PCR-RSSO基础上HLA-Ⅰ、Ⅱ基因分型的研究

目的通过对PCR-DNA技术的分析,探讨人类白细胞抗原(HLA)基因分型方法。方法采用PCR反向序列特异性寡核苷酸(polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术,建立改良半量扩增体系全自动HLA-I、Ⅱ等位基因分型方法,进行了635份血液标本HLA-A、B、C、DR、DQ等位基因分型,其中166份DNA同时采用序列特异性引物技术(PCR-SSP)和手工全量扩增体系PCR-RSSO技术。对全自动半量PCR-RSSO、PCR-SSP、手工PCR-RSSO 3种方法做两两比较。结果全自动半量PCR-RSSO的分型成功率为98.4%(3 124/3 175),PCR-SSP为98.8%(656/664),手工PCR-RSSO为88.3%(733/830)。经χ2检验,全自动半量PCR-RSSO与PCR-SSP的分型成功率无统计学差异,与手工PCR-RSSO有显著差异(P<0.05)。结论PCR-RSSO可识别HLA-Ⅰ,Ⅱ共706个等位基因,覆盖WHO命名委员会2000年公布的936个等位基因的75.43%;对706个HLA等位基因的分型均为中~高分辨率,有分辨纯合子等位基因的能力;易长期保存书面的实验原始资料,即杂交条;具有成本低、劳动强度低、省时和DNA消耗量少等优点。PCR-RSSO适合于造血干细胞移植和建立造血干细胞及脐带血干细胞库的组织配型。     

中重型β地中海贫血基因类型分析

目的 了解中间型和重型β地中海贫血基因突变类型及其相关血液，生化变化。方法 应用反向点杂交法检测16种β地贫点突变基因，常规进行血细胞分析及其他地贫筛查试验。结果 27例中重型β地贫患者中10例为纯合子，17例为双重杂合子，10例纯合子中5例CD41-42纯合子，占50%，3例TATAnt-28纯合子，占30%；CD17纯合子和IVS-nt654纯合子各1例，各占10%，17例双重杂合子中5例为IVS-nt654/CD41-42占29.4%,3例为CD17/CD41-42，占17.6%;3例为TATAnt-28/CD41-42，占17.6%;2例为βE/IVS-nt654,占11.6%;CD17/TATAnt-28,IVS-nt654/CD17,IVS-nt654/CD1-1,1CD71-72/IVS-nt654各1例，各占5.9%。27例患者血红蛋白均低于90.0g/L。平均为58.8g/L；平均MCV为65.0fl。脆性均少于60%。结论 中重型β地中海贫血基因突变类型多样，组合类型不同，临床表现轻重不一，多呈中重度贫血，血液，生化均有明显改变，多需输血维持生命，故应做好产前诊断，预防其出生。     

妇科疾病中人乳头瘤病毒感染的分子流行病学调查

目的:探讨各种妇科疾病与人乳头瘤病毒感染的关系,建立不同妇科疾病和不同年龄段妇女人乳头瘤病毒感染的流行病学资料库。方法:应用反向点杂交技术分别对疾病组1 512例病人标本和正常组500例标本进行HPV检测,所得数据用SPSS 13.0软件包进行统计分析。结果:正常组500例标本中,阳性标本101例,感染率为20.2%,疾病组1 512例标本中,阳性标本523例,感染率为34.6%,其中双重感染82例,占阳性标本的15.7%,多重感染34例,占阳性标本的6.5%,而高危感染340例,感染率为22.5%,占阳性标本的65.0%,其中单纯HPV16亚型感染155例,占所有阳性标本的29.6%;不同年龄段、不同性生活史、不同妇科疾病以及不同首次性生活年龄的HPV感染检出率都有显著性差异。结论:正常组和疾病组的HPV感染率有显著性差异(2χ=36.37,P<0.01)。在HPV感染的普查中可以有重点的选择高危人群,这样更加有针对性,从而大大降低普查成本。     

反向血凝抑制试验在鼠疫疫情处理中的应用和结果分析

目的 了解反向血凝抑制试验方法对鼠疫病原体的诊断效果。方法 应用反向血凝抑制试验方法对鼠疫可疑疫区的动物脏器及疑似病人的淋巴液标本检测和对阳性结果作噬菌体裂解试验方法进行比较。结果 使用反向血凝抑制试验和噬菌体裂解试验方法的阳性结果基本一致。结论 反向血凝抑制试验是检测鼠疫病原体方便、特异、快速的好方法。     

大鼠左室肥厚到心衰转变过程中心室肾上腺髓质素系统的变化

在很多病理情况下,如高血压、肺动脉高压、心肌梗死、充血性心力衰竭(CHF)时,血浆肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)水平升高,在心衰中AM水平升高与心衰程度密切相关。研究发现,在高血压模型中压力负荷、容量负荷过重及心肌梗死时可促进心脏AM基因表达;缓慢提高AM水平,参与一系列病理生理变化,以改善心脏     

三种粪便隐血试验的比较研究

粪便隐血试验是检测消化道微量出血的重要手段。本文用三种隐血试验:血红蛋白定量试验(HQT)、反向间接血球凝集试验(RPHA)和联苯胺试验(BT)对不同消化道疾病患者的粪便进行检测。结果表明隐血的检出用HQT和RPHA较BT更为特异和敏感。     

用核糖体RNA ITS区序列寡核苷酸探针鉴定临床常见真菌

目的：建立一种快速鉴定临床常见真菌菌种的方法。方法:选取真菌核糖体RNA的ITS区为靶基因，设计通用引物和种特异性探针，将3个属的6种临床常见真菌(白色念珠茵、热带念珠茵、光滑念珠茵、新型隐球菌、烟曲霉和黄曲霉)的种特异性探针加尾后固定于硝酸纤维素膜上；用标记生物素的真菌通用引物扩增11种医学真菌DNA，产物与固定在膜上的探针杂交。结果：通用引物可以扩增所试11种医学重要真菌的DNA，扩增片段长度约为560bp。6种真菌扩增产物只与其对应的探针杂交。结论：此方法快速、简便、特异，适合常规实验室开展。     

反向间接血凝法粪便潜血试验筛检大肠新生物的效果评价

反向间接血凝法粪便潜血试验筛检大肠新生物的效果评价周伦余海郑树为了客观评价反向间接血凝法粪潜血试验（ＲＰＨＡＦＯＢＴ），我们在一个大肠癌高危人群中用６０ｃｍ纤维肠镜作参比标准，对ＲＰＨＡＦＯＢＴ的各种方案在筛检大肠新生物中的效果作一评价。一、对象和方...     

海南地区β-地中海贫血基因突变类型的研究

目的　了解海南省 β -地中海贫血基因突变类型特点。方法　用反向点杂交法分析 30例临床诊断为 β -地中海贫血患儿及 3对曾生育过重型地贫患儿的夫妇的基因突变类型。结果　 30例患儿中 7例为纯合子 ;1 5例为双重杂合子 ;8例为杂合子。 58条 β -地贫阳性染色体中确定 8种突变类型 ,其中CD41 - 4 2 (-TTCT) (占 51 7%) ;- 2 8(AG) (占1 3 8%) ;CD71 - 72 ( A) (占 1 0 3 %) ;IVS-II- 654(CT) (占 1 0 3 %) ;- 2 9(AG) (占 1 72 %) ;CD1 7(AT) (占 1 72 %)CD2 6(GA) (占 1 72 %) ;起始codon(ATGACG) (占 1 72 %)还有不明 (占 6 9%)。结论　海南省 β -地中海贫血的基因突变类型与国内广东、广西、湖北相似 ,以CD41 - 4 2 ,- 2 8,CD71 - 72 ,IVS -II 654 ,4种类型为常见。明显不同于海南黎族     

新型冠状病毒RBD区重组流感病毒的拯救及初步鉴定北大核心CSCD

目的利用流感反向遗传技术,以B型流感病毒B/Yamagata/16/88株作为骨架,表达新型冠状病毒(SARSCoV-2)S蛋白的受体结合域(RBD),构建以B型流感病毒为载体的新型冠状病毒疫苗候选株。方法基因合成新冠病毒参考株S蛋白上的RBD基因片段(318-541aa),对B型流感病毒B/Yamagata/16/88/的NS1片段进行设计改造并插入RBD序列,构建重组质粒NS110-RBD。将NS110-RBD与其余7个骨架株重组质粒共转染293T细胞和MDCK细胞,拯救表达新型冠状病毒RBD区重组流感病毒,对拯救出的毒株进行形态学、分子生物学鉴定及病毒滴度和Western blot检测。结果成功拯救出重组流感病毒株并命名为rIBV-NS110-RBD。PCR鉴定RBD目的基因大小正确,测序表明拯救病毒株的序列正确,在透射电镜下观察到拯救病毒株的病毒粒子具有流感病毒粒子的典型特征。经测定,拯救株rIBV-NS110-RBD在MDCK细胞上的病毒滴度为10^(5.5) TCID_(50)/ml,在鸡胚上的病毒滴度为10^(6.5) EID_(50)/ml,血凝效价最高达2_(5);Western Blot检测到RBD的表达,其分子质量为35ku。结论成功拯救出高表达新型冠状病毒RBD蛋白的高血凝效价的重组流感病毒株,该病毒具有流感病毒粒子的典型特征,为以B型流感病毒为载体作为新型冠状病毒疫苗的研发提供了新思路。