产孢丝状真菌体外药敏试验

随着糖皮质激素、免疫抑制剂和高效、广谱抗生素的广泛应用、器官移植、各种导管介入性治疗的开展以及肿瘤、艾滋病的出现,导致条件致病性真菌感染日益增多,使得由丝状真菌引起的条件致病菌感染的发病率逐年升高,促使研究人员不断探讨和完善有关丝状真菌的体外药敏试验方法,评估其临床价值.产孢丝状真菌体外药敏试验方法主要有M38-P方案、M38-A方案、Etest法、流式细胞仪活性染色检测的应用、MTT和XTT比色法等.NCCLS方案具有准确性强、重复性好的特点,但是,还不能将其作为常规实验室检查方法,体外抗真菌药敏实验结果与临床疗效的关系是复杂的,成功的临床治疗不仅取决于致病菌的敏感性,也取决于宿主的免疫机制、药物的分布、患者的依从性等诸因素,药敏实验的MIC值高不意味着治疗失败,同样,MIC值低也不表明临床治疗一定成功.     

双甲酸涂靶法对丝状真菌鉴定的临床应用评价

目的探讨双甲酸涂靶法对临床丝状真菌鉴定的应用价值,优化质谱仪对丝状真菌鉴定的前处理流程。方法收集2019年2月至2020年5月广东省人民医院临床分离丝状真菌212株,经形态学初筛并以基因测序为标准,评价双甲酸涂靶法及乙腈-甲酸提取法对菌株鉴定的一致性。结果 212株丝状真菌经基因测序至种、复合群、属的鉴定率分别为84.91%、100%、100%,经双甲酸涂靶法和乙腈-甲酸提取法鉴定至种、复合群、属的鉴定率分别为43.87%、91.04%、91.04%和45.75%、93.40%、93.40%。与测序法比较,双甲酸涂靶法和乙腈-甲酸提取法在种、复合群、属的鉴定Kappa值分别为0.022、0.421、0.421和0.056、0.536、0.536;双甲酸涂靶法与乙腈-甲酸提取法鉴定一致性比较,种、复合群、属水平Kappa值分别为0.880、0.726和0.726。结论双甲酸涂靶法前处理流程在丝状真菌的鉴定能力上与乙腈-甲酸提取法接近,可应用于临床丝状真菌的前处理质谱鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定丝状真菌的影响因素分析

  目的  评估菌株培养条件、培养天数以及结果判定截断值(cut-off value, COV) 3种因素对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)鉴定丝状真菌能力的影响。  方法  将78株受试丝状真菌分别接种到沙堡弱葡萄糖琼脂(sabouraud dextrose agar, SDA)、土豆葡萄糖琼脂(potato dextrose agar, PDA)两种培养基及28、35℃两种培养温度共4种组合的培养条件下进行培养, 并于培养第2、3、4、5天以及第7天对其进行MALDI-TOF MS分析, 根据鉴定率的差异筛选菌株MALDI-TOF MS鉴定用最佳培养条件和培养天数; 下调MALDI-TOF MS结果判定COV, 分析其对MALDI-TOF MS丝状真菌鉴定率的影响。  结果  受试菌株在SDA和PDA两种培养基间的MALDI-TOF MS鉴定率无显著性差异(χ²=0.467, P=0.792), 但28℃培养温度下的鉴定率高于35℃培养温度(χ²=7.195, P=0.027);培养第2、3天种水平(40.3%和34.3%)和属水平(44.8%和46.3%)鉴定率均较高; 将MALDI-TOF MS种水平判定COV由 > 2.0下调至 > 1.7后, 受试菌株种水平判定率显著提升(85.9%比32.1%, χ²=40.119, P < 0.01)且不增加错误鉴定率。  结论  丝状真菌以SDA或PDA培养基28℃培养2~3 d, 并以分值> 1.7作为种水平判定COV, 可有效提高MALDI-TOF MS对丝状真菌的鉴定能力。     

3种方法对曲霉菌鉴定结果对比研究

目的 对传统手工法、分子测序、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)3种鉴定方法进行比较,建立一套适合该实验室的快速准确的丝状真菌鉴定标准操作流程。方法 收集2020年1月至2021年3月于重庆医科大学附属第二医院住院患者的56株曲霉菌株,分别采用上述3种鉴定方法对菌株进行鉴定,比较鉴定准确率;比较传统甲酸乙腈萃取法与改良锆珠甲酸乙腈法两种前处理方法对质谱鉴定能力的影响;比较曲霉菌不同培养基及培养天数对质谱鉴定能力的影响。结果 以分子测序为金标准,传统手工法鉴定准确率为57.1%(32/56),MALDI-TOF MS鉴定准确率为92.9%(52/56);菌丝在锆珠中震荡研磨后,再进行甲酸乙腈萃取获得的质谱鉴定能力更佳;曲霉菌用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养3 d和5 d时,质谱鉴定准确率最高,分别为73.2%和75.0%。结论 MALDI-TOF MS操作简便、快速,且准确性高。曲霉菌用PDA液体水平振摇培养后,使用锆珠甲酸乙腈法前处理,进行质谱鉴定可获得较理想的鉴定效果和蛋白图谱质量,适合常规实验室曲霉菌的质谱鉴定。     

雪峰虫草子座不同生长发育时期的转录组研究

目的：挖掘调控雪峰虫草生长发育的相关通路和基因,揭示其子座生长发育的内在分子机制。方法：采用转录组测序技术（RNA-Seq）对雪峰虫草子座菌丝体（MD1）、子座原基（PD2）和子座（SD3）生长发育3个不同阶段进行测序;数据通过非冗余蛋白（NR）、Swiss-Prot、Pfam、京都基因与基因组百科全书（KEGG）、真核生物相邻类的聚簇（KOG）、基因本体（GO）数据库进行功能注释。利用EdgeR软件进行差异表达基因分析,挖掘调控雪峰虫草子座生长发育的相关通路和基因。结果：测序结果显示,MD1、PD2、SD3分别获得了8.15、7.51、6.87 GB分析数据,拼接分析数据共获得34 218个转录本,平均长度为5502 bp,组装及去冗余后获得10 511条unigenes,平均长度为2470 bp。KOG功能注释和GO富集分析显示,细胞和细胞组分、新陈代谢过程、信号转导及碳代谢是雪峰虫草子座发育过程中的关键基因类别。对子座不同生长发育时期的基因进行差异表达分析发现,PD2和SD3相比差异表达基因最多,其中上调基因1073个,下调基因1036个,MD1和SD3相比差异表达基因最少,上调...     

用作化妆品、食品和药品的薏苡发酵制品

将发芽(芽长1～200 mm)的薏苡 Coixlachrymal-jobi L.用微生物[如乳酸菌、纳豆芽孢杆菌 Bacillus natto Sawamura、丝状真菌和(或)放线菌属]进行发酵,得到富含多酚化合物的发酵物。它对紫外光吸收有抑制作用,能清除 DPPH 自由基和活性氧,且有抗诱变活性,抑制酪氨酸酶的活性,抑制     

MTT—甲萘醌增强法测定眼科丝状真菌药物敏感试验研究

目的 评价ＭＴＴ－甲萘醌增强法在眼科丝状真菌物敏感性试验中的应用，方法 用ＭＴＴ－甲萘醌增强法测定二性霉素Ｂ和酮康唑对４株眼科丝状真菌（茄病镰刀菌，串珠镰刀菌，烟曲霉菌和黄曲霉菌）的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）并与常量液体培养基稀释法（Ｍａ－ＡＦＳＴ）进行比较，结果 在丝状力的药敏试验中，甲萘醌能明显增强ＭＴＴ的显色反应（镰刀菌加甲萘醌０．１ｍｍｏｌ／Ｌ，曲霉菌加１ｍｍｏｌ／Ｌ），二性霉素Ｂ和酮康唑对丝     

碘伏封包治疗足癣疗效观察

足癣是皮肤癣茵、酵母样茵和非皮肤癣茼性丝状真菌所致[1],发病率高,且病情易反复,严重者可致感染或诱发癣茵疹.威科自2006年7月-2007年5月采用碘伏封包治疗足癣32例,取得良好疗效.现报告如下.     

MALDI-TOF MS 在呼吸道感染丝状真菌鉴定中的应用

目的：用MALDI-TOF MS技术和形态学方法对139株丝状真菌进行鉴定,评估MALDI-TOF MS技术在丝状真菌鉴定中的应用。方法将从临床呼吸道标本培养分离出来的139株丝状真菌,经过预处理后,用法国梅里埃公司生产的质谱仪（VITEK MS）进行鉴定,并将结果与传统形态学鉴定方法结果进行对比。结果质谱仪对139株丝状真菌正确鉴定率为82．7％（115／139）;对曲霉属的鉴定正确率达到90．8％（108／119）,其中烟曲霉和黄曲霉的鉴定正确率均为100％（77／77、21／21）,黑曲霉的鉴定正确率50．0％（8／16）,其他曲霉菌的鉴定正确率为40．0％（2／5）;对青霉属的鉴定正确率为58．3％（7／12）;对毛霉菌的正确鉴定率为0％（0／3）。呼吸道感染丝状真菌以曲霉菌属为主（89．2％）,其中又以烟曲霉（55．4％）、黄曲霉（15．1％）和黑曲霉（11．5％）多见。结论 MALDI-TOF MS技术能快速准确鉴定常见丝状真菌,为丝状真菌的鉴定带来革命性突破,但对少见丝状真菌的鉴定仍有待于数据库的进一步完善。