常用炮制对滇产草乌3种乌头碱减毒情况分析

目的 利用几种常规的炮制方法分析草乌中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的减毒情况。方法 将大小形状不同的草乌样品分别经过水煮法、蒸法及烘烤法进行不同时长炮制,采用超高效液相色谱串联质谱进行含量测定分析,外标法定量。结果 3种乌头碱在0.20～100.0μg/L浓度范围内均具有良好的线性关系,相关系数均大于0.9997。草乌不同形状减毒效果为粉末＞片状＞完整个头,不同炮制方法减毒效果为水煮＞蒸＞烘烤,烘烤炮制对草乌样品未有良好减毒效果。浓度为1.0μg/mL的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱标准品分别经过0.5h、1.5h和1.5h水煮炮制可达到100%完全降解,但其他炮制样品的减毒效果根据不同的炮制方法显现出较大差异性。结论 3种乌头碱经过足够时长的水煮及蒸法炮制均可达到显著的减毒效果,烘烤法对草乌减毒作用较小,民间食用草乌的安全性应引起高度重视。     

乌头碱、新乌头碱及次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响

目的：探讨乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响。方法分离的成年Sprague-Dawley大鼠左心室心肌细胞分别使用0.3、1、3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液灌流12 min,灌流后4、8、12 min时检测自发性钙释放(SCR)诱发率以及舒张末期钙浓度(F0)、钙瞬变幅度(ΔF)的变化。检测灌流0.3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液后12 min,心肌细胞发挥正性肌力作用时钙瞬变和收缩功能动力学指标的变化。结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可诱发SCR,0.3μmol/L时新乌头碱SCR诱发率最高,3μmol/L时乌头碱SCR诱发率最高。与对照组比较,给药后12 min,3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可增加 F0[(1.459±0.379)、(1.585±0.493)、(1.213±0.254)比(1.079±0.108)]、ΔF[(1.615±0.455)、(2.210±0.756)、(1.528±0.422)比(1.036±0.125)],差异有统计学意义(P均＜0.05);且新乌头碱ΔF高于乌头碱和次乌头碱(P均＜0.05)。与对照组比较,0.3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可增加ΔF[(0.409±0.127)、(0.423±0.107)、(0.414±0.118)比(0.260±0.065);P＜0.05或P＜0.01]、收缩幅度[(5.464±2.239)%、(7.449±2.548)%、(5.524±1.645)%比(3.428±0.911)%;P＜0.05或 P＜0.01],延长钙瞬变达峰时间[(0.041±0.016)s、(0.039±0.009)s、(0.038±0.011)s 比(0.032±0.007)s;P＜0.05或P＜0.01];与乌头碱组比较,新乌头碱和次乌头碱可降低钙瞬变消除时间常数[(0.301±0.054)s、(0.324±0.064)s 比(0.361±0.076)s;P＜0.05或P＜0.01],缩短舒张期收缩恢复至50%时的时间[(0.124±0.035)s、(0.126±0.040)s 比(0.157±0.056)s;P＜0.05或 P＜0.01]。结论乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的正性肌力作用与毒性效应同时存在,表明心肌细胞内钙浓度升高是产生正性肌力作用的有利因素,也是诱发SCR的危险因素。     

川乌中总生物碱提取工艺优化研究

目的:优选川乌药材中总生物碱的最佳提取工艺。方法:采用L9(34)正交法,以提取物得率和乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的含量为考察指标,并用RP-HPLC法测定三种生物碱的含量,流动相为甲醇-水-氯仿-二乙胺(70∶30∶2∶0.1)。结果:筛选出的最佳提取工艺为药材用氨试液浸润,加入15倍乙醚溶剂,冷浸24h。结论:该实验提取工艺合理、科学。     

HPLC测定蒙药草乌中药效组分含量

目的：建立以高效液相色谱法同时测定蒙药草乌中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法。方法：Ex-tend-C18（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇-0.3mol·L^-1三乙胺（65∶35）,流速为0.8mL·min^-1,检测波长为235nm,柱温为35℃。结果：乌头碱、次乌头碱、新乌头碱分别在0.35～1.75μg,0.5～2.5μg,1～5μg呈良好的线性关系。结论：本方法简便、准确、分离效果好、线性范围宽、灵敏度高,可用于本品的质量控制。     

不同物理因子对新乌头碱体外透皮吸收的影响

目的观察不同物理因子促新乌头碱(MA)透皮吸收的效果,同时测定新乌头碱透入量与作用时间的关系。方法首先采用高效液相色谱法(HPLC)建立新乌头碱的色谱峰(Y)与含量(X,μg)的标准曲线。选取成年大鼠28只,将其随机分成4组(每组7只)。各组大鼠分别在直流电场、低频脉冲电场、超声场及自由透皮条件下进行离体鼠皮的透皮吸收实验。分离各组大鼠背部皮肤,建立离体透皮吸收模型,采用V-C渗透池,将离体鼠皮置于供药池及接受池之间,角质层面向供药池侧。以含生药3 g／ml浓度的生川乌提取液作为释放液,生理盐水作为接受液。各组分别于实验开始后10,20,30,40及50 min时从接受液中取样,根据已求得的Y-X标准曲线测定各取样液中新乌头碱的浓度以及各时间点(t,min)新乌头碱的累积渗透量(Q,μg／cm2)。通过Q-t曲线图求得新乌头碱体外透皮吸收的渗透速率(J,μg·cm-2·min-1),并以此为参数观察不同物理因子干预条件下新乌头碱的透皮吸收状况以及药物透过量与时间的关系。结果在新乌头碱体外透皮吸收实验开始后50 min内,检测到自由透皮组、超声促透组、脉冲电促透组、直流电促透组的渗透速率J分别为4．168, 6．111,12．268及12．623μg·cm-2·min-1;对各组的曲线渗透速率进行统计学分析,发现超声促透组和自由透皮组间差异无统计学意义(P>0．05);脉冲电促透组、直流电促透组分别与自由透皮组比较,发现其间差异均有统计学意义(P<0．05);直流电促透组与脉冲电促透组比较,其间差异无统计学意义(P>0．05)。在整个实验过程中,各组新乌头碱的累积渗透量均呈持续性增长。结论在体外透皮吸收过程中,超声对新乌头碱的促透作用不大,直流电和脉冲电的促透作用较明显;直流电与脉冲电促透作用两者间比较,发现差异无统计学意义(P>0．05);各组自实验开始后50 min内,其新乌头碱的透皮量均随时间延长而持续增多。     

元秦止痛注射液中酯型乌头碱的薄层色谱检查法

以硅胶G薄层板,甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水(20:18:3:6:1),甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-氨水(3:14:8:1),甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水(10.5:12:10:10:1)为展开剂,稀碘化铋钾试液为显色剂,分别建立了元秦止痛注射液中乌头碱、次鸟头碱、新乌头碱的薄层色谱限量检查方法.该法可用于元秦止痛注射液的质量控制.     

Metabonomics study of the effects of pretreatment with glycyrrhetinic acid on mesaconitine-induced toxicity in rats

Ethnopharmacological relevance

Aconitum carmichaelii Debx. (Fuzi), a commonly use traditional Chinese medicine (TCM), has often been used in combination with Rhizoma Glycyrrhizae (Gancao) to reduce its toxicity due to diester diterpenoid alkaloids aconitine, mesaconitine, and hypaconitine. However, the mechanism of detoxication is still unclear. Glycyrrhetinic acid (GA) is the metabolite of glycyrrhizinic acid (GL), the major component of Gancao. In present study, the effect of GA on the changes of metabolic profiles induced by mesaconitine was investigated using NMR-based metabolomic approaches.

Materials and methods

Fifteen male Wistar rats were divided into a control group, a group administered mesaconitine alone, and a group administered mesaconitine with one pretreatment with GA. Their urine samples were used for NMR spectroscopic metabolic profiling. Statistical analyses such as orthogonal projections to latent structures-discriminant analysis (OPLS-DA), t-test, hierarchical cluster, and pathway analysis were used to detect the effects of pretreatment with GA on mesaconitine-induced toxicity.

Results

The OPLS-DA score plots showed the metabolic profiles of GA-pretreated rats apparently approach to those of normal rats compared to mesaconitine-induced rats. From the t-test and boxplot results, the concentrations of leucine/isoleucine, lactate, acetate, succinate, trimethylamine (TMA), dimethylglycine (DMG), 2-oxo-glutarate, creatinine/creatine, glycine, hippurate, tyrosine and benzoate were significantly changed in metabolic profiles of mesaconitine-induced rats. The disturbed metabolic pathways include amino acid biosynthesis and metabolism.

Conclusions

GA-pretreatment can mitigate the metabolic changes caused by mesaconitine-treatment on rats, indicating that prophylaxis with GA could reduce the toxicity of mesaconitine at the metabolic level.     

附子双酯型生物碱的提取工艺研究

目的:探讨附子中3种双酯型生物碱提取的影响因素,确定适宜的提取条件。方法:采用HPLC法测定中乌头碱、乌头碱和次乌头碱的含量,采用单因素试验法,对附子双酯型生物碱的提取工艺进行研究。结果:最佳双酯型生物碱提取工艺为:在15℃条件下,将附子粗粉置于10倍无水乙醇中冷浸3次,每次1 d,双酯型生物碱收率为0.57%,质量分数为18.81%,其中中乌头碱、乌头碱和次乌头碱收率分别为0.16%、0.032%和0.38%。结论:该提取方法高效、低毒、经济、操作方便,适合工业化生产。     

高效液相色谱法测定附桂通便颗粒中苯甲酰新乌头原碱和新乌头碱的量

目的对附桂通便颗粒中苯甲酰新乌头原碱、新乌头碱进行含量测定。方法运用高效液相色谱法（HPLC）,Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为0.015%二乙胺-乙腈溶液,线性梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长240 nm。结果苯甲酰新乌头原碱、新乌头碱分别在0.088 8-0.888 0μg（r=0.999 8）、0.199 0-1.990 0μg（r=0.999 8）范围内,具有良好的线性关系;平均加样回收率依次为99.11%、99.13%,相对标准偏差（RSD）分别为0.76%、1.61%。结论该方法快速、简便,重现性好,可作为该制剂的定量分析方法。     

乌头类生药中主要生物碱的薄层光密度法测定

乌头为常用中药,有祛风、散寒、止痛的功效。除正品乌头Aconitum carmichaeli Debx和北乌头Aconitum kusnezoffii Reichb外,同属一些其它品种,亦在民间广泛使用。该属植物多含有双酯类生物碱剧毒成分,主要为乌头碱(aconitine)、中乌头碱(mesaconitine)和