5-氮杂-2’-脱氧胞苷对人前列腺癌裸鼠移植瘤生长及雄激素受体表达影响的研究

目的探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’deoxycytidine,5-Aza-CdR)对LNCaP荷瘤裸鼠的肿瘤生长及雄激素受体(androgen receptor,AR)表达的影响。方法裸鼠皮下接种LNCaP细胞,建立人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,待肿瘤长至300 mm3大小时,荷瘤裸鼠腹腔内注射5-Aza-CdR,0.25 mg/kg,隔天1次。对照组给予生理盐水注射。每3天测量肿瘤体积1次,共观察24天。实验结束时处死裸鼠,取出肿块称重后,肿瘤组织抽提RNA和蛋白质,分别应用实时定量PCR和western blot方法,检测AR在mRNA和蛋白质水平上的表达。结果 LNCaP荷瘤裸鼠经5-Aza-CdR治疗后,与对照组相比,肿瘤生长缓慢。第24天观察结束时,5-Aza-CdR处理组肿瘤体积[(982±83)mm3]显著低于对照组[(1 867±195)mm3](P<0.01)。移植瘤重量与对照组相比明显下降[(796±178)mg vs(1 267±252)mg],抑瘤率为37.2%,差异有统计学意义(P<0.01)。5-Aza-CdR组游离PSA(FPSA)浓度相对对照组显著下降,分别为(40.25±13.3)ng/mL和(79.7±13.2)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.01)。荷瘤裸鼠经5-Aza-CdR处理后,AR在mRNA水平上的表达下降为对照组的0.5倍,在蛋白质水平上的表达也显著降低(P<0.01)。结论 5-Aza-CdR能够有效抑制LN-CaP荷瘤裸鼠移植瘤的生长,并显著降低AR基因表达,为前列腺癌的去甲基化治疗提供了理论依据。     

应用RNA干扰技术阻断LNCap细胞SRC-1基因的表达及意义

目的:利用RNA干扰(RNA i)技术,阻断前列腺癌LNCap细胞中类固醇受体共激活分子(SRC-1)的表达,并研究SRC-1基因沉默后对LNCap细胞的影响。方法:将设计好的siRNA,用脂质体法转染LNCap细胞,通过Q-PCR、蛋白免疫印迹检测SRC-1的表达变化,并用CCK-8法检测细胞生长情况的变化。结果:转染SRC-1siRNA 24 h后的前列腺癌LNCap细胞中SRC-1 mRNA的量与空白对照组相比较下降了约35%,转染48 h后下降了约77%,差异具有统计学意义(P<0.05)。转染24~48 h后LNCap细胞中SRC-1蛋白的表达量(24 h为0.359±0.034;48 h为0.257±0.065)与阴性对照组(24 h为0.782±0.078;48 h为0.766±0.043)、转染试剂组(24 h为0.840±0.013;48 h为0.786±0.051)和空白对照组(24 h为0.816±0.065;48 h为0.805±0.107)相比较明显减少(P<0.05)。转染24、48、72、96 h后LNCap细胞的生长抑制率分别为25%、52%、55%和60%。结论:SRC-1与LNCap细胞的生长相关。SRC-1在激素非依赖性前列腺癌中的高表达可能参与了前列腺癌雄激素非依赖性的转变过程。抑制SRC-1的表达可能成为临床治疗激素依赖性前列腺癌的方法之一。     

131I标记多肽K237用于前列腺癌荷瘤裸鼠显像的实验研究

目的研究将放射性核素131I标记多肽K237用于前列腺癌荷瘤裸鼠显像的可行性。方法按Iodogen法用131I标记多肽K237,用薄层层析法(TLC)测定标记率及放射化学纯度,经Sephadex G25柱凝胶过滤法分离纯化,获得标记率大于95%的131I-K237注射液。体外培养前列腺癌LNCap细胞株,构建LNCap荷瘤裸鼠动物模型,经尾静脉注射131I-K237,于特定时间处死、取肿瘤及主要脏器,测定各组织的放射性百分注射剂量率,研究荷瘤裸鼠体内131I-K237的生物分布。对荷瘤裸鼠尾静脉注射5.55Mbq131I-K237 1、2、4和8h后,分别用SPECT/CT仪显像,考察最佳显像时间。结果131I标记多肽K237的标记率为(73.7±3.2)%,经Sephadex G25柱分离纯化后,放射化学纯度为(96.7±0.6)%;LNCap前列腺癌荷瘤裸鼠体内131I-K237分布显示:30min和1、2、4、8、12、24h的T/NT比值分别是2.08和2.28、2.45、2.68、3.04、3.97、4.41。荷瘤裸鼠显像结果表明,1h时即可见肿瘤隐约显影,4h肿瘤显影最清晰。结论131I-K237的制备与显像操作简易,用于前列腺癌荷瘤裸鼠显像效果理想,有望成为一种新的针对前列腺癌的肿瘤显像剂。     

A Comparative Study on Proteomics between LNCap and DU145 Cells by Quantitative Detection and SELDI Analysis

The differences in intracellular and extracellular protein expressions between human prostate cancer lines LNCap and DU145 were examined, The proteins of the two cell lines were extracted and condensed by using protein extraction kits. And the intracellular and extracellular proteins were quantitatively detected on a micro-plate reader by using bicinchoninic acid （BCA） method. The proteins in cell culture fluid were qualitatively assayed by SELDI-TOF-MS, The results showed that the intracellular protein contents of LNCap cells were extremely higher than those of DU145 cells. After serum-free culture, both intracellular and extracellular protein contents of LNCap and DU145 were decreased to some extent. And the intracellular proteins were decreased by 5% in LNCap and by 36% in DU145 respectively, while the extracellular proteins were decreased by 89% in LNCap and 96% in DU145 respectively. SELDI assay revealed that there were 5 marker proteins in LNCap and 6 in DU145. Although both LNCap and DU145 cell lines originated from human prostate cancer, they had some differences in protein expression.     

前列腺癌与良性前列腺增生细胞株差异核基质蛋白的鉴定

目的:鉴定人前列腺癌雄激素依赖性细胞株LNCaP、前列腺癌雄激素非依赖性细胞株PC-3与良性前列腺增生细胞株BPH-1之间差异表达的核基质蛋白(nuclear matrix proteins,NMPs)。方法:常规制备各细胞株NMPs,应用双向凝胶电泳对其进行分离;对差异表达的蛋白质点行MALDI-TOF-MS/MS质谱分析,数据库搜索并鉴定。结果:成功获得了分辨率高、重复性好的不同细胞株NMPs双向凝胶电泳图谱;初步鉴定出包含酶、调节蛋白、RNA结合蛋白及各种因子在内的12个差异表达的蛋白质,在癌细胞株中3个NMPs表达上调,9个下调。结论:人前列腺癌细胞与良性前列腺增生细胞之间NMPs表达存在明显差异;初步筛选出12个差异NMPs,其表达水平及功能与疾病的联系需进一步研究。