僵蚕抗凝活性及其成分的分析

目的对僵蚕不同部位抗凝活性及其主要成分的含量进行测定 ,为僵蚕的质量控制和用药提供依据。方法用凝血酶时间 (TT)和经典化学方法为指标测定生、制僵蚕以及制僵蚕的不同部位的抗凝血活性大小以及总氮、铵态氮、蛋白质和草酸铵的含量。结果制僵蚕的抗凝活性、蛋白质和草酸铵含量均大于生僵蚕。制僵蚕不同部位凝血酶时间和蛋白质含量比较 ,其顺序是 :透明胶状物 >全药 >僵蚕皮 >绿褐色物。结论生、制僵蚕以及僵蚕不同部位抗凝活性和蛋白质等成分含量不一致 ,建议根据用药目的选择生、制僵蚕 ,作为抗凝药物应用时 ,可选择制僵蚕或其某一个或几个部位     

僵蚕的化学成分研究

目的 :研究僵蚕的化学成分。方法 :应用硅胶柱层析和重结晶方法进行分离、纯化 ,并利用谱学方法进行结构鉴定。结果 :分离并鉴定出 7个化合物。结论 :其中 6个成分为首次从僵蚕中分离得到。     

僵蚕抗凝成分仿生提取液的氨基酸序列分析

目的利用高效液相色谱-质谱法（LC-MS/MS）对僵蚕胃蛋白酶提取液的有效抗凝成分进行结构分析。方法采用Hola C₁₈ (2.1mm×100 mm,2.7 μm)色谱柱, 以0.05%甲酸水溶液-0.05%甲酸乙腈溶液为流动相,梯度洗脱, LC-MS/MS正离子模式分析,初步探究抗凝活性成分的相对分子量和氨基酸组成。结果僵蚕经胃蛋白酶解得到相对分子量500~1000的活性肽,且多肽为低于10个氨基酸组成的低聚肽。结论僵蚕蛋白类组分通过酶解为活性低聚肽发挥抗凝作用,胃蛋白酶提取法更具科学性。     

僵蚕提取物中氨基酸种类与含量测定

目的:研究僵蚕提取物中组成蛋白质的氨基酸残基种类与含量,为其质量控制和抗凝活性作用物质基础研究提供依据.方法:将样品用盐酸水解后采用RP-HPLC法测定15种氨基酸残基的种类与含量.结果:僵蚕提取物含有15种氨基酸残基,其总量为48.7%,其中谷氨酸、丙氨酸和缬氨酸残基较多,蛋氨酸和辅氨酸残基在水解过程中被破坏而未测出.结论:僵蚕提取物中的主要成分为蛋白质、多肽类成分,它们含有所测的15种氨基酸残基.该定量方法准确、可控,可用于僵蚕样品中氨基酸残基的分析.     

僵蚕抗凝成分对内毒素休克伴弥散性血管内凝血大鼠的保护作用研究

目的：探讨僵蚕抗凝成分（ACBB）对大鼠内毒素休克伴弥散性血管内凝血（DIC）的保护作用。方法：60只雄性SD大鼠被随机分为空白对照组、模型组及ACBB高、中、低剂量组，每组12只。采用静脉注射脂多糖（LPS）的方法复制大鼠内毒素休克伴DIC模型。ACBB高、中、低剂量组于注射LPS即刻分别由静脉注射ACBB36、18和9mg／kg;空白对照组给予等量生理盐水。注射LPS前及LPS后1、3和6h记录大鼠平均动脉压（MAP）f并于LPS后6h经颈总动脉取血，测定血浆副凝实验（3P实验）阳性率、D-二聚体含量、血小板计数（PLT）、纤维蛋白原（Fbg）含量及抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）活性。结果：与空白对照组比较，随时间延长，模型组MAP显著下降，6hPLT、Fbg、AT-Ⅲ均显著降低，D-二聚体、3P实验阳性率均明显升高，各指标比较差异均有显著性（P均〈0．01）。与模型组比较，ACBB各剂量组可明显抑制LPS引起的MAP降低，抑制3P实验阳性率，增加D-二聚体含量，防止休克后PLT、Fbg、AT-Ⅱ活性降低，两组比较差异均有显著性（P均〈0．01），且ACBB高剂量组各指标几乎接近于空白对照组。结论：ACBB对内毒素休克伴DIC大鼠具有保护作用。     

六种僵蚕炮制品的薄层鉴别与含量测定研究

目的:考察不同炮制方法对僵蚕中草酸铵、槲皮素和山奈酚的含量影响。方法:采用薄层色谱法对僵蚕6种炮制品进行薄层鉴别研究;采用高效液相色谱法测定各炮制品中草酸铵、槲皮素和山奈酚的含量。结果:僵蚕各炮制品的薄层色谱未见明显差异,但僵蚕经过炮制后体内草酸铵含量都有不同程度的下降。其中糖麸炒僵蚕的含量最低,而麸炒僵蚕中草酸铵含量下降的最少。僵蚕经过炮制后所含槲皮素与山奈酚的含量变化不大,与生品较为接近,但姜炙僵蚕与姜麸炒僵蚕中槲皮素与山奈酚的含量降低得较为明显。结论:不同炮制方法对僵蚕的化学成分含量有一定程度的影响,但影响幅度不尽相同。并且,不同的炮制方法功效各异,各有所长。为提高临床疗效和便于患者服用,可根据需要对其炮制方法灵活选择。     

基于菌落形态、显微特征、DNA条形码三种策略鉴定僵蚕表面真菌

目的：检测北京市零售药店僵蚕饮片表面所含真菌的种类,为临床安全用药提供参考依据。方法：培养僵蚕表面真菌,进行纯化,获得单一菌株。结合真菌菌落形态、显微结构特征、DNA条形码三种方法鉴 定僵蚕表面真菌。结果：从僵蚕饮片表面共获得真菌227株,共计10种。其中的8种真菌得到准确鉴定结果,2 种真菌为未知菌株。结论：初步了解北京市零售药店僵蚕表面真菌情况,为临床安全用药提供参考依据。     

银僵合剂治疗坏死性淋巴结炎

目的 观察3型坏死性淋巴结炎患者的临床表现以及银僵合剂对3型坏死性淋巴结炎的疗效.方法 根据病理分型将坏死性淋巴结炎患者分为3组:增生(PT)组29例、坏死(NT)组30例、黄色瘤型(XT)组28例,均给予银僵合剂内服加外熏.观察3组临床表现及治疗前后中医证候积分的变化.结果 PT、NT组中医证候积分明显高于XT组(P＜0.05).3组总有效率及复发率分别为PT组96.55％、3.60％;NT组96.66％、3.44％;XT组89.28％、4.00％,PT组与NT组比较无统计学意义(P＞0.05),与XT组比较有统计学意义(P＜0.01).结论 3组临床表现存在差异;银僵合剂在PT、MT2组中的疗效优于XT组.     

白僵蚕水提物对镉致胰岛β细胞毒性的影响研究

目的 探讨白僵蚕水提物对硫酸镉（CdSO4）致胰岛β细胞NIT-1细胞毒性的影响。方法 采用冷水浸泡法提取白僵蚕的水溶性成分。分别用（0、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4mg/mL）白僵蚕水提物染毒细胞24h;用4μmol/L CdSO4分别与（0.4和0.8mg/mL）白僵蚕水提物混合后共处理24h;以及用（0.4和0.8mg/mL） 白僵蚕水提物预处理2h,再以4μmol/L CdSO4分别染毒24h。采用CCK8、Hoechst33258染色以及荧光探针等方法分别检测NIT-1细胞存活率、细胞凋亡及活性氧ROS的水平。结果 （1）与对照组比较,细胞存活率随白僵蚕水提物染毒浓度的增加呈现出先升高后下降的趋势（P<0.05）;（2）与单独处理组相比,4μmol/L CdSO4与（0.4和0.8mg/mL）白僵蚕水提物共处理组细胞存活率均降低（P<0.05）,且预处理组细胞存活率相比白僵蚕单独处理组也降低（P<0.05）;（3）联合处理组细胞变圆、细胞核呈致密浓染,细胞凋亡率均高于白僵蚕和CdSO4单染组（P<0.05）;同时,联合处理组ROS荧光强度也升高,分别为白僵蚕和CdSO4单染组的1.18和1.05倍（P<0.05）。结论 白僵蚕水提物在低浓度下可促进NIT-1细胞的增殖,高浓度则降低细胞的存活率;低浓度的白僵蚕水提物无法拮抗CdSO4诱导的细胞死亡,反而增强了细胞毒性,其机制可能与凋亡和ROS水平增加有关。     

高效液相色谱法测定僵蚕中草酸铵的含量

目的建立高效液相色谱法测定僵蚕中草酸铵的含量。方法用CaCl2沉淀法作样品前的处理;色谱条件为色谱柱:Sino Chrom ODS-BP(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:磷酸氢二铵水溶液(5 g.L-1,pH 2.50);流速:0.5 mL.min-1;柱温:25℃;检测波长:214 nm。结果草酸铵在15.0~150.0μg.mL-1范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,r=0.995(n=6),平均回收率为96.5%,RSD为1.5%(n=5)。结论方法简便可靠,灵敏,专属性好,可用于僵蚕中草酸铵的含量测定。