药用植物金荞麦中黄酮类化合物积累的时空变化规律

目的 探究药用植物金荞麦不同生育期各器官中黄酮类化合物积累的时空分布规律,为金荞麦合理采收、资源化利用和高价值开发提供科学依据。方法 以根茎繁殖不同生长年限的金荞麦为研究对象,在不同生育时期采集根、茎、叶、花器官,采用高效液相色谱法测定各器官样品中儿茶素、表儿茶素、芦丁和总黄酮含量。结果 随着金荞麦生育期推进,植株不同器官的黄酮类化合物积累增加,以秋季地上部分枯萎后的含量最高;不同生育时期叶片中的儿茶素、表儿茶素、芦丁和总黄酮含量均显著高于根茎和茎秆（P<0.05）。不同器官间儿茶素、表儿茶素、芦丁和总黄酮含量差异有统计学意义（P<0.05）,花中儿茶素、芦丁和总黄酮含量最高;表儿茶素含量在茎秆中最低。黄酮类物质含量在根茎不同部位差异有统计学意义（P<0.05）,表儿茶素和总黄酮含量在根茎不同组织部位表现为须根>韧皮部>根茎（不含须根）>木质部（P<0.05）,儿茶素和芦丁分别在须根和韧皮部含量最高。1年生与2年生金荞麦植株不同器官的黄酮类化合物含量差异无统计学意义。结论 在不考虑产量的前提下,根茎繁殖金荞麦种植1年即可采收,适宜采收期为11月上旬。     

荞麦多糖对小鼠实验性肝损伤的保护作用

目的:研究荞麦多糖对小鼠实验性肝损伤的保护作用.方法:采用四氯化碳(CCl4)、硫代乙酰胺(TAA)、扑热息痛(AAP)致小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清SGPT活性.结果:荞麦多糖溶液对四氯化碳、扑热息痛所致小鼠实验性肝损伤有明显保护作用,但对硫代乙酰胺所致小鼠实验性肝损伤无明显的保护作用.结论:荞麦多糖有保肝作用.     

苦荞茎叶粉中总黄酮酶法提取工艺研究

目的研究苦荞茎叶粉中总黄酮酶法提取工艺。方法苦荞茎叶粉经纤维素酶处理后用水提取总黄酮,研究酶加酶量、解温度、酶解时间和pH值对总黄酮得率的影响。结果酶法提取的最佳工艺条件为酶解温度55℃,加酶量3.0μL,pH值6.5,酶解90min,再在90℃下提取3次,每次30min,总黄酮得率可达1.47%。结论纤维素酶适用于苦荞茎叶粉中总黄酮的辅助提取。     

金荞麦抗菌活性研究

目的探讨中药金荞麦乙醇提取物正丁醇萃取部分(待测样品)的抑菌作用,并对此部分进行分离纯化以研究其抗菌活性的物质基础。方法与复方板蓝根颗粒作对比,采用平皿稀释法及动物试验对待测样品进行体外及体内试验,测定其对各试验菌的最小抑菌浓度(MIC)和对肺炎链球菌感染小鼠的体内保护作用。并采用多种色谱方法对此部分进行分离纯化。结果体外抑菌试验表明,待测样品对乙型溶血性链球菌、肺炎球菌有明显的抑制作用;体内抑菌试验表明此部分对肺炎球菌菌株所致的小鼠感染有保护作用;从该活性部分分离得到5个化合物胡萝卜苷(daucosterol,Ⅰ),正丁醇-β-D-吡喃型果糖苷(n-butyl-β-D-fructopyronoside,Ⅱ),原儿茶酸(protocatechuicacid,Ⅲ),芸香苷(rutin,Ⅳ),橙皮苷(hesperidin,Ⅴ),化合物Ⅴ为首次从荞麦属植物中分离得到。结论待测样品在体内及体外均有较强的抑菌活性,而具有抗菌作用的物质基础为酚酸类及黄酮类化合物。     

金荞麦Fr4对小鼠lewis肺癌细胞MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响

目的 探讨金荞麦提取物Fr4对小鼠lewis肺癌组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase，MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitors of metallproteinase，TIMP-1)蛋白表达的影响。方法 利用C57／BL6小鼠移植性肿瘤lewis肺癌模型，观察金荞麦Fr4对小鼠lewis肺癌生长的影响；利用免疫组织化学SP法研究金荞麦Fr4对lewis肺癌中MMP-9、TIMP-1表达的影响。结果 金荞麦Fr4在400mg／kg剂量时可明显抑制C57／BL，6小鼠lewis肺癌生长；金荞麦Fr4可下调MMP-9的表达，但不影响TIMP-1的活性。结论 金荞麦提取物Fr4具有明显的抗肿瘤作用，分子机制可能与下调MMP-9的表达有关。     

金荞麦配方颗粒的质量标准

目的:建立金荞麦配方颗粒的质量标准.方法:采用TLC法进行定性鉴别;采用HPLC法测定配方颗粒中表儿茶素含量.用Agilent Zorbax Eclipse XDB-Cl8(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱分离,乙腈-磷酸水(92:8,pH 3.00),流速0.8 ml·min-1,柱温35℃,检测波长280 nm.结果:表儿茶素的线性范围分别为113.6～340.8 g·ml-1.平均回收率均大于98%.结论:所建立的方法简便、准确、重复性好,可作为金荞麦配方颗粒的质量控制方法.     

苦荞内生真菌产物EE-2抑制HepG2生长及诱导其细胞凋亡

目的研究苦荞内生真菌KQH-2代谢醇提物EE-2对人肝癌细胞的抑制作用及其作用机制。方法采用MTT法考察EE-2对人肝癌细胞HepG2体外增殖的抑制作用,显微镜观察EE-2对HepG2细胞形态的影响,琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA完整性,并利用流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡及细胞周期变化情况。结果用EE-2处理过的HepG2细胞,显微镜观察可见细胞脱壁圆缩,出现凋亡小体;细胞核降解。流式细胞仪检测发现,处理组的DNA直方图上有比对照组加强的SubG1峰,且可将HepG2细胞阻滞于G0/G1期。结论苦荞内生真菌KQH-2代谢醇提物EE-2可诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡,且具有细胞周期阻滞作用。     

金荞麦制剂的抑菌研究

本试验利用不同酒精浓度的提取工艺对金荞麦的野生根茎进行提取 ,用 5种常见致病菌作为试验对象 ,分别采用试管法和平面法对不同提取物的抑菌作用进行了研究 ,并提出较高浓度 (5 0 %以上 )的乙醇提取物对细菌的抑制作用较强的结论。     

金荞麦根体外培养人肿瘤细胞的抗癌研究

利用直接杀伤细胞法，集落培养抑制法及DNA前体物质参入法研究金荞麦根对体外培养的多种人癌细胞的抗癌作用。结果：此药在1g·L^-1时对多种人癌细胞的杀伤率均超过一个对数杀灭，浓度降低至0.125g·L^-1的杀伤率仍接近一个对数杀灭达74.3％～92.1％，金荞麦根中的提取物具有明显抗癌作用，其浓度为0．1，0.05g·L^-1对多种癌细胞的集落抑制率达100％，浓度为0．0125g·L^-1时抑制率达75．1%～89.2％，再用^3H-TdR标记法观察发现，金E能明显抑制癌细胞内的核酸代谢，其抑制作用与同浓度的阳性对照氟尿嘧啶近似。     

金荞麦查尔酮异构酶的基因克隆及其花期表达与黄酮量分析

目的 获取金荞麦总黄酮合成途径的关键酶查尔酮异构酶（chalcone isomerase,CHI）基因的全长序列,并进行序列分析;对花期金荞麦CHI基因在各组织中的表达与总黄酮量进行分析。方法 利用同源克隆技术获得金荞麦查尔酮异构酶基因（FdCHI）的cDNA序列;采用半定量RT-PCR对CHI表达量进行分析,并采用AlCl₃法测量总黄酮量。结果 金荞麦FdCHI基因cDNA包含一个750 bp的ORF,编码249个氨基酸,命名为FdCHI。生物信息学分析表明该编码蛋白与其他植物CHI氨基酸序列同源率较高。FdCHI在花期金荞麦不同组织中的表达量分析表明,其表达量花＞根＞叶＞茎,总黄酮量为花＞叶＞茎＞根。结论 在金荞麦中首次获得CHI基因的cDNA序列,编码蛋白具有CHI同源蛋白的典型特征。FdCHI基因在金荞麦茎、叶和花中的表达量与总黄酮量具有相关性,但在根中表达量与总黄酮量相关性较小。