Nestin-LacZ转基因小鼠脊髓损伤动物模型的建立及评价

[目的]建立标准的Nestin-LacZ转基因小鼠脊髓损伤动物模型及评价体系。[方法]采用NestinLac Z转基因小鼠18只,随机分为三组,实验组2个,对照组1个。2个实验组均采用自行研制的啮齿类动物脊髓损伤模型打击器,质量为10 g的打击棒,A实验组用接触直径为2.0 mm的打击棒杆头压迫,压迫时间为3 min(A组,6例);B实验组按照实验设定的高度10.0 mm实施打击(B组,6例);对照组仅行椎板切除,不打击(C组,6例)。分别于术前,术后第1、2、3、4、5、6周进行转基因小鼠BBB运动评分,取出脊髓组织后,行脊髓组织HE染色。[结果]Nestin-LacZ转基因小鼠不同的脊髓损伤模型在各个时间点上BBB评分差异有统计学意义(P0.05),A组在脊髓损伤造模术后2周,后肢功能开始恢复,而B组至术后6周均无后肢功能恢复,对照组无功能障碍。[结论]啮齿类动物脊髓损伤模型打击器采用持续慢性压迫脊髓可成功建立Nestin-Lac Z转基因小鼠稳定、理想的急性脊髓损伤模型。     

K1和K2血清型肺炎克雷伯菌耐药性与可移动遗传元件研究

目的分析K1型肺炎克雷伯菌和K2型肺炎克雷伯菌的耐药基因和可移动遗传元件的分布。方法收集南昌大学第一附属医院2015年1月-2017年12月分离735株非重复肺炎克雷伯菌作为实验菌株,筛选出63株K1型肺炎克雷伯菌和29株K2型肺炎克雷伯菌,进行药物敏感性分析,PCR检测13种耐药基因和13种可移动遗传元件标记。结果 K1、K2血清型肺炎克雷伯菌对头孢唑林和头孢曲松耐药率较高,>20%,对其他抗菌药物都表现较高的敏感性,但出现耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌;K1、K2血清型肺炎克雷伯菌acc6-Ib-cr和qnrS携带率较高,对其他耐药基因的携带率较低,但出现2株K1型和2株K2型携带KPC基因;除厄他培南和SHV基因外,K1型和K2型肺炎克雷伯菌对其它抗菌药物的耐药率和耐药基因的携带率差异无统计学意义,但K1型肺炎克雷伯菌对大部分抗菌药物的耐药率和耐药基因的携带率均低于K2型肺炎克雷伯菌;可移动遗传元件检出1种接合性质粒标记基因,1种整合子标记基因,4种插入序列标记基因,以traC基因和intI1基因阳性率最高。结论 K1、K2血清型肺炎克雷伯菌对大部分抗菌药物敏感性较高,耐药基因阳性率低,可移动遗传元件携带率较低;K1型和K2型高毒力肺炎克雷伯菌耐药表型的出现可能与携带可移动遗传元件相关。     

受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ转基因载体的构建及其在细胞水平上的有效性检测

目的：构建一种可以在哺乳动物细胞中蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的受控型转基因载体，为制备受控型蜕皮激素诱导表达截短型MGF-Ⅰ的转基因小鼠奠定基础。方法：利用分子克隆技术构建受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的转基因载体；将其电转至AM1菌中，利用其中的Cre重组酶将载体上两个同向LoxP序更锚定的新霉素（neomycin）基因删除，解除其对蜕皮激素诱导表达系统的阻断作用，利用PCR、酶切和测序鉴定删除情况；将重组后的载体转染至COS7细胞中进行瞬间表达，蜕皮激素诱导后回收培养上清和细胞裂解物进行Western印迹分析，检测hIGF-Ⅰ的表达情况。结果和结论：成功构建大小为13．6kb的转基因载体pOE-IGF-Ⅰ；转化至AM1中后，PCR、酶切和测序的结果都证明其中的Cre酶能够将载体上neomycin基因删除；重组后的载体转染至COS7细胞中进行诱导表达，Western印迹实验证明截短型MGF-Ⅰ能够在COS7细胞中顺利表达。上述结果证明该蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的受控型转基因载体能够用于转基因小鼠的制备。     

抑制脑血栓形成的硫代磷酸酯脱氧寡核苷酸的亲和性研究

目的为抑制脑血栓形成,合成与TF基因启动子区切应力反应元件(SSRE)形成三链DNA的硫代磷酸酯寡核苷酸(TFO)。方法设计TFO序列14条,采用固相亚磷酰胺三酯固相法合成TFO。硫代磷酸酯修饰在TFO的3'末端进行。应用电泳迁移分析(EMSA)观察寡核苷酸和硫代脱氧寡核苷酸的亲和性。结果在设计合成的14条寡核苷酸中,与靶序列能形成三链DNA的TFO只有T21GTa、T14GTa和T15GTa,其Kd值分别为3.6×10-10、1.0×10-9和1.0×10-8(M),经硫代磷酸酯修饰后分别为:2.3×10-9、3.8×10-9和1.5×10-8。结论硫代磷酸酯修饰的T21GTa-ps、T14GTa-ps和T15GTa-ps能够与TF基因启动子SSRE的3个位点形成三链DNA。     

植物抗体及其应用

20世纪80年代末科学家将抗体基因转入烟草表达,标志着植物抗体的诞生.人类既可以以植物为生物反应器异源表达和生产具有药用及商业价值的蛋白质;也可用抗体在植物体中进行免疫调节,以研究植物生理代谢机制,或增加植物抵抗病虫害的能力.本文旨对植物抗体的优越性、表达生产及其在医药学、植物抗病及代谢等领域的进展进行综述和讨论.     

苯并[a]芘对内皮细胞HSF1与HSE结合特性分析

目的研究苯并[a]芘（BaP）作用下热休克转录因子1（HSF1）与热休克元件（HSE）结合特性，分析BaP对热应激蛋白70（HSP70）的表达的影响。方法取对数生长期的猪主动脉内皮细胞传代培养，分别以不同浓度的BaP染毒（0、0．1、0．5、1、5、10μmol／L）24h，提取细胞核蛋白，用凝胶阻滞电泳实验（EMSA）检测结合率。结果低（0．1μM）、中剂量（0．5，1μM）BaP可使HSF1-HSE结合率上升，高剂量（5，10μM）BaP使HSF1-HSE结合率明显降低。结论BaP可改变细胞HSF1-HSE结合能力，低、中剂量的BaP使HSF1-HSE结合率升高，提示可促进HSP70表达，高浓度BaP可抑制HSP70的表达。     

MR显微成像检测活体阿尔茨海默病转基因小鼠老年斑沉积的效果

目的利用MR显微成像技术研究阿尔茨海默病转基因小鼠老年斑的沉积情况。方法2只17个月龄阿尔茨海默病转基因[V717I]小鼠和2只野生型小鼠，行活体T2WI，然后对照影像定位结果进行组织学切片及免疫组织化学染色。观察T2WI中老年斑的沉积情况以及其与免疫组织化学染色结果的对应关系。结果转基因小鼠T2WI上显示大脑皮层和海马区可见点状低信号，且部分低信号可以和组织学切片所显示的老年斑相对应；野生型小鼠T2WI未见明显的低信号，免疫组织化学染色也未见到染色阳性的斑块。结论MR显微成像技术检测老年斑的沉积是可行的，且可用来特异性地诊断阿尔茨海默病。     

病理生理学

硫化氢对大鼠离体灌流心脏心功能的影响；我国辽宁地区遗传性粘多糖贮积症Ⅰ型患者α-L-艾杜糖醛酸酶基因突变的研究；自身免疫反应参与大鼠急性心肌梗死后心肌损伤的实验研究；细胞外信号调节的蛋白激酶对糖尿病大鼠心肌缺血预处理的影响；丹参在常氧、急性低氧及氧反常等条件下对心室肌细胞L-Ca电流的影响；牛磺酸对低氧条件下豚鼠心室肌细胞动作电位和ATP敏感性钾电流的影响；LPS对鼠肺微血管内皮细胞水通道蛋白-1表达及其功能的影响；磷酸化ERK1／2对大鼠体外血小板聚集的可能作用；PKC和MMPs在实验性大鼠动脉粥样硬化形成中的作用及丹参的作用机制；活化蛋白-1和cAMP反应元件结合蛋白在脂多糖注射大鼠肺组织中的变化及地塞米松的影响；急性多发脑梗塞大鼠海马皮层MARCKS蛋白的表达与活性的变化；靶向腺病毒载体介导的EGFP基因在甲胎蛋白阳性肝癌细胞的特异表达；胰腺癌中MAT1蛋白的表达与其临床病理特征的关系；脑血清对EP性发热家兔下丘脑及脑脊液cAMP含量的影响；三丁基过氧化氢诱导WI-38细胞衰老的细胞周期调控机制；复方黄芪提取物抗急性肝损伤作用的研究；不同年龄高血压大鼠心肌中MKP-1的表达及对心肌肥厚的影响；苯丙氨酸缓解高血压大鼠血管重塑；一氧化氮合酶抑制剂氨基胍对脑缺血大鼠脑组织氨基酸含量的影响；左旋卡尼汀对缺氧／复氧诱导的子鼠心肌细胞凋亡的影响；自体骨髓基质干细胞移植治疗兔缺血心肌的实验研究；PGI2对肾缺血再灌损伤兔肠系膜微循环和血液流变性的影响；一氧化氮合酶2抑制剂对大鼠心肌梗死后左心室形态及心功能的影响；实验性肺鳞癌中不同亚型蛋白激酶C表达的研究；兔骨髓间充质干细胞自体移植治疗扩张型心肌病的实验研究；高敏C反应蛋白与代谢综合征组分及靶器官损害的关系；血管内皮祖细胞对缺血肢体血管生成的影响；心血管危险因素与小动脉弹性的关系；实验性心房颤动血栓形成时内皮型一氧化氮合酶和纤溶酶原激活剂抑制物-1的变化；重症高血压大鼠左心室肥厚时肾上腺髓质素系统的上调；冠心病患者血管内皮功能障碍与动脉弹性关系的研究；骨髓增生异常综合征细胞周期调控基因表达谱的研究；血管内皮生长因子反义寡核苷酸增强髓系白血病细胞对三尖杉酯碱敏感性；急性白血病视网膜母细胞瘤相关蛋白46基因和蛋白表达谱的变化及意义；血栓性血小板减少性紫癜思者血管内皮细胞标志物和溶血参数的动态分析及其临床意义；白血病患者血管新生及相关因素研究；氯通道阻断剂对血小板胞浆游离钙和血小板聚集的影响；CD44s的表达与胶质瘤分级的关系。     

转人GM—CSF基因人膀胱癌细胞株的建立及体外生物学特性

经逆转录病毒载体将人GM-CSF基因导入人膀胱癌细胞株BIU-87细胞中,建立了转基因细胞株BIU/GM。经流式细胞仪行细胞DNA周期分析表明GM-CSF基因的导人及表达对BIU-87细胞的增长无影响。免疫荧光测定发现转GM-CSF基因及表达不能促进BIU-87细胞表面HLA-ABC、DR、DQ抗原的表达。转基因瘤细胞株经6000rad X射线照射灭活后,丧失增殖能力,逐步死亡,但能维持一定水平的GM-CSF分泌活性达两周以上。从而为制备灭活的转基因瘤苗提供了初步经验。