整合“转录组-基因调控网络”探讨白虎加桂枝汤君药石膏的性-效关联内涵

目的 从“性-效”关联角度,采用“转录组-基因调控网络”整合研究策略,系统评价白虎加桂枝汤君药石膏在全方“热者寒之”药效作用中的贡献度和贡献形式。方法 20只雄性Lewis大鼠随机分为4组,每组5只：正常组、佐剂诱导型关节炎（AIA）热证模型组、AIA热证+白虎加桂枝汤组（BHGZT,21.4 g·kg^-1）、AIA热证+白虎加桂枝汤去石膏拆方组（BHGZT-GYP,10.7 g·kg^-1）。利用热痹经典动物模型-AIA热证大鼠来源的转录组表达谱数据,通过“病证基因-药物效应靶标”相互作用网络挖掘,预测石膏在白虎加桂枝汤干预热痹的主要作用环节。基于AIA热证大鼠模型从受累关节情况、关节临床积分、肿胀度、关节表面温度、疼痛阈值、关节损伤等疾病严重指标和病证结合指标情况,以及体内“免疫-炎症”失衡调节层面进行整体验证,并基于体外3T3-L1前脂肪细胞开展体外成脂实验验证。结果 白虎加桂枝汤君药石膏在干预热痹中的主要作用环节是调节机体能量代谢的紊乱和矫正“免疫-炎症”的失衡。动物实验观察可见,白虎加桂枝汤及其去石膏拆方均可显著缓解AIA热证大鼠受累关节红肿、畸变和疼痛等症状（P<0.01）,并抑制受累膝/踝关节损伤、滑膜炎症、骨破坏等病理改变（P<0.05）,且全方作用明显优于去石膏拆方（P<0.05）。机制研究表明,白虎加桂枝汤及其去石膏拆方可显著抑制AIA热证大鼠的胸腺/脾脏损伤和内脏指数（P<0.05）,并降低TLR4、TNF-α、IL-6、IL-1β及IL-18等炎症因子的表达（P<0.05）。体外3T3-L1前脂肪细胞实验表明,与去石膏拆方组相比,白虎加桂枝汤全方能够更加显著地抑制脂肪细胞成脂,且单纯石膏对脂滴含量的抑制作用显著增强,表明石膏在全方抑制成脂中的重要作用。结论 白虎加桂枝汤君药石膏在全方缓解热痹相关的能量代谢紊乱和矫正“免疫-炎症”失衡中发挥着重要作用,这与其寒药性及其清热泻火的作用特点密切相关。     

桂枝汤及其生物转化模拟产物对IL-1β介导的bEnd.3 细胞PGE2代谢通路的影响

目的:研究桂枝汤及其生物转化模拟产物对白细胞介素-1β(IL-1β)介导的小鼠脑微血管内皮细胞株(bEnd.3)细胞前列腺素E2(PGE2)代谢通路的影响。方法:制备了桂枝汤及桂枝汤生物转化模拟产物的含药血清(分别设五个浓度组),采用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印记法(Western blot),观察桂枝汤及其生物转化模拟产物对IL-1β刺激的bEnd.3细胞磷酸化丝裂原活化的蛋白激酶p38(p-p38MAPK)、胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)、分泌型磷脂酶A2(sPLA2)、环氧合酶2(COX-2)、前列腺素E合成酶(PGES)、15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)以及前列腺素E2(PGE2)分泌及表达的影响。结果:IL-1β作用于细胞10 h后,各项指标均明显上调,与对照组比较,P<0.01。除质量终浓度为2.5%的桂枝汤含药血清对PGES,sPLA2;终浓度为1%的模拟药对PGES;终浓度为2.5%的含药血清对PGES,sPLA2,cPLA2作用不显著外,其他各浓度组与模型组比较均出现显著性差异。结论:桂枝汤及其生物转化模拟产物对IL-1β刺激bEnd.3细胞合成PGE2的代谢酶系统有不同程度的抑制作用,从而降低了前炎症介质和中枢发热介质PGE2的释放和分泌。结果提示,桂枝汤及其生物转化模拟产物对脑微血管内皮细胞分泌PGE2具有相似的药效,为模拟产物的应用和开发提供了实验支持。     

桂枝汤的文献分析研究

采用文献计量分析法,选用中国医学科学院信息研究所建立的“中国生物医学文献数据库”为资料来源。以1992~2004年以来研究桂枝汤的文献为研究对象,对文献年代、期刊分布、副主题词、文献类型、疾病研究、药理实验等6个方面进行统计分析,揭示其分布特点,以求定量描述,有助于了解和加强对桂枝汤的研究。     

HPLC测定枳实薤白桂枝汤颗粒中辛弗林的含量

目的建立枳实薤白桂枝汤颗粒中辛弗林含量测定方法。方法采用Agela Technologies Promosil C₁₈色谱柱(5μm,100 A,4.6×250 mm);以甲醇-磷酸二氢钾溶液(0.6 g磷酸二氢钾,1.0 g十二烷基磺酸钠,1 mL冰醋酸用1000 mL水定容)50∶50为流动相;柱温34℃;检测波长275 nm;流速0.84 mL·min^-1;进样量10μL。结果在上述色谱条件下,辛弗林在7.7～154.0μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好r=0.9997;精密度、重现性、稳定性均良好RSD<2%;平均回收率为95.21%,RSD=2.26%;分别将流动相配比、检测波长、温度、流速以及乙酸含量等因素在小范围内波动,每次实验测得的辛弗林含量的RSD<2%,表明此方法耐用性良好。结论 HPLC法测定枳实薤白桂枝颗粒中辛弗林含量简单、快捷、结果准确、重复性好,方法可行。     

桂枝汤对大鼠血压双向调节作用及其有效部位探讨

采用无损伤大鼠尾脉搏测压法 ,探讨了桂枝汤对大鼠血压的双向调节作用 ,并对其有效部位进行了筛选。结果表明 :桂枝汤能明显降低自发性高血压大鼠 (SHR)血压 ,能明显升高复方降压片致低血压大鼠血压 ,提示桂枝汤对大鼠血压具有明显双向调节作用 ;桂枝汤经化学分离提取所得A部分 (Fr .A)和E部分 (Fr .E)明显降低SHR血压 ,B部分 (Fr.B)明显升高复方降压片致低血压大鼠血压 ;提示Fr .A、Fr .E和Fr .B为桂枝汤大鼠血压双向调节作用的有效部位     

桂枝汤调控免疫和肠道菌群抗动脉粥样硬化的作用

目的:观察桂枝汤对高脂饮食导致的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠外周血单核细胞、肠道菌群和主动脉血管动脉粥样硬化(AS)斑块形成的影响.方法:40只12周龄雌性ApoE-/-小鼠采用配对比较法随机分为普食组(ApoE-/-+CD),高脂组(ApoE-/-+WD),桂枝汤组(ApoE-/-+WD+GZT,7.83...     

基于网络药理学探讨桂枝汤解热作用机制及药效物质基础

目的:基于网络药理学探讨桂枝汤解热作用的机制及药效物质基础;方法:利用Chem Draw绘制预测桂枝汤中化合物的结构,使用Swiss Target Prediction数据库搜索以上成分对应的靶点。使用Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件,寻找发热相关的基因。使用IPA软件分析桂枝汤中成分、发热相应靶点共同的通路。利用Cytoscape建立成分-靶点-通路网络,寻找主要药效成分。结果:建立了桂枝汤中主要成分与其靶点的网络图。使用IPA软件发现桂枝汤发热作用与以下6个通路相关:G蛋白偶联的受体信号,环磷腺苷(c AMP)介导的信号传导,Gαs信号,Gαi信号,腺苷酸活化水蛋白激酶(AMPK)信号,褪黑激素降解通路。桂枝汤中芍药苷代谢物Ⅰ,环磷酸腺苷与解热作用相关。结论:基于网络药理学探讨了桂枝汤解热作用的相关通路,预测了桂枝汤入血成分中芍药苷代谢物Ⅰ,环磷酸腺苷可能与解热作用相关。研究结果主要基于化学预测,还需要进一步实验验证。     

枳实薤白桂枝汤现代药理作用研究进展

枳实薤白桂枝汤是体现温阳法治疗胸痹的经典方剂,收录于国家中医药管理局颁布的古代经典名方目录（第一批）,具有通阳散结,行气化痰的功效,主治症状包括胸满而痛,甚或胸痛彻背,喘息咳唾,短气,气从胁下冲逆等。现代中医临床将其用于心血管系统、消化系统和呼吸系统等多种疾病的治疗,其中对冠心病、不稳定性心绞痛、心肌梗死、窦性心动过缓等心血管疾病的疗效尤为显著。笔者主要对近10年来关于枳实薤白桂枝汤的药理学研究进行梳理和评述,结果显示,该方各单味药与整方均对上述心血管疾病有一定改善作用,药理作用涉及改善血管内环境、改善心肌缺血、改善心肌缺血再灌注损伤、改善心肌缺氧、抗炎、稳定斑块等方面;其作用机制涉及调节体内相关活性物质、调节相关信号通路与离子通道等,具体主要包括血清血栓烷素B2(TXB2)、血清前列环素I2(PGI2)、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶（PI3K/Akt/eNOS）信号途径、三磷酸腺苷（ATP）敏感性钾通道等。此外,部分单味药的药理作用与瞬时受体电位通道锚蛋白1(TRPA1)的关系已有报道,其中TRPA1是认识该方作用机制与治疗心血管疾病的关键之一,值得深入。     

桂枝汤桂枝-白芍不同比例配伍通过调节TGF-β1/Smads信号通路及慢性炎症改善盐敏感高血压大鼠心肌纤维化

目的:观察桂枝汤不同桂枝-白芍比例配伍对盐敏感高血压大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路以及白细胞介素-10(IL-10),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)相关炎症因子表达的影响,探讨桂枝汤改善盐敏感高血压大鼠心肌纤维化具体的机制。方法:将40只雄性6周龄盐敏感大鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、桂枝汤桂枝-白芍1∶1组(简称桂芍1∶1组)、桂枝汤桂枝-白芍1∶2组(简称桂芍1∶2组)、桂枝汤桂枝-白芍2∶1组(简称桂芍2∶1组),每组8只。正常组给予低盐饲料喂养,其余4组给予高盐饲料喂养,喂养4周后开始灌胃,正常组、模型组每天给予等体积的生理盐水灌胃,桂芍1∶1组、桂芍1∶2组和桂芍2∶1组分别按4.0,5.5,5.5 g·kg^-1给予桂枝汤水溶液灌胃,连续灌胃4周。每周测量1次血压;采用超声心动图检测左室收缩末期内径(LVESD),左室舒张末期内径(LVEDD),左室射血分数(LVEF),左室短轴缩短分数(LVFS);采用苏木素-伊红(HE)及马松(Masson)染色观察各组大鼠心肌病理形态变化;采用免疫组化检测各组大鼠心肌组织中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠心肌组织中IL-10,IL-6,TNF-αmRNA的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心肌组织中TGF-β1,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Smad2,Smad3,Smad7蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组在8~15周的血压升高,LVESD,LVEDD升高,LVFS,LVEF降低,胶原容积分数升高,免疫组化显示Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的表达增加,IL-10,IL-6,TNF-αmRNA的表达均升高,TGF-β1,Smad2,Smad3,α-SMA蛋白的表达升高,Smad7蛋白的表达降低(P<0.01)。与模型组比较,桂枝汤各组在12~15周血压上升延缓,LVESD,LVEDD降低(P<0.01),LVFS,LVEF升高(P<0.01),胶原容积分数降低(P<0.01),Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的表达降低(P<0.01),同时,IL-10 mRNA的表达升高(P<0.05,P<0.01),IL-6,TNF-αmRNA的表达降低(P<0.01),TGF-β1,Smad2,Smad3,α-SMA蛋白的表达降低(P<0.05,P<0.01),Smad7蛋白的表达升高(P<0.01);且与桂芍2∶1组相比,桂芍1∶1组改善上述指标的效果更明显(P<0.01)。结论:桂枝汤不同桂芍比例配伍可以改善盐敏感高血压大鼠的心肌纤维化程度,其机制可能与调节TGF-β1/Smads信号通路及减轻炎症反应有关,且桂枝汤桂芍1∶1组减轻炎症反应,改善心肌纤维化效果最好。     

桂枝汤加味治疗气血不和型儿童白癜风及对自身免疫的调节

目的:观察桂枝汤加味治疗气血不和型儿童白癜风的临床疗效及对T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白和补体的影响。方法:将134例符合要求的患儿,采用SAS软件生成,随机按数字表法分为观察组与对照组各67例。对照组采用0.03%他克莫司软膏,适量外涂,2次/d。观察组在对照组治疗的基础上服用桂枝汤加味,1剂/d。两组疗程均连续治疗3个月。进行治疗前后白癜风面积评分指数(VASI),黑素指数(MCI),皮肤病生活质量(DIQL)调查量表和气血不和证评分,并评估复色情况;检测治疗前后T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+),补体(C3,C4)和免疫球蛋白(Ig G,Ig M,Ig A)水平。结果:观察组临床疗效总有效率为84.13%,高于对照组的63.49%(χ2=6.938,P0.01);治疗后观察组VASI指数低于对照组(P0.01),DIQL和气血不和证评分均低于对照组(P0.01),MCI指数高于对照组(P0.01);观察组患儿复色率(62.83±11.47)%高于对照组的(53.78±10.29)%(P0.01);与健康对照组比较,白癜风患儿外周血免疫球蛋白Ig G,Ig A水平均明显下降,白癜风患儿外周血T淋巴细胞亚群CD3+,CD4+,CD4+/CD8+水平均有下降,CD8+水平升高(P0.01);Ig M,C3和C4水平差异均无统计学意义;治疗后观察组患儿治疗后Ig G,Ig A水平均显著升高(P0.01),并高于同期对照组(P0.01),Ig M,C3和C4水平变化均无统计学意义;观察组患儿CD3+,CD4+,CD4+/CD8+均较治疗前升高(P0.01),并高于治疗后对照组水平(P0.05);CD8+下降,并低于治疗后对照组水平(P0.05)。结论:桂枝汤加味治疗气血不和型儿童白癜风,能缩小皮损面积,增加白斑黑素含量,提高复色率,改善了患儿生活质量,有明显的临床疗效,其作用机制可能与调节自身免疫失衡有关,值得临床进一步的研究。