黄芪、水蛭、地龙不同配伍治疗缺血性中风实验研究

提出气虚血瘀络阻为缺血性中风的基本病机,而益气活血通络则为基本治法。通过黄芪水蛭地龙、黄芪水蛭、黄芪地龙、水蛭地龙四个配伍组比较,以观察其对急性脑缺血大鼠血浆一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、血小板聚集性及大鼠在体血栓形成时间的影响。结果表明,黄芪水蛭地龙配伍组在以上诸方面的作用明显优于其他组。     

宽体金线蛭提取工艺研究

目的:筛选宽体金线蛭的最佳提取工艺。方法:以水蛭提取液中蛋白质含量及活化部分凝血活酶时间为指标,考察宽体金线蛭在不同溶媒、温度、提取时间、溶媒倍量及提取次数条件下的提取效果。结果:以10倍药材量的4 %NaCl溶液为提取溶媒,在60℃条件下分3次提取药材6h(3h +2h +1h) ,所得结果较为满意。结论:该提取工艺方法简单、科学,有推广应用价值。     

实时细胞电子分析技术用于水蛭、三七质量评价的初步研究

采用实时细胞电子分析技术测定水蛭、三七不同样本的时间剂量依赖性细胞反应曲线(TCRPs),对不同产地样本的TCRPs进行分析,并对生物活性强弱进行排序.同时,采用中国药典2010年版中的化学检测法和凝血酶滴定法分别对水蛭、三七各样本进行同步分析,比较不同检测方法得出结果的相关性.可见以实时细胞电子分析技术为基础的细胞生物活性测定结果与另两法所得结果基本一致.说明本技术能反映中药生物活性,有望为中药质量标准研究提供一种新方法.     

Effect of mu and kappa opioids on injury-induced microglial accumulation in leech CNS: involvement of the nitric oxide pathway

Damage to the leech or mammalian CNS increases nitric oxide (NO) production and causes accumulation of phagocytic microglial cells at the injury site. Opioids have been postulated to modulate various parameters of the immune response. Morphine and leech morphine-like substance are shown to release NO and suppress microglial activation. Regarding the known immuno-modulatory effects of selective mu and kappa ligands, we have assessed the effect of these agents on accumulation of microglia at the site of injury in leech CNS. Leech nerve cords were dissected, crushed with fine forceps and maintained in different concentrations of opiates in culture medium for 3 h and then fixed and double stained with Hoechst 33258 and monoclonal antibody to endothelial nitric oxide synthase (NOS). Morphine and naloxone (> or =10(-3) M) but not selective mu agonist, DAMGO [d-Ala2, N-Me-Phe-Gly5(ol)-enkephalin] and antagonist, CTAP [D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Arg-Thr-Pen-Thr-NH2] inhibited the microglial accumulation. The effect of morphine was abrogated by pre-treatment with naloxone and also non-selective NOS inhibitor, l-NAME [N(omega)-nitro-l-arginine-methyl-ester; 10(-3) M] implying an NO-dependent and mu-mediated mechanism. These results are similar to properties of recently found mu-3 receptor in leech, which is sensitive to alkaloids but not peptides. Both selective kappa agonist, U50,488 [3,4-dichloro-N-methyl-N-(2-(1-pyrrolidinyl)cyclohexyl)-benzeneacetamide; > or =10(-3) M], and antagonist, nor-binaltorphimine (nor-BNI; > or =10(-3) M), inhibited the accumulation. The effect of nor-BNI was reversed by l-NAME. Immunohistochemistry showed decreased endothelial NOS expression in naloxone and U50,488-treated cords. Since, NO production at the injury site is hypothesized to act as a stop signal for microglias, opioid agents may exert their effect via changing of NO gradient along the cord resulting in disruption of accumulation. These results suggest an immuno-modulatory role for mu and kappa opioid receptors on injury-induced microglial accumulation which may be mediated via NO.     

水蛭真伪鉴定和质量评价方法研究进展

目的 通过进一步完善水蛭的真伪鉴别与质量评价方法,为保障水蛭临床用药安全有效提供参考。方法 以“水蛭”“鉴定”“鉴别”以及“质量评价”等为关键字,在中国知网、维普网、万方数据、PubMed、Science Direct、Web of science等数据库中查询2000年1月—2022年8月发表的相关研究论文,并以“真伪鉴定”和“质量评价”为主旨进行文献综述。结果 水蛭真伪鉴别方法包括性状鉴别、理化鉴别、分子鉴别、蛋白质电泳鉴别和毛细管电泳鉴别等多种方法,其中分子鉴别和蛋白质电泳鉴别两种方法客观性强、准确性高,应用广泛;而质量评价方法较为丰富,包括抗凝血酶评价法、高效液相色谱法、蛋白质电泳法、红外光谱分析法、气相色谱质谱联用技术、指纹图谱技术等。结论 分子鉴别是水蛭目前最准确的鉴别方法,在中药材及中成药中均可适用;由于药效物质并不十分明确,因此以抗凝血酶评价法的生物评价技术和宏观评价的指纹图谱技术在质量评价中更具优势。     

水蛭地龙提取液治疗急性脑梗死的作用机制及疗效

目的探讨水蛭地龙提取液(extractliquorfromhirudoandearthworm,ELHE)治疗急性脑梗死的作用机制及疗效。方法78例急性脑梗死患者被随机分为2组:对照组38例,进行基础治疗;治疗组40例,在基础治疗的同时静脉给予ELHE(20ml+等渗盐水250ml,静脉滴注,1次/d,连续2周)。观察2组脑梗死患者治疗前、后神经功能评分、Barthel指数及活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、组织型纤溶酶原激活物(tPA)、纤溶酶原激活物的抑制剂(PAI1),以及血栓烷B2(TXB2)、6酮前列腺素(6KetoPG)Flα的变化。结果ELHE组患者经过14d治疗,其神经功能缺失评分由9.4±4.0下降为3.3±1.2,Barthel指数由25.9±4.6升高为67.4±2.8,APTT、PT分别由(28.2±3.8)s、(12.2±3.5)s延长为(42.0±5.2)s、(19.5±2.1)s,血浆tPA含量及活性分别由(10.1±1.2)μg/L、(0.27±0.03)KIU/L升高为(15.3±2.1)μg/L、(0.57±0.12)KIU/L,血浆PAI1含量及活性由(47.8±4.6)μg/L和(0.77±0.12)KAU/L下降为(44.2±3.0)μg/L和(0.68±0.11)KAU/L,血栓烷B2由(228.4±48.9)ng/L降低为(152.7±44.4)ng/L,6KetoPGF1a由(21.9±6.3)ng/L升高为(33.8±6.4)ng/L,与对照组比较差异均有显著意义(P<0.05)。结论ELHE具有明显抗凝、促纤溶、抑制血小板聚集,改善血液循     

水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α的影响

目的探讨水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞（VEC）释放血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,将2～3代生长良好的细胞分为空白对照组、凝血酶刺激组和水蛭提取液低、中、高剂量组。将生药浓度分别为150、300、600 mg/L的水蛭提取液加入到10 kU/L凝血酶刺激的细胞中培养12 h,空白对照组加入等量RPMI 1640培养液。取上清液,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TXB2和6-keto-PGF1α的含量。结果与空白对照组比较,凝血酶刺激组TXB2含量（ng/L）明显升高（206.53±18.60比115.21±12.31,P＜0.01）,6-keto-PGF1α含量（ng/L）明显降低（21.31±1.12比30.54±1.11,P＜0.01）;与凝血酶刺激组比较,水蛭提取液各剂量组TXB2（ng/L）含量均明显降低,6-keto-PGF1α（ng/L）含量均明显升高,且以高剂量组变化更显著（TXB2：109.18±9.72比206.53±18.60;6-keto-PGF1α：58.67±3.24比21.31±1.12,均P＜0.01）。结论水蛭提取液能明显减弱凝血酶诱导HUVEC释放6-keto-PGF1α的抑制作用,并能对抗凝血酶诱导HUVEC释放TXB2,其作用机制可能与其调节血栓素/前列环素平衡有关。     

水蛭注射液的安全性检查

目的研制的水蛭注射液并进行安全性检查。方法用家兔进行热源实验;用豚鼠进行过敏性实验;用小鼠进行异常毒性实验;观察红细胞混悬液进行溶血与凝血试验。结果本注射液符合药典安全性检查要求。结论本方法生产的水蛭注射液有一定的应用价值。     

不同水蛭制剂治疗急性期缺血性脑卒中临床疗效比较

目的：系统评价并比较各种单复方水蛭制剂治疗急性期缺血性脑卒中的临床疗效。方法：检索各种单复方水蛭制剂治疗急性期缺血性脑卒中随机对照试验文献，筛选合格研究，应用Jadad评分法进行质量评价，运用异质性检验、Meta-分析、敏感性分析等方法统计比较相关数据。结果：25项研究被分别纳入7种药物的系统评价，Jadad评分所有研究得分均低于3分，属低质量文献。纳入研究共涉及疏血通注射液、通心络胶囊、单味水蛭制剂、脑心通胶囊、血栓心脉宁胶囊等7种单复方水蛭制剂，上述水蛭制剂相关研究分别采用临床总有效率、神经功能缺损评分、日常活动能力评分中的1项或几项指标进行了疗效比较。结论：系统评价的证据显示，对于急性期缺血性脑卒中患者，疏血通注射液在提高临床疗效、改善神经功能缺损状况、提高日常活动能力方面均显示出较好的治疗作用。要进一步验证单复方水蛭制剂治疗急性期缺血性脑卒中的疗效，尚需进行设计合理、执行严格、多中心大样本且随访时间足够的随机对照试验。