醋制降低京大戟细胞毒性部位对小鼠肝脏氧化损伤机制研究

<正>京大戟为大戟科植物大戟(Euphorbia pekinensis Rupr.)的干燥根[1],始载于《神农本草经》,列为下品,为中医临床常用的峻下逐水药。其性寒,味苦,有毒。由于其生品毒性较大,故采用醋制法降低京大戟的毒性,缓和其泻下作用[2]。本课题组前期实验已经证实京大戟的细胞毒性部位为石油醚、乙酸乙酯部位[3],但有关醋制降低京大戟毒性作用的物     

京大戟石油醚提取部分化学成分的研究

目的：对京大戟（Euphorbia pekinensis Rupr.）进行化学成分研究。方法：采用溶剂提取、硅胶、ODS柱色谱及制备HPLC等进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定结构。结果：从京大戟的石油醚提取部分分离得到3个化合物,分别鉴定为24-亚甲基-环阿尔廷醇（Ⅰ）,大戟醇（Ⅱ）,甘遂甾醇（Ⅲ）。结论：化合物Ⅰ系首次从该植物中分离得到。     

京大戟和甘遂炮制前后大戟二烯醇的含量比较

目的:建立有毒中药京大戟与甘遂生品、醋制品中大戟二烯醇的含量测定方法,并比较两者炮制前后的含量变化。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil ODS(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(98∶2),柱温为30℃,流速为1.0mL·min-1,检测波长为210nm。结果:大戟二烯醇进样量在0.42～6.23μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9998);京大戟和甘遂生品的平均加样回收率分别为99.28%和99.80%,RSD分别为1.69%和1.83%(n=9)。京大戟中大戟二烯醇的含量明显高于甘遂,且醋制不会对大戟二烯醇的含量造成显著影响。结论:本方法能准确测定京大戟和甘遂中大戟二烯醇的含量。     

京大戟醋制前后UPLC指纹图谱及含量测定的比较

目的建立京大戟、醋大戟的超高效液相色谱指纹图谱,并同时测定其中胡萝卜苷和大戟二烯醇的含量。方法采用UPLC-DAD法,Kromat Universil XB C8色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm),检测波长:203 nm,柱温:30℃,以乙腈-水为流动相进行二元梯度洗脱,流速为0.2 m L·min~(-1)。建立京大戟、醋大戟指纹图谱,采用国家药典委员会颁布的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件"(2009)对来源全国10个产地的京大戟、醋大戟进行分析评价,并对其中2个色谱峰进行指认及含量测定。结果 10批京大戟指纹图谱中标定了23个共有色谱峰,相似度值为0.910~0.993。10批醋大戟指纹图谱中标定了18个共有色谱峰,相似度值为0.900~0.987。胡萝卜苷和大戟二烯醇质量浓度分别在6.8~68.0 mg·L~(-1)和5.8~58.0 mg·L~(-1)内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为98.2%和98.4%。结论该法所建立的指纹图谱可为京大戟石油醚部位的质量评价和京大戟醋制减毒研究提供一定参考。     

京大戟的化学成分研究

目的研究京大戟的化学成分,为寻找新的抗肿瘤活性成分以及为大戟质量标准研究提供合适对照品。方法用95%乙醇提取,硅胶柱色谱分离纯化,根据理化性质和光谱数据分析确定结构。结果分得8个化合物,分别鉴定为正十八烷醇(octadecanol,Ⅰ)、3-甲氧基-4-羟基反式苯丙烯酸正十八醇酯(octadecanyl-3-methoxy-4-hydrox-ybenzeneacrylate,Ⅱ)、β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅲ)、正三十烷酸(triacontanoic acid,Ⅳ)、2,2′-二甲氧基-3,3′-二羟基-5,5′-氧-6,6′-联苯二甲酸酐(2,2′-dimethoxy-3,3′-dihydroxy-5,5′-oxo-6,6′-biphenylformic anhydride,Ⅴ)、大戟醇(euphol,Ⅵ)、tirucallol(Ⅶ)、京大戟素(euphpekinensin,Ⅷ)。结论化合物Ⅰ、Ⅳ、Ⅵ和为首次从京大戟中分离得到。     

京大戟对紫杉醇口服生物利用度的影响

目的评价合用京大戟提取物对紫杉醇经大鼠不同肠段透过性和口服生物利用度的影响。方法分别采用体外Ussing
Chamber实验和大鼠in vivo实验,选用P-糖蛋白（P-gp）抑制剂维拉帕米为阳性对照,对比京大戟提取物对紫杉醇经不同肠段透
过的差异性和口服生物利用度评价。紫杉醇的体外透过液和血药浓度分别用HPLC方法和LC-MS/MS方法进行测定。结果
Ussing Chamber实验中,京大戟组紫杉醇经空肠、回肠粘膜透过时,吸收方向转运（M-S）和分泌方向转运（S-M）与阳性对照组和
空白组比较,表观渗透系数（Papp）均有显著性差异（P<0.05）,但在结肠S-M组与空白组相比没有显著性差异（P>0.05）。表明京
大戟提取物能提高紫杉醇经肠粘膜的透过性,其作用主要发生在空肠、回肠段。大鼠in vivo实验结果显示,合用京大戟提取物
后,紫杉醇的药时曲线下面积（AUC）和最高血浆浓度（Cmax）的平均值显著大于空白组,明显大于阳性对照组。京大戟组紫杉醇
的绝对生物利用度（AB%）为7.63%,是空白对照组的2.7倍,阳性对照组的1.8倍。结论合用京大戟提取物,能显著提高紫杉醇
经肠道的吸收,在一定程度上能促进紫杉醇的口服生物利用度。
     

京大戟现代研究概述

查阅近年国内京大戟研究文献,对其药材基原、化学成分、药理药效、历史沿革、临床应用等方面进行分析整理,尤其对京大戟的化学成分、炮制方法做了较为详细的总结,通过对书籍和文献的系统归纳,得出了较为明确的结论,为今后京大戟的规范化研究提供理论依据。     

HPLC同时测定京大戟生品和炮制品中3种三萜类成分含量

目的: 建立同时测定京大戟生品和炮制品中甘遂甾醇、大戟二烯醇和24-亚甲基环阿尔廷醇含量的方法。 方法: 采用HPLC,Agilent XDB C₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相乙腈-水(90:10),流速1.0 mL·min^-1,柱温35 ℃,检测波长205 nm。 结果: 甘遂甾醇、大戟二烯醇、24-亚甲基环阿尔廷醇分别在0.506~5.06 μg (r=1.000 0),1.052~10.52 μg (r=0.999 9)和1.124~11.24 μg(r=0.999 8)线性关系良好。平均加样回收率分别为99.7%(RSD 0.9%),99.4%(RSD 1.0%),99.4%(RSD 1.3%)。 结论: 方法简便、快速、灵敏度高、专属性好,为京大戟药材及其炮制品质量控制提供依据。     

金背枇杷叶、鱼藤、京大戟的中毒解救方

金背枇杷叶学名：Rhododendron PrzewalskiiMaxkn．（陇蜀杜鹃1别名：光背杜鹃、野枇杷。基原：为杜鹃花科杜鹃花属植物陇蜀杜鹃的叶。性味：凉,苦,有大毒。     

醋制降低京大戟对人正常肝细胞LO2的毒性及机制研究

目的:比较京大戟醋制前后对人正常肝细胞LO2的毒性作用,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养LO2细胞,用不同浓度的京大戟生品和醋品对其进行处理,MTT法测定各样品对LO2细胞增殖的抑制作用;Hoeehst 33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态学改变;AnnexinV/PI染色流式细胞术检测LO2细胞凋亡;PI染色流式细胞术分析其对细胞周期的影响;检测细胞培养液上清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活力,细胞裂解上清超氧化歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量.结果:与阴性对照组比较,京大戟生品各浓度组均可抑制LO2细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起细胞S期阻滞(P＜0.05);能显著升高细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P＜0.05),显著降低细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、增加MDA含量.醋制后,与京大戟生品组比较,可显著降低细胞凋亡率、降低细胞周期阻滞,显著降低细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P＜0.05),显著升高细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、显著降低MDA含量.结论:醋制可降低京大戟对LO2细胞的毒性,其机制可能是减轻氧化损伤,从而降低细胞周期阻滞,减少细胞凋亡.