铁皮石斛的栽培研究

本文总结了铁皮石斛组培苗移栽的最佳时间、最佳基质及温湿度的控制,使铁皮石斛的栽培变得简单易行。     

金钗石斛光合作用特征的初步研究

利用LiCor-6400光合测定系统测定了不同天气条件下，金钗石斛叶片24hCO2吸收的动态变化，以及CO2吸收对有效光合辐射的响应。结果表明：晴天，白天和夜间金钗石斛都能吸收CO2，中午有光下呼吸现象，CO2的交换方式具景天酸代谢途径（CAM）的特点；阴雨天，中午没有光下呼吸现象，白天都在吸收CO2，夜间21：00仍有CO2吸收，23：00以后至次日凌晨处于暗呼吸状态。金钗石斛叶片CO2吸收对光照强度的效应表现出强光抑制现象，饱和光照强度为1000μmol/m^2s。叶片受到强光照射后，光合饱和点降低，CO2吸收速率下降，说明金钗石现象，饱和光照强度为1000μmol/m^2s。叶片受到强光照射后，光合饱和点降低，CO2吸收速率下降。说明金钗石斛是兼性景天酸代谢植物，随着环境条件变化，光合作用可在CAM途径与C3途径间变化，这一光合特性可能是金钗石斛适应需荫环境和生物缓慢，稀少的主要原因之一。     

铁皮石斛培养的产业化研究

目的　筛选适宜的铁皮石斛不定芽增殖与生根培养基 ,选择适合继代扩繁的不定芽高度。方法　在相同培养条件下 ,不同高度的不定芽在不同的增殖与生根培养基中生长 ,对结果所产生的不同生长状况 ,进行显著性差异检验及综合分析。结果　不同高度的不定芽之间有显著差异 ,不同的增殖与生根培养基之间有显著差异。结论　铁皮石斛继代以 (1.2± 0 .1) cm高的不定芽为宜 ,增殖培养基以 MS添加 BA1.0 m g/ L、NAA0 .2 mg/ L 为佳 ,生根培养基以 1/ 2 MS添加 NAA 0 .2 mg/ L为佳。     

ISSR-PCR在石斛种间鉴别中的应用

目的 采用ISSR-PCR方法对石斛属9种植物进行鉴别,探讨不同种石斛在DNA分子水平上的差异。方法 选取10条由SSR组成的引物,对9种石斛进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析。结果 10条引物中有7条扩增出多态性条带。每条引物可检测的多态性位点最少7个,最多14个,扩增片段大小为220-1260 bp。其中,引物UBC-807和UBC-864具有较高的多态性条带比率,均可以独立将所有被测种区分开来。结论ISSR-PCR作为一种简便、可靠的分子标记鉴定技术,可以作为石斛属种间鉴别的方法之一。     

球花石斛茎中香豆素类成分的定位与相对定量

目的探讨不同生长年限、不同部位球花石斛 (Dendrobium thyrsiflorum Rchb. f.)茎中香豆素类(coumarins)成分的分布与相对含量变化，为合理评价及利用药用石斛提供科学依据。方法利用激光共聚焦显微技术(laser scanning confocal microscopy, LSCM)观察二月份采收的球花石斛1-3龄茎的基部、中部和顶部的香豆素类成分。所记录数据经正态性、方差齐性检验后进行方差分析(ANOVA)，并使用Tukey′s检验作多重比较。结果 香豆素类成分主要分布在球花石斛茎的维管束部位并以维管束外侧纤维的壁较多。统计分析显示香豆素类成分的含量在不同年龄茎的各个部位之间差异极显著或显著，显著值分别为：基部P=0.004(<0.01)；中部P=0.009(<0.01)；顶部P=0.036(<0.05)。结论若以利用香豆素类成分为目的，建议二月采收时，宜选择2龄茎。     

铁皮石斛居群差异的研究ⅡISSR指纹标记方法的建立与优化

目的:针对铁皮石斛ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR分子指纹标记反应体系,为进一步研究铁皮石斛的居群差异奠定基础。方法:通过筛选引物并设定影响铁皮石斛ISSR反应的诸因子的不同浓度,检测IS-SR不同反应体系的扩增效果;通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立铁皮石斛ISSR稳定可靠的反应体系。结果与结论:首次建立了可用于铁皮石斛ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系:25μL PCR反应体系中,10×Taq酶配套缓冲液,1.5 U Taq DNA聚合酶,1.2～1.8 mmol.L^-1MgCl₂,80μmol.L^-1dNTP,0.2μmol.L^-1引物,DNA模板约20 ng,退火温度52～60℃;实验表明:Taq酶质量、DNA模板品质、退火温度等对ISSR反应结果具有较大影响。所建立的铁皮石斛ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可以较好地应用于铁皮石斛的居群鉴别及居群分子生态的研究。     

叠鞘石斛不同炮制方法的比较研究

目的:建立一个简便快捷的叠鞘石斛产地加工方法。方法:以多糖、香豆素、水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量为评价指标,对叠鞘石斛的切片阴干法、切片烘干法、燀蒸法、传统产地加工法及清水浸泡法、NaOH浸泡法进行比较研究。结果:综合评分结果由高到低为:切片烘干法>燀蒸法>NaOH浸泡法>清水浸泡法>传统产地加工法>切片阴干法。结论:切片烘干法和燀蒸法可应用在叠鞘石斛的产地加工中。     

石斛合剂对2型糖尿病模型大鼠的降糖作用及其对胰岛细胞凋亡的影响

目的:研究石斛合剂对实验性2型糖尿病模型大鼠的降糖作用和胰岛细胞凋亡影响。方法:大鼠高脂高糖饲养1个月后腹腔注射低剂量STZ(30 mg/kg)诱导实验性2型糖尿病大鼠模型,继以石斛合剂(5、10、20 g/kg)灌胃治疗,测试其降糖活性作用,用组织病理学技术观察胰岛细胞的形态结构,用MTT法和Annexin V/PI法检测胰岛细胞凋亡。结果:石斛合剂具有显著的降低血糖、血脂和糖化血清蛋白作用,可显著改善STZ造模大鼠胰腺组织结构功能,使治疗组的凋亡胰岛细胞较模型组显著减少(P0.01)。结论:石斛合剂对实验性2型糖尿病模型大鼠具有的降糖作用以及保护和修复胰腺组织的结构和功能。     

4种内生真菌对金钗石斛无菌苗生长及其多糖和总生物碱含量的影响

目的 :研究离体培养时 4种菌根真菌对金钗石斛生长及化学成分含量的影响。方法 :利用纯培养的菌根真菌分别与金钗石斛无菌苗共生培养 ,观测它们对金钗石斛生长及其多糖和总生物碱含量的影响。结果 :与对照相比 ,Mycena sp. (MF2 3 )极显著降低了金钗石斛鲜重的 2 4.9% (P<0 .0 1) ;所有实验菌株对金钗石斛干重均无显著性影响 ;Epulorhiza sp. (MF18)和MF2 3显著提高了金钗石斛的折干率 (P<0.0 5) ,Mycena sp. (MF2 4)极显著提高了金钗石斛的折干率 (P<0. 0 1) ,分别最多提高了 51.3 % ,43 8%和 63. 3 % ;Epulorhizasp (MF15)和MF2 4比对照极显著增加了金钗石斛气生根数量的 4.25倍和 4.13倍 (P<0 .0 1) ;MF2 3极显著减少了金钗石斛基生根数量的46.5% (P<0. 0 1) ;MF15,MF18,MF2 3和MF2 4分别可使金钗石斛多糖含量提高 153 .4% ,52. 1% ,18.5% ,76.7% ;MF2 3使金钗石斛总生物碱含量提高 18.3 %。结论 :在离体培养条件下 ,内生真菌与金钗石斛共生培养能影响金钗石斛的生长和总生物碱的含量 ,提高多糖的含量。     

黔产铁皮石斛对阿司匹林诱导胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的保护作用研究

目的 探讨铁皮石斛全提物对阿司匹林诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1细胞损伤的药效作用.方法 体外培养人胃黏膜上皮细胞株GES-1细胞,经阿司匹林处理后,建立阿司匹林诱导GES-1细胞损伤模型;以阿司匹林联合铁皮石斛全提物各浓度预处理GES-1细胞为铁皮石斛组,以阿司匹林联合奥美拉唑预处理细胞为阳性组,并设立阴性对照组,采用MTS法检测细胞存活率,并通过比色法测定细胞上清液中LDH含量.结果 当阿司匹林的浓度为18.5 mmol/L处理GES-1细胞24 h时,细胞的抑制率为40％;铁皮石斛浓度范围0～500 μg/mL内,受损细胞存活率随铁皮石斛剂量增加而升高,LDH释放量逐渐降低(P＜0.05).结论 铁皮石斛对于阿司匹林诱导GES-1细胞损伤具有保护作用.