基于高通量测序的人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化转录组分析

目的:探索人工培殖冬虫夏草Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.外观品质形成的分子基础。方法:以重庆和康定人工培殖冬虫夏草僵虫为材料,利用Illumina Hiseq 2500高通量测序技术进行转录组测序分析,基于差异倍数(FC)和错误发现率(FDR)筛选差异表达基因,具体筛选条件为|log2FC|>1、FDR<0.05。结果:共获得21942个转录本,利用DEGSeq筛选获得1575个差异表达基因,其中上调表达基因626个、下调表达基因949个;基因本体(GO)数据库和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析结果显示,这些差异表达基因主要集中于氨基酸代谢、折叠-分选-降解、糖代谢、转运和分解代谢、辅酶因子和微生物代谢等途径;筛选到66个颜色变化差异表达基因,包含46个氧化还原酶活性相关基因、12个过氧化物酶体相关基因、3个单加氧酶活性调节相关基因、3个黑化反应相关基因、2个活性氧代谢相关基因,其中tyr1、TYR基因可能是冬虫夏草僵虫颜色变化的关键功能基因。结论:利用高通量测序技术和生物信息分析获得了人工培殖冬虫夏草僵虫转录组信息特征,为阐明人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化的调控机制研究提供参考。     

真菌诱导子对胡桐悬浮培养细胞产生红厚壳素的影响

目的探讨真菌诱导子对胡桐悬浮培养细胞产生红厚壳素的影响。方法通过对胡桐叶斑病病菌的分离培养,制成真菌诱导子补加到胡桐细胞悬浮培养基中,考察不同浓度、不同加入时间对胡桐细胞生物量及红厚壳素产量的影响。结果S-I菌株诱导胡桐CR2细胞合成红厚壳素的最佳浓度为60 mg GE·L^-1,诱导子在细胞生长静止期初期(即培养d 18)加入对红厚壳素产量影响最大,可使产量提高27%,并促进了红厚壳素向胞外分泌。结论 壳多孢菌的添加能有效提高胡桐细胞悬浮培养体系中红厚壳素的产量。     

冬虫夏草中砷及其安全性评价研究进展

传统名贵中药冬虫夏草Cordyceps sinensis中砷超标及其安全性问题近年来备受关注,针对冬虫夏草中砷的研究逐渐增加并不断深入。在文献查阅的基础上,从冬虫夏草砷及砷形态的分析方法,砷的含量、分布、存在形态,安全性评价,以及野生和人工仿生繁育冬虫夏草中砷含量等方面进行归纳总结,并对冬虫夏草中砷的认知及研究进行展望,以期为冬虫夏草安全性评价的深入研究提供参考。     

冬虫夏草抗肿瘤及免疫调节作用的研究进展

冬虫夏草为我国传统名贵中药,具有抗肿瘤、降血脂、免疫调节、祛痰、平喘、抗心律失常、保护肝肾功能等多种药理学作用。随着对冬虫夏草免疫机制的深入研究,为其作为抗肿瘤药物提供了有力证据。综述了冬虫夏草及其活性成分对黑色素瘤、甲状腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤的抑制作用,主要从吞噬细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞、B/T淋巴细胞以及促进细胞因子的分泌等几个方面探讨冬虫夏草对其免疫活性的影响。其免疫调节的作用机制主要通过T淋巴细胞介导的细胞免疫应答和B/T淋巴细胞介导的体液免疫应答。     

冬虫夏草cDNA-AFLP银染法显带研究

目的探讨影响冬虫夏草扩增片断长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP）的主要因素,建立并优化冬虫夏草AFLP反应体系。方法变性裂解液法提取冬虫夏草基因组cDNA,分别用一步法和两步法进行酶切与连接,再进行预扩增、选扩后,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染检测。结果本研究建立适用于冬虫夏草的AFLP体系：用乙醇沉淀cDNA,建立的模板不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂,可被限制性内切酶MseI和EeoRI完全酶切;确定两步法进行酶切、连接,酶切时间为37℃3h,连接时间为16℃过夜,缓冲液选用NEB公司buffer2;选择性扩增后的银染显色在10℃以下。结论本研究建立的反应体系适用于冬虫夏草基因组cDNA的AFLP银染法显带研究。     

毛木耳多糖对小鼠腹腔巨噬细胞蛋白激酶A活性的影响

目的：观察毛木耳多糖（APSP）体外对小鼠腹腔巨噬细胞（MΦ）蛋白激酶A（PKA）活性的影响。方法：采用反相离子对高效液相色谱法,测定MΦ中PKA活力。结果：毛木耳多糖（80mg.L^-1)能引起小鼠腹腔MΦA中PKA活性明显升高,8min表峰值,20min恢复到基础水平,8min毛木耳多糖与PKA活性担效关系具有一定的浓度依赖性。结论：毛木耳多糖的免疫增强作用与其增强MΦ中PKA活性有关。     

广金钱草根腐病病原生物学特性研究

目的:研究温度、pH、培养基、碳源和光照对广金钱草茄病镰刀菌生长、产孢以及孢子萌发的影响。方法:设置不同处理,每处理接3个平板,每项实验重复3次。结果:茄病镰刀菌生长温度范围为12～37℃,最适为20～30℃。茄病镰刀菌在pH3.0～14.0范围内均能生长,最适pH为9.0～11.0。PDA、PSA、OMA和Czapek培养基对茄病镰刀菌生长影响不显著,但对孢子萌发率有较大影响,在Czapek培养液中孢子萌发率最高。不同碳源Czapek培养基上茄病镰刀菌生长和孢子萌发率明显不同,以蔗糖和麦芽糖为碳源的培养基菌落扩展最快,其次是葡萄糖和乳糖,果糖最差,同时以果糖、葡萄糖、麦芽糖和蔗糖为碳源的Czapek培养液孢子萌发最高,而乳糖较低。光照对茄病镰刀菌菌丝生长没有影响,但有利于产孢。     

环介导等温扩增法鉴定检测冬虫夏草

目的建立冬虫夏草的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,实现对冬虫夏草的快速检测。方法针对冬虫夏草的CS2 serine protease(csp2)基因设计LAMP内外引物对;利用CTAB法提取冬虫夏草DNA;优化扩增反应条件;采用包括冬虫夏草在内的6种不同虫草进行LAMP扩增,并对阳性产物酶切鉴定以检测其特异性,通过对模板DNA的10倍梯度稀释检测其灵敏度;紫外灯下观察凝胶电泳或加入荧光染料SYBR Green I的扩增产物。结果设计的LAMP引物可以特异地针对冬虫夏草的csp2基因进行LAMP扩增,产物可被限制性内切酶Taq1酶切,且有较高的灵敏度,检出限达6 pg/mL。结论 LAMP法可以实现对冬虫夏草的快速鉴定检测,在中药鉴定中有着广阔的应用前景。     

毛木耳多糖对小鼠腹腔巨噬细胞蛋白激酶C活性的影响

目的　观察毛木耳多糖 (APSP)体外对小鼠腹腔巨噬细胞 (Mφ)蛋白激酶C(PKC)活性的影响。 方法　采用反相离子对高效液相色谱法测定PKC活力。结果　APSP (80mg·L-1)能引起小鼠腹腔Mφ中PKC活性明显升高 ,2 0min达峰值 ,1.5h恢复到基础水平 ,并可引起Mφ中PKC发生质膜转位。 结论　毛木耳多糖的免疫增强作用与其增强PKC活性有关     

冬虫夏草抗小鼠运动性疲劳的作用及机制研究

目的　观察冬虫夏草 (虫草 )抗疲劳作用并探讨其机制。方法　小鼠随机分为运动对照组和虫草低、高剂量组。虫草组每天虫草混悬液灌胃 ,对照组给予等量生理盐水。 14天后 ,观察小鼠的负重游泳时间和常压耐缺氧时间 ,并测定小鼠血清乳酸浓度、糖原含量、肌红蛋白 (Mb)、乳酸脱氢酶 (LDH)及丙二醛 (MDA)含量。结果　与对照组比较 ,虫草组的负重游泳时间和常压耐缺氧时间均显著延长 (P <0 .0 1) ;LDH活力增高 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;糖原贮备增加 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;Mb和MDA含量降低明显 (P <0 .0 1)。结论　虫草具有增强小鼠运动能力和抗疲劳作用 ,其机制可能与虫草增加能源和氧储备及抗氧化有关。