青蒿素的组织化学定位及其含量相关性研究

目的 确定青蒿素储存部位并为高青蒿素含量黄花蒿植株筛选提供选择指标。方法 应用组织化学方法确定青蒿素的储存结构，应用统计学方法确定储存结构腺毛状分泌腺密度与青蒿素含量的相关性。结果 青蒿素储存于腺毛状分泌腺(BGT)和T-型网状分泌腺(NTFT)中，在叶中腺毛状分泌腺的密度与青蒿素含量正相关。结论 腺毛状分泌腺密度可作为高青蒿素含量黄花蒿育种筛选指标。     

人RANTES基因在转基因青蒿植株中表达的测定

目的 为了增强青蒿的特异药理活性，探讨人β-趋化因子RANTES基因在青蒿细胞中表达的可能性。方法 将克隆的RANTES基因经Ti质粒衍生的双元表达载体pRPKII导入根癌农杆菌LBA4404菌株，通过叶盘共培养法已获得一批表现卡那霉素抗性的转基因青蒿植株。结果 PCR和Southern印迹杂交分析表明，RANTES基因已导入并整合到青蒿基因组中；RT-PCR、Northern印迹、Western印迹杂交结果证实，RANTES基因已在转基因青蒿植株中成功表达。结论 首次报道了RANTES基因在转基因青蒿植株中的表达，为基因工程改造青蒿打下了良好的基础。     

大肠杆菌CodA基因表达赋予转基因青蒿负选择表型

目的为了验证CodA基因是否适宜作为有效的青蒿基因打靶负选择标记。方法用PCR法扩增大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因CodA,经克隆和测序后插入植物基因表达载体pROK,并导入根癌农杆菌LBA4404(pAL4404)中。以共培养法转化青蒿叶盘,在添加25μg/mL卡那霉素(Kan)的N6培养基上选择青蒿转化愈伤组织并再生绿芽。将Kan抗性转基因青蒿芽转植到含有500μg/mL5-氟胞嘧啶(5-FC)和25μg/mLKan的MS培养基上继续培养2周。结果转基因青蒿芽全部死亡,而未转化青蒿芽仍正常生长,表明导入CodA基因的青蒿细胞已赋予其预期的负选择表型。经RT-PCR检测,转基因青蒿芽显示CodA阳性扩增带,而未转化青蒿芽无此特异扩增带。这一结果显示,CodA基因已在青蒿细胞中转录生成相应的mRNA,从而进一步印证了表型检测结果。结论CodA基因可作为有效的青蒿基因打靶负选择标记。     

Wound healing effect of flavonoid rich fraction and luteolin isolated from Martynia annua Linn. on streptozotocin induced diabetic rats

ObjectiveTo evaluate wound healing potential of flavonoid fractions of Martynia annua (M. annua) Linn. leaves in diabetic rats on the basis of folkloric information and preliminary study.MethodsThe flavonoid compound luteolin and apigenin were isolated from dried leaves of plant by column chromatography. The two concentrations (0.2% and 0.5% w/w) of luteolin and flavonoid fraction were selected for topically applied as ointment on diabetic wound. The Povidone Iodine Ointment USP was used as a reference. On 18th days, protein content, hydroxyproline and antioxidants (SOD, CAT and GSH) level in granuloma tissues were determined.ResultsThe results showed that, percent wound contraction were observed significantly (P<0.01) greater in MAF fraction and 0.5% w/w of luteolin treatment groups. Presence of matured collagen fibres and fibroblasts with better angiogenesis were observed in histopathological studies.ConclusionsIn conclusion, our findings suggest that flavonoid fraction (MAF) and luteolin (0.5% w/w) may have potential benefit in enhancing wound healing in diabetic condition, possibly due to free-radical scavenging activity of plant.     

青蒿提取物对房颤大鼠心肌炎症相关因子TNF-α及ICAM-1表达的影响

目的观察青蒿提取物对房颤大鼠心肌炎症相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨青蒿抗心律失常的作用机制。方法将大鼠分为对照组、模型组、青蒿组、卡托普利组。采用氯化钙、乙酰胆碱混合液以舌下静脉给药的方式建立房颤动物模型,隔日重复1次,连续4周,停药后心电图仍有典型房颤改变为造模成功。实验当日,动物静脉血,ELISA法测样品中TNF-α、ICAM-1浓度。结果模型组血清TNF-α、ICAM-1水平较对照组均有提高(P<0.05)。卡托普利组在降低TNF-α、ICAM-1表达方面作用最为显著,青蒿组作用略差于卡托普利组(P>0.05)。结论青蒿提取物通过抑制炎症因子TNF-α、ICAM-1,抑制心脏结构重构和电重构,减少心律失常的发生。     

基于UHPLC-MS/MS的药用植物内源性激素含量检测方法及黄花蒿不同器官激素的测定

目的 激素是调控植物活性次生代谢产物合成途径的核心调控因子，内源激素结构多样、含量极低，检测难度高，缺乏高效、准确的检测方法。本研究利用超高效液相色谱串联质谱（UHPLC-MS/MS）技术构建了对黄花蒿中茉莉酸、细胞分裂素、赤霉素、生长素、脱落酸等多类植物内源性激素高效定量检测方法。方法 使用Agilent Poroshell 120 EC-C18（2.7 μm， 3.0×150 mm）色谱柱，流动相为0.05%甲酸水-乙腈溶液，梯度洗脱，采用多反应监测模式验证方法可行性，并对黄花蒿不同器官中植物激素进行定量分析。结果 本方法中检测的16种植物激素均呈良好线性，加样回收率、精密度和稳定性均符合植物样品的测定要求。利用此方法测定青蒿不同器官的激素含量，结果表明脱落酸、茉莉酸、茉莉酸甲酯均在叶中含量较高，赤霉素和生长素在根部含量高，细胞分裂素在叶和茎中含量高。结论 青蒿不同器官的激素测定结果可进一步印证脱落酸、茉莉酸、茉莉酸甲酯在调控青蒿素合成中起着重要作用的相关报道，同时表明该方法检测性良好。本文构建的植物内源性激素的检测方法为进一步探究植物生长发育、抵御外界胁迫的相关机制及次生代谢产物的合成等方面提供了手段。     

范永升教授运用青蒿治疗SLE临床经验

[目的] 总结全国名中医范永升教授运用青蒿治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的临床经验,提高对SLE的认识。[方法] 通过跟师学习,收集范教授诊治的SLE患者的临床资料,以及整理医案、查询相关文献,回顾分析范教授在SLE的不同阶段运用青蒿及并配伍相关药物的临床经验,并以验案佐证。[结果] 范教授通过辨证论治,以青蒿之清热解毒,治疗SLE轻型阴虚兼有热毒证;以青蒿之透邪滋阴,治疗SLE轻型余邪内伏证;以青蒿之清胆理气,治疗SLE重型肝郁血瘀证。所举病案中分别以解毒祛瘀滋阴方及蒿芩清胆汤治疗轻型及重型SLE,治疗后患者症状改善,SLE疾病活动(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)评分降低。[结论] 范教授针对SLE的不同阶段,运用青蒿清透虚热、凉血除蒸、解暑截疟,并配伍相关药物,疗效显著,其经验值得推广学习。     

不同生长期土壤水分处理对黄花蒿 生理特性及产量的影响

目的:对不同土壤水分下黄花蒿生理及产量特性进行分析,研究黄花蒿抗旱生理及需水特性.方法:采用盆栽试验,在不同生长期设置不同的土壤水分处理,在处理后2周及花蕾期前进行采样分析.结果:各生长期不同土壤水分对黄花蒿内渗透调节物质含量、保护酶活性、生物产量及青蒿素累积都有很大影响.在土壤水分胁迫时叶片水分含量下降,质膜透性增加,脯氨酸快速积累以增强细胞的保水能力,保护酶POD与CAT二者相互协调并与SOD共同作用降低膜脂过氧化程度,减少膜的损伤.土壤水分降低时黄花蒿生物量下降,而青蒿素含量与产量反应复杂.苗期处理的土壤水分在50%～55%时青蒿素含量和产量最高,分枝初期处理的土壤水分为50%～55%时青蒿素含量最高,70%～75%时青蒿素产量最高,分枝末期处理的土壤水分在40%～45%时青蒿素含量最高,60%～65%时产量最高.结论:黄花蒿各生长时期对土壤水分的要求不同,苗期最适土壤水分范围为50%～55%,分枝初期和分枝末期时在较高的土壤水分下青蒿素产量较高.     

紫外分光光度法测定不同产地黄花蒿中青蒿素的含量

目的:研究云阳县不同产地的黄花蒿所含的青蒿素的差异。方法:采用紫外分光光度法测定,检测波长292nm。结果:对照品在0.02～0.14mg/mL范围内具有良好的线性关系,r=0.9998,平均回收率为98.81%(n=7),方法精密度试验RSD=0.38%。结论:该方法简便、快速、准确;云阳县不同产地的黄花蒿的青蒿素含量接近,适合在当地大规模栽培。     

中国黄花蒿主产区种质资源评价

目的:评价筛选出优良的黄花蒿种质资源,为我国黄花蒿种质资源数据库和新品种选育提供基础材料。方法:在黄花蒿主产区采集种质资源72份,引种至广西靖西县和广西药用植物园(南宁)种质资源圃,于现蕾期采收叶片和花蕾,采用超声波法提取青蒿素,紫外分光光度法测定其含量。结果:多数不同黄花蒿种质之间的叶片产量和青蒿素质量差异显著。黄花蒿的青蒿素含量受环境的影响较大,同一黄花蒿种质种植于不同地点,其青蒿素含量不同。黄花蒿的遗传变异比较大,引种后第2年的黄花蒿青蒿素含量有下降趋势。结论:原产南方的7份种质表现较好,其青蒿素质量分数均高于0.90%,理论产量在2 250 kg.hm^-2以上。黄花蒿的青蒿素含量与其自身遗传特性及生长环境的差异有较大关系。