微核试验和彗星试验检测朱砂的遗传毒性

目的:研究朱砂对大小鼠染色体的损伤作用,比较短期给药与长期给药对遗传毒性检出的影响,探讨结合生殖毒性Ⅰ段试验进行遗传毒性研究的可行性。方法:18只小鼠分3组灌胃给药10,5.02,.5 g.kg-1(分别相当于人临床最高等效剂量约100,50,25倍)朱砂悬浊液,2 d后处死;结合生殖毒性Ⅰ段大鼠(每组6只)连续灌胃给药1.0,0.3,0.1 g.kg-1(分别相当于人临床最高等效剂量的20,6.4,2.0倍),雄性42 d以上,交配成功后处死;雌性20 d以上,妊娠第15天处死,取骨髓细胞做微核试验和彗星试验。结果:小鼠各剂量组灌胃给药的微核率分别为0.175%,0.108%,0.092%,与阴性对照组比较差异有显著意义,但彗星试验结果阴性。结合生殖毒性Ⅰ段试验的微核试验中雄性和雌性大鼠的微核率与阴性对照组比较,差异无显著意义,但有随剂量增高而增高的趋势;而彗星试验结果显示雄性的中、高剂量和雌性的高剂量的拖尾阳性率为27.6%,42.8%,22.3%,与阴性对照组比较,差异有显著和极显著意义。结论:①朱砂短期内大剂量灌胃给药或长期小剂量给药可能引起染色体损伤;②利用生殖毒性Ⅰ段试验多次给药后取材做微核试验和彗星试验在方法上是可行的,在剂量设计上更符合中药长期低剂量给药方式;③微核试验和彗星试验的组合在评价药物的体内遗传毒性中具有互补性。     

朱砂的毒性研究概况

中医药学对朱砂的毒性认识经历了一个从“无毒”至“有毒”的变化过程。长期的中医药学实践不仅使古代医家认识到了朱砂的毒性 ,同时还掌握了朱砂毒性增强的规律 ,并提出了朱砂解毒方法 ,这对朱砂的临床应用提供了安全用药的指导。朱砂的毒性由汞而致 ,不合理的用药方法而导致汞急性大量吸收或汞蓄积中毒是临床不良反应的主要原因。肾脏是汞中毒的主要靶器官 ,不合理的中药配伍或中西药配伍可能会增强朱砂的毒性。因此避免朱砂中毒的关键在于合理用药。     

朱砂灌胃给药对大鼠生育力与早期胚胎发育毒性的研究

目的:观察中药朱砂ig给药对大鼠生育力与早期胚胎发育的毒性影响。方法:SD雄性大鼠连续ig给药6周后与连续给药2周的雌性交配。每天ig给予朱砂1 000,300,100 mg.kg-13个剂量。雄性给药至交配全部结束。雌性给药至妊娠第6 d。雄性大鼠交配后处死,雌性大鼠妊娠第15 d处死,计算黄体数、着床数、活胎数等,进行血液、生化、尿液及组织病理学检查,并与阴性对照组比较。结果:①雌性大鼠朱砂高剂量组着床前胚胎流失率升高,平均活胎数下降,具有统计意义。雄性大鼠给药组睾丸,附睾,前列腺,精囊腺质量减轻,病理学检查睾丸、附睾和精囊腺萎缩,个别睾丸附睾中无成熟精子。②血液学检查表明,雄性大鼠给药组的红细胞数、血红蛋白和红细胞压积低于阴性对照组,呈明显的量效关系,具统计意义。③血液生化学检查表明,雄性大鼠组的给药组ALT,AST,TP,ALB,GLO低于阴性对照组,呈明显的量效关系,具统计意义。④雄性大鼠给药组随着朱砂剂量的增加,肝脏质量和脏器系数也随之增加。结论:朱砂可能对雄性大鼠生育力和雌鼠着床与胎仔发育具有一定的毒性反应。朱砂长期给药可抑制雄性大鼠造血功能和可能损伤肝功能。     

体内外染色体畸变实验检测朱砂的遗传毒性

目的:用仓鼠的骨髓细胞与CHL细胞经行体内外染色体畸变实验评价朱砂的遗传毒性。方法:体内染色体畸变实验用毛足属仓鼠给予朱砂混悬液(2.0,4.0,8.0 g·kg-1)连续灌胃5 d,处死前2 h腹腔注射秋水仙素。处死后取骨髓细胞制备染色体。油镜下观察每只动物骨髓细胞的有丝分裂指数和100个中期分裂相细胞的畸变类型。CHL细胞染色体畸变实验用朱砂浸出液终质量浓度为6.3,12.5,25.0 g·L-1作用于CHL细胞,培养24,48 h,终止培养前4 h加入秋水仙素。收获细胞,制备染色体,油镜下观察CHL细胞的200个中期分裂相细胞的畸变类型。结果:(1)与空白组比较,朱砂浸出液12.5,25.0 g·L-1给药组的CHL细胞染色体畸变率均升高(P0.05,P0.01),且有明显的量效关系。(2)仓鼠体内实验与朱砂血清给药CHL细胞的畸变率无显著性差异。结论:(1)在本实验中朱砂浸出液在12.5 g·L-1以上时能致体外CHL细胞染色体畸变,而朱砂混悬液在8.0 g·kg-1下仓鼠体内染色体畸变实验未出现阳性结果。(2)仓鼠体内染色体畸变实验可作为研究中药新药遗传毒性评价实验方法之一。     

安宫牛黄丸及重金属组分对内毒素脑损伤大鼠脑电图的影响

目的：评估朱砂雄黄在安宫牛黄丸“醒脑开窍”中所发挥的作用,为安宫牛黄丸组方的合理性提供实验依据。方法：采用药物定量脑电图的方法,以内毒素尾静脉注射复制内毒素脑损伤模型,观察含与不含朱砂雄黄的安宫牛黄丸及朱砂、雄黄对内毒素致脑损伤脑电图δ波、β波功率及相对功率的影响。结果：内毒素可使大鼠脑电图的慢波（δ波）功率和相对功率增加,而快波（β波）功率和相对功率降低。几种药物均可降低内毒素（LPS）脑损伤大鼠脑电δ波功率和相对功率;全方、朱砂雄黄、单雄黄可提高β波的功率和相对功率,朱砂可提高β波相对功率,简方的作用不明显。结论：全方对内毒素脑损伤脑电图有明显的脑电激活作用,朱砂雄黄及单独朱砂、雄黄和全方的作用相似,推测朱砂雄黄可能是安宫牛黄丸醒脑开窍作用的重要物质基础之一。     

朱砂的胚胎毒性研究

目的:观察朱砂在小鼠妊娠中晚期、妊娠前与妊娠全期给药对小鼠胚胎的影响.方法:分2批试验进行研究,分别为妊娠中晚期给药试验和妊娠前与妊娠全期给药试验.每批试验均采用ICR小鼠分成4组:对照组和朱砂0.08,0.4,4.0 g·kg~(-1)剂量组.妊娠中晚期于孕后第6天开始给药一直给药至孕后第19天(D6～D19);妊娠前及妊娠全期给药试验则于交配前14 d至妊娠后19 d持续给药.2批实验均于妊娠期第20天行剖腹产,称量胎鼠体重,记录胎鼠数目、吸收胎、死胎、活胎等,同时观察胎仔外观有无异常.将每窝的胎仔分成二部分,1/3进行Bouin染液固定及染色,用于器官检查;另2/3进行骨骼染色,用于骨骼观察.结果:小鼠妊娠后D6～D19灌胃给药时,朱砂3个剂量组对胚胎发育无显著影响,活胎数、死胎数和吸收胎数量均与对照组比较无显著差异.胎仔外观检查、内脏检查、骨骼检查均未见明显畸形.交配前14 d至妊娠后第19天持续灌胃给予朱砂0.4,4.0 g·kg~(-1)·d~(-1),其流产率、吸收胎率较对照组稍高,但无显著性差异和剂量依赖关系.朱砂各剂量组的胎仔外观检查和内脏检查均未见明显异常.骨骼检查显示,朱砂可造成一定程度的骨骼畸形,其中0.4,4.0 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量组骨骼畸形率较高,分别达到46.7%和77.8%.结论:妊娠中晚期用药对胚胎发育无显著影响,此时期胚胎对朱砂的敏感性较低;妊娠前以及妊娠早期使用朱砂(≥0.08 g·kg~(-1)·d~(-1),相当于临床5倍量)可能对胎儿造成危害,并随剂量增大作用有增高趋势.     

七厘胶囊中朱砂的含量测定

目的：建立七厘胶囊中朱砂的含量测定方法。方法：通过加入硫酸后分3次加入硝酸钾加热的方法,使消化完全,然后用络合滴定法进行测定,并进行了方法学验证和20批样品的测定。结果：平均回收率为100．9％,RSD=0．9％;确定了每粒胶囊含硫化汞（HgS）应为26．0～31．0mg。结论：本方法专属性强、精密度好、准确度高,可用于七厘胶囊中朱砂的含量测定。     

规范朱砂、雄黄及相关成方制剂标准的思考

朱砂和雄黄在我国临床应用历史非常悠久,至今应用十分广泛,尤其是我国现行上市的中成药中,含有朱砂和雄黄的品种很多,如安宫牛黄丸、牛黄清心丸等等.而且,近年采雄黄在中医以毒攻毒理论指导下,还成功用于白血病的治疗.但是,随之临床应用的普反和推广,不良反应也日益增多,引起了国内外的广泛关注.如何安全、有效、合理的使用朱砂、雄黄以及舍有朱砂、雄黄的中成药,规范其八使用标准已是当前必须亟待解决的严重问题.本文分析朱砂、雄黄产生不良反应的原因,并指出需要时朱砂、雄黄在成药中药用价值进行再评定,且针对朱砂、雄黄存在的问题,提出了相应的对策.     

朱砂中添加5种色素的鉴别研究

目的：建立以薄层色谱为初筛,高效液相色谱验证相结合的方法,以补充检验朱砂药材中非法添加颜料红531、颜料红571、酸性红73、偶氮玉红、胭脂红5种色素。方法：采用薄层色谱法,硅胶G为固定相,70%乙醇为溶剂,正丁醇-乙醇-冰乙酸-水（8∶4∶2∶2）为展开剂,在可见光下检视筛查。采用高效液相色谱法（HPLC）,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为乙腈-0.02 mol·L^-1醋酸铵梯度洗脱,柱温30℃,检测波长237 nm,用二极管阵列检测器进行检测,通过与颜料红531、颜料红571、酸性红73、偶氮玉红、胭脂红对照试剂色谱峰比对加以确证,以液质联用对结果加以验证。结果：在薄层色谱和HPLC验证结果一致情况下,68批朱砂样品中,有8批样品分别含有上述1种或几种色素添加。结论：该方法简单、快速、重复性好、成本低,补充了朱砂饮片国家药品标准中的相关规定,对进一步加大对中药材中药饮片市场的监管以及开展染色掺假中药专项整治具有较强的实用性。     

朱砂水飞过程中可溶性汞盐的溶出动力学研究

目的 建立朱砂中可溶性汞盐在水飞过程中的溶出动力学模型.方法 以朱砂水飞过程中可溶性汞盐溶出量为指标,测定在不同水飞时间和温度下的汞盐溶出量,建立朱砂中可溶性汞盐溶出动力学数学模型,并计算模型参数.结果 朱砂中可溶性汞盐溶出动力学符合Stumm方程dC/dt=Kq(Cx-Ct)n,式中Cx为该盐溶解平衡时的浓度,Ct为在t时间时的溶解浓度,Kq为动力学速率常数,n为该盐的反应级数.结论 在实验范围内,动力学模型符合一级动力学方程,活化能E(a)=17.35 kJ/mol,在固膜扩散控制范围内.