及PCA和TOPSIS分析

目的建立超快速液相色谱-串联四级杆/线性离子阱质谱(QTRAP-UFLC-MS/MS)同时测定不同产地番荔枝子中氨基酸和核苷类成分含量的方法,分析比较不同产地样品中25种成分的差异,为番荔枝子资源的综合利用提供科学依据。方法采用Waters XBridge Amide色谱柱(100 mm×2.1 mm,3.5μm);以0.2%甲酸水(A)-0.2%甲酸乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,体积流量0.6 m L/min;柱温30℃,正离子多反应监测(MRM)模式测定。采用主成分分析(PCA)和TOPSIS分析对不同产地番荔枝子进行综合性评价。结果 15种氨基酸和10种核苷类成分的浓度与峰面积呈良好的线性关系(r~20.994 7);方法精密度、重复性和稳定性的RSD值均小于3.87%;平均加样回收率在94.90%~98.78%,RSD在0.84%~3.01%。不同产地番荔枝子中氨基酸和核苷类成分存在一定的差异性,其中海南产的综合质量最高。结论该方法简便、准确、可靠,可根据目标成分优选不同产地的番荔枝子,也为其质量评价提供了可靠的依据。     

UFLC-MS法同时测定木瓜饮片中8种有机酸

目的建立同时快速测定木瓜饮片中莽草酸、柠檬酸、原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、肉桂酸、齐墩果酸、熊果酸8种有机酸的超高速液相色谱-质谱(UFLC-MS)分析方法。方法采用岛津LC-20A快速液相系统,AB Sciex Qtrap 5500型三重四级杆线性离子阱质谱仪,Poroshell 120色谱柱(100 mm×4.6 mm,2.7μm);流动相为0.5%醋酸水溶液(A)-0.5%醋酸甲醇溶液(B),梯度洗脱:0~5 min,10%A;5~13 min,10%~30%A;13~15 min,30%~95%A;15~25 min,95%A;分析时间25 min;体积流量0.6 m L/min;柱温30℃;进样量2μL。采用电喷雾离子源进行负离子模式检测,多反应监测模式(MRM)用于定量分析,源喷射电压为-4 500 V,离子源温度为550℃。结果测定的8种成分在线性范围内均具有良好的线性关系(r≥0.999 2),平均回收率在96.14%~101.20%。不同产地的木瓜饮片中8种成分的量差异较大,其中,柠檬酸、绿原酸、莽草酸的量较高,咖啡酸的量最低。结论建立的测定方法重复性好,且快速、灵敏度高,可为木瓜饮片的质量控制提供依据以及方法学支持。     

超快速液相色谱-串联质谱法测定牛蛙全血中3种酚类环境雌激素

目的:建立一种快速、灵敏、准确的牛蛙全血样品中双酚A、4-叔辛基酚和4-壬基酚的超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)测定方法。方法:牛蛙全血样品采用蛋白质沉淀法进行净化处理,在Shim-pack XR-ODSⅡ(100 mm×2.0 mm i.d.,2.2μm)反相液相色谱柱上进行分离,采用电喷雾离子源(ESI)以高纯氮气(>99.999%)为碰撞气在多反应监测(MRM)模式下进行检测。结果:3种酚类环境雌激素在0.5μg/L～100.0μg/L范围内具有良好的线性(R2>0.999),检出限在0.07μg/L～0.15μg/L范围,最低定量限在0.20μg/L～0.46μg/L范围,RSDs在3.9%～8.2%范围;在加标水平为1.0μg/L、10.0μg/L和50.0μg/L时,3种酚类环境雌激素在牛蛙全血中的回收率分别在97%～106%、93%～109%、94%～96%范围。结论:本方法可用于牛蛙全血样品中酚类环境雌激素的测定。     

人参水提取物中的人参三萜在人肠内菌体外温孵体系的转化研究

目的:研究人参水提取物中的人参三萜在人源肠内细菌作用下的生物转化。方法:将人参水提取物中人参三萜样品与人源肠内细菌进行温孵培养,采用超快速液相色谱-质谱/质谱法(UFLC-MS/MS)进行定性定量分析,确定人肠内细菌转化前后人参皂苷的动态变化。通过人参三萜种类和含量的变化,总结原人参二醇(PPD)型、原人参三醇(PPT)型和齐墩果烷(OLE)型人参三萜在人肠内细菌作用下的转化途径。结果:与对照品比对,共鉴定了49个化合物。人参皂苷在肠内细菌的作用下以脱糖基转化为主,其中人肠内细菌对PPD型人参皂苷的转化能力要明显强于对PPT型人参皂苷的转化能力,尤其是人参皂苷化合物K和20(S)-PPD的含量上升明显,甚至能达到初始值的数十倍;随着温孵时间的延长,含有乙酰基的人参皂苷含量迅速下降。结论:人参皂苷经人肠内细菌生物转化后更利于其吸收进入系统循环,为人参皂苷在体的吸收代谢和生物学活性发挥提供了参考。