基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的]基于中医"通肾络、益脾肾"治法,探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法]成熟无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠40只,随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度:高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/m L,灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组,正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集,Hoechst33342荧光染色,观察各组足细胞凋亡状况及形态变化;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果]流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率(P0.01或P0.05),高剂量组不能改善凋亡情况(P0.05);Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率;蛋白印迹结果显示,与高糖组相比,通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高,自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降(P0.05或P0.01),高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变(P0.05)。[结论]中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡,降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

通络胶囊治疗偏头痛的临床与实验研究

认为正气不足、病理体质为偏头痛的发病基础 ,以气血失调为主 ,寒热虚实错杂是本病的基本病机。据此确立扶正固本、祛风活络、化瘀止痛的治疗原则 ,拟通络胶囊治疗偏头痛 30例 ,与太极通天液治疗 30例对照 ,结果表明 ,治疗组愈显率 83.33% ,总有效率 93.33% ,与对照组相比有显著性差别 (P<0 .0 1) ,在改善兼症方面亦优于对照组 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,并能改善患者颅内血管功能状态。动物实验表明 ,通络胶囊能提高实验动物痛阈 ,同时提高大鼠下丘脑 5 - HT及 β-内啡呔水平 ,并能改善大鼠软脑膜微循环。     

基于UPLC对龙血通络胶囊特征图谱及5个成分含量的测定

目的 建立龙血通络胶囊超高效液相色谱法（UPLC）特征图谱,并测定7,4′-二羟基黄酮、4,4′-二羟基-2,6-二甲氧基二氢查耳酮、龙血素A、龙血素B、紫檀芪5个成分的含量。方法 采用Agilent Infinity Lab Poroshell 120 EC-C₁₈色谱柱（150 mm×3.0 mm,2.7 μm）,以乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）为流动相梯度洗脱,柱温为35 ℃,流速为0.5 mL·min^–1,进样体积为2 μL,检测波长为280 nm。结果 建立了龙血通络胶囊UPLC特征图谱,标定了13批样品中的11个共有特征峰,相似度均大于0.95。5个成分在相应质量浓度范围内呈良好的线性关系（r>0.999 5）,加样回收率为97.93%~107.33%,RSD均小于3.0%。结论 建立的UPLC操作简便、高效准确,可为龙血通络胶囊的质量控制提供参考。     

Neuroprotective effects of Longxue Tongluo Capsule on ischemic stroke rats revealed by LC-MS/MS-based metabolomics approach

Objective: The present study aimed to evaluate the therapeutic effect and explore the underlying mechanisms of Longxue Tongluo Capsule (LTC) on ischemic stroke rats. Methods: Twenty-six rats were randomly divided into four groups, including sham group, sham + LTC group, MCAO group, and MCAO + LTC group. Ischemic stroke rats were simulated by middle cerebral artery occlusion (MCAO), and LTC treatment group were orally administrated with 300 mg/kg of LTC once daily for seven consecutive days. LTC therapy was validated in terms of neurobehavioral abnormality evaluation, cerebral infarct area, and histological assessments. The plasma metabolome comparisons amongst different groups were conducted by UHPLC-Q Exactive MS in combination with subsequent multivariate statistical analysis, aiming to finding the molecules in respond to the surgery or LTC treatment. Results: Intragastric administration of LTC significantly decreased not only the neurobehavioral abnormality scores but also the cerebral infarct area of MCAO rats. The interstitial edema, atrophy, and pyknosis of glial and neuronal cells occurred in the infarcted area, core area, and marginal area of cerebral cortex were improved after LTC treatment. A total of 13 potential biomarkers were observed, and Youden index of 11 biomarkers such as LysoPC, SM, and PE were more than 0.7, which were involved in neuroprotective process. The correlation and pathway analysis showed that LTC was beneficial to ischemic stroke rats via regulating glycerophospholipid and sphingolipid metabolism, together with nicotinate and nicotinamide metabolism. Heatmap and ternary analysis indicated the synergistic effect of carbohydrates and lipids may be induced by flavonoid intake from LTC. Conclusion: The present study could provide evidence that metabolomics, as systematic approach, revealed its capacity to evaluate the holistic efficacy of TCM, and investigate the molecular mechanism underlying the clinical treatment of LTC on ischemic stroke.     

益气通络方对大鼠短暂性脑缺血后海马DND的保护作用

目的 :探讨益气通络方对大鼠短暂性脑缺血后海马迟发性神经元死亡 (DND)的保护作用及其机制。方法 :用Pulsinelli四血管闭塞法制作全脑缺血模型。实验动物随机分为假手术对照组、脑缺血加生理盐水组和脑缺血加益气通络方组。缺血再灌 3天后进行HE染色、TUNEL染色。结果 :①HE染色 ,光镜下观察CA1区组织病理学变化 ,并用显微测微尺测量CA1区存活锥体细胞密度 (存活锥体细胞的个数 /mm) ,表明益气通络口服液组 ( 1 1 4 .5± 1 9.0 )与生理盐水组 ( 1 0 .5± 3.0 )比较 ,P <0 .0 1。②TUNEL染色 ,光镜下假手术组未见阳性结果 ,缺血再灌流加生理盐水组CA1区大部分锥体神经元发生凋亡 ( 1 2 4 .0± 1 1 .5) ,益气通络方组CA1区凋亡的锥体神经元明显减少 ( 2 4 .5± 3.0 ) ,存活细胞增多。结论 :益气通络方能够显著降低大鼠短暂性脑缺血后海马迟发性神经元死亡 ,抑制细胞凋亡可能是其临床疗效的机制之一。     

葛根通络饮治疗糖尿病脑梗死36例临床观察

目的:观察中药葛根通络饮治疗糖尿病性脑梗死的临床疗效.方法:将72例糖尿病脑梗死患者随机分为治疗组36例,对照组36例,对照组采用常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加服葛根通络饮,于治疗前后观察临床疗效,并检测血糖、血脂和血液流变学参数.结果:治疗组总有效率94.44%,对照组为72.22%,差异有显著性(P＜0.05);治疗组显效率63.89%,明显高于对照组(36.11%,P＜0.05).治疗组神经功能缺损有明显改善(P＜0.01),血糖、血脂和血液流变学参数均有明显改善(P<0.05或P<0.01).结论:葛根通络饮与常规治疗合用对糖尿病脑梗死有显著疗效.     

化痰通络汤对脑缺血/再灌注大鼠“肠-脑”轴的干预作用

目的 基于“肠-脑”轴探讨化痰通络汤（HTTLD）对大鼠脑缺血再灌注后脑组织和肠道形态和功能的影响。方法 将60只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组，模型组，HTTLD高、中、低剂量组（28.66，14.33，7.16 g·kg^-1），依达拉奉（4 g·kg^-1）+丁酸梭菌（5.0×10⁸ cfu·mL^-1）组，采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，灌胃给药HTTLD，神经功能缺损评分和2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC）染色法测定脑组织损伤，小肠推进率观察脑缺血再灌注对肠道动力的影响，十二指肠黏膜的病理形态学检测评价肠黏膜细胞损伤，酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清D-乳酸（D-LAC），二胺氧化酶（DAO），细菌内毒素（LPS）含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测十二指肠的闭合蛋白（Occludin），紧密连接蛋白-5（Claudin-5），闭锁小带蛋白-1（ZO-1）蛋白的表达。结果 脑缺血再灌注后，大鼠出现神经功能缺损症状，与假手术组比较，模型组神经功能缺损评分显著升高（P<0.01）；与模型组比较，HTTLD中、高剂量组能显著减少神经功能缺损症状，降低神经功能缺损评分（P<0.01）。与假手术组比较，模型组大鼠脑组织出现明显梗死灶，脑梗死率显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各给药组脑梗死体积明显减少（P<0.01），以HTTLD高剂量组的效应最佳，且效应具有剂量依赖性。小肠推进率结果显示，与假手术组比较，模型组小肠推进率显著降低（P<0.01）；与模型组比较，各给药组能显著升高小肠推进率（P<0.01），以HTTLD高剂量效应最佳，且效应具有剂量依赖性。十二指肠黏膜组织病理学检测显示，脑缺血再灌注后十二指肠黏膜可见明显损伤，各给药组黏膜损伤情况明显减轻。与假手术组比较，模型组ZO-1，Occludin，Claudin-5蛋白表达均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，HTTLD低、中、高剂量组能不同程度上调ZO-1，Occludin，Claudin-5蛋白表达（P<0.05，P<0.01），以高剂量组的效应最为显著。与假手术组比较，模型组血清D-LAC，DAO，LPS蛋白含量均显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各给药组D-LAC，DAO含量均明显降低（P<0.05，P<0.01），HTTLD中、高剂量组明显降低LPS含量（P<0.05，P<0.01），且HTTLD高剂量组的作用最明显。结论 脑缺血再灌注后，大鼠脑组织受损、出现神经功能障碍，同时肠道黏膜损伤、肠道蠕动减弱和肠道黏膜屏障破坏。HTTLD能减少脑组织和胃肠道黏膜损伤，减轻神经功能缺损症状，提高胃肠道动力、改善肠道屏障功能、减少肠道细菌代谢产物和毒物的释放，从而发挥对脑缺血再灌注后“脑-肠”轴损伤的保护作用。     

通脉汤治疗脑中风疗效观察

目的：评价通脉汤在治疗脑卒中患者的疗效和安全性。方法：将90例脑卒中中患者随机分成2组，即实验组和对照组。在两组都采用基本药物治疗的基础上，实验组采用通脉汤的治疗方法治疗45例，对照组采取常规益脑通络汤45例。经过1个月的治疗疗程，观察疗效。通过x2检验的统计学方法，对两组的疗效进行统计学分析。结果：在90例患者中，通脉汤治疗组的治疗疗效和洼田氏饮水试验评级均好于对照组。经x2检验，通脉汤治疗组的有效率明显高于对照组，P值为0.005。结论：药物治疗加通脉汤治疗脑卒中患者的效果明显好于单独使用益脑通络汤治疗的有效率。     

胆闭通络方对幼鼠阻塞性黄疸FPA及D-二聚体的影响

目的探讨胆闭通络方对幼鼠阻塞性黄疸FPA及D-二聚体(D-D)影响。方法将SD大鼠幼鼠分为3组,第1组为正常对照组,予生理盐水灌胃,第2组为模型组,采用2%α-萘异硫氰酸酯(ANIT)及生理盐水灌胃,第3组为治疗组,在造模同时予胆闭通络方灌胃,每日1次,连续7d。以分光光度仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酶氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、血清总胆红素(TB)含量;双抗体夹心法测定大鼠血清血纤肽/纤维蛋白肽A(FPA)及D-D水平。结果与模型组比较,治疗组血清TB、ALT、AST、AKP、r-GT降低(P0.05);与对照组比较,模型组及治疗组血清FPA及D-D显著增高(P0.05);与模型组比较,治疗组血清FPA及D-D降低(P0.05)。结论胆闭通络方能抑制FPA及D-D产生,减少肝内微血栓的形成,缓解肝脏瘀血。     

益气活血通络方治疗冠心病疗效及其对血管内皮功能和免疫调节的影响

【目的】探讨益气活血通络法治疗冠心病的疗效以及对血管内皮功能、免疫调节的影响。【方法】将82例冠心病患者随机分为治疗组和对照组各41例,对照组给予常规西药治疗,治疗组在对照组基础上加服益气活血通络方,比较2组心绞痛疗效、心电图疗效和临床症状疗效,观察2组治疗前后血浆血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素-1(ET-1)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-1β(IL-1β)等指标的变化情况。【结果】(1)治疗后,2组心绞痛疗效及心电图疗效比较,差异无统计学意义(P>0.05);临床症状疗效方面,治疗组优于对照组(P<0.05)。(2)治疗后,治疗组VEGF含量显著升高,ET-1含量显著下降(P<0.01);对照组治疗前后VEGF、ET-1含量比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗组在改善VEGF、ET-1含量方面均显著优于对照组(P<0.01)。(3)治疗后,治疗组hs-CRP、IL-1β含量均显著下降(P<0.01);对照组hs-CRP、IL-1β含量均有下降趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05);治疗组在改善hs-CRP、IL-1β含量方面均显著优于对照组(P<0.01)。【结论】对冠心病心绞痛患者,在常规西药治疗的基础上加用益气活血通络法治疗,能更好地达到缓解心绞痛、改善临床症状的目的,这可能与其改善血管内皮功能和免疫调节功能等有关。