高效液相色谱法测定脂平康中大黄酸、大黄素的含量

目的:建立高效液相色谱法测定脂平康中大黄酸、大黄素含量的检测方法.方法:采用高效液相色谱法,Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-0.3%醋酸(87:13);检测波长:434 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:25℃.结果:大黄酸在1.47～29.40)mg·L-1,大黄素在1.16～23.20 mg·L-1范围内呈良好线性关系;回收率:大黄酸为98.38%,大黄素为98.06%;RSD:大黄酸为1.80%,大黄素为1.07%.结论:本方法检测快速,定量准确,重现性好,可用于脂平康的含量测定.     

HPLC法测定清热解毒方芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定清热解毒方中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:KromasilC₁₈(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.2%磷酸(85∶15)为流动相,流速:1.0mL·min^-1,检测波长:254nm,柱温:35℃。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在1.0125～16.2μg、1.025～16.4μg、1.025～16.4μg、1.025～16.4μg、0.625～10μg范围内呈良好线性关系,相关系数分别为0.9991,0.9998,0.9997,0.9994,0.9996,平均回收率分别为101.4%,102.0%,101.7%,102.1%,100.8%。结论:该方法操作简单、准确,且重复性好,可作为清热解毒方质量的控制指标之一。     

Anti‐fibrotic and Anti‐tumorigenic Effects of Rhein,a Natural Anthraquinone Derivative,in Mammalian Stellate and Carcinoma Cells

Anthraquinone compounds have been recognized to possess antiinflammatory, anti‐fibrotic and anti‐tumour properties and thus applied in human and veterinary therapeutics as active substances of medicinal products. Amongst the anthraquinones isolated from Rheum palmatum, also known as da‐huang, rhein was detected as one of the highest metabolite contents in the bloodstream of mammals. The biological activities of rhein therefore deserve detailed investigation. In this study, we aimed to delineate the mechanism of inhibitory actions of rhein on fibrotic and tumorigenic processes by means of various biochemical assays, such as immunofluorescent staining, real‐time polymerase chain reaction (PCR) and western blotting analyses in rat pancreatic stellate cells (LTC‐14), human pancreatic ductal adenocarcinoma cells (PANC‐1) and human colon carcinoma cells (SW480 and SW620). Our results demonstrated that the application of rhein notably suppressed the mRNA and protein levels of various fibrotic and tumorigenic mediators including alpha‐smooth muscle actin, type I collagen, fibronectin, N‐cadherin and matrix metalloproteinases in the testing mammalian cells. The mechanism of the suppressive actions of rhein was associated with the modulation of the sonic hedgehog and serine‐threonine kinase signalling pathways. In conclusion, we suggest that rhein may serve as a therapeutic or an adjuvant agent in anti‐fibrotic and anti‐tumorigenic approaches. Copyright © 2014 John Wiley & Sons, Ltd.     

基于支持向量机的5种大黄苷元治疗脑缺血的配伍研究

目的筛选大黄中5种能够治疗脑缺血的大黄苷元(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)的最佳配伍。方法采用均匀设计法将大鼠分为14组,每组15只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,以神经功能症状评分、脑梗死面积为指标,探讨不同配伍的大黄苷元对脑缺血大鼠的影响,同时基于支持向量机(SVM)建立大黄苷元药效预测模型。结果经SVM回归分析,得到大黄苷元最优配伍为芦荟大黄素6.653 4 mg/kg、大黄酸26.000 8 mg/kg、大黄素11.004 2 mg/kg、大黄酚3.841 4 mg/kg和大黄素甲醚3.862 0 mg/kg。结论不同配比的大黄苷元能有效改善大鼠脑缺血的各个指标,采用均匀设计结合SVM的模拟预测方法优选出了5种大黄苷元组分的最佳配比。     

转化生长因子β及大黄酸对肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白功能的影响(英文)

目的:对人肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白-1(GLUT1)进行鉴定。研究转化生长因子(TDF-β_1)对GLUT1表达和功能的影响及大黄酸的干预作用。方法:分别用RT-PCR、免疫荧光染色、流式细胞仪、Northern杂交和[~3H]-2脱氧葡萄糖摄入率对系膜细胞GLUT1 mRNA表达、蛋白质分布和功能进行了研究。观察不同浓度TGF-β_1在加或不加大黄酸的情况下对系膜细胞葡萄糖摄入以及GLUT1 mRNA表达的影响。结果:研究发现人类肾小球系膜细胞上存在功能性的GLUT1。TGF-β_1能上调系膜细胞GLUT1 mRNA的表达和增加系膜细胞葡萄糖摄入率。大黄酸对正常糖浓度培养条件下系膜细胞葡萄糖摄入无影响,但能明显抑制TGF-β_1增加系膜细胞GLUT1 mRNA表达和葡萄糖摄入的作用。结论:TGF-β_1增加人肾小球系膜细胞GLUT1 mRNA的表达和细胞葡萄糖的摄入,该作用能够明显地被大黄酸所拮抗。     

脑脉通不同提取工艺中蒽醌类化学成分变化的研究

目的:比较脑脉通(大黄、川芎、人参、葛根等)不同提取工艺对蒽醌类化合物的含量变化。方法:采用反相高效液相色谱法,选用Hypersil ODS2 C18柱,流动相以甲醇-0.1磷酸水(75∶25)在254nm波长测定大黄5苷元。结果:乙醇提取工艺中蒽醌类化合物的提取率优于水煎煮提取,合煎液中蒽醌类化合物的提取率高于分煎液。结论:中药复方提取过程中存在动态变化,应根据化学成分不同的理化性质对样品进行适宜的处理。     

多元回归分析大黄不同炮制品中蒽醌与抑菌活性相关性

目的:采用多元回归分析不同大黄炮制品蒽醌含量和大黄抑菌能力之间的相互关系.方法:采用HPLC法建立大黄中蒽醌的指纹图谱,流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液梯度洗脱,检測波长为254 nm.通过大黄不同炮制样品对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的抑制效果来评价其抑菌活性,采用主成分、多元线性回归分析大黄不同蒽醌与抑菌...     

壳聚糖对大黄有效成分吸附作用的研究

目的观察高分子吸附剂壳聚糖对大黄醇提液澄清吸附作用。方法以高分子壳聚糖为吸附剂,在不同条件下进行吸附澄清,通过UV法和HPLC法测定,以获得最佳实验室工艺条件。结果在温度为70℃,pH11～12,吸附剂用量小于1.5‰,吸附时间为1.5h时,澄明度最好,但对大黄素、大黄酚等有效成分的吸附率较高,含量会降低16%～40%。结论壳聚糖作为澄清剂对大黄素等有效成分有一定的吸附作用,故在实际应用中应尽量避免使用壳聚糖作为大黄或含大黄、虎杖、决明子、番泻叶、茜草等制剂的澄清剂,以保证药物的疗效。     

大黄酸配伍羟基红花黄色素A对大鼠单侧输尿管结扎慢性肾病的作用及机制研究

目的 研究大黄酸（RH）配伍羟基红花黄色素A（HSYA）对慢性肾病（CKD）模型大鼠抗炎、抗氧化、抗凋亡能力的影响及其可能机制。方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、RH（100 mg/kg）组、HSYA（50 mg/kg）组和RH（100 mg/kg）+HSYA（50 mg/kg）组,采用单侧输尿管结扎（UUO）建立CKD模型。试剂盒法测定大鼠肾组织丙二醛（MDA）水平、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性;Masson染色观察肾组织病理变化;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;Western blotting检测肾组织中IκBα、p-IκBα、NF-κB p-65、p-p65和Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 RH和HSYA配伍使用明显降低MDA水平,提高SOD及GSH-Px活性;减少肾小球炎细胞浸润,改善肾小管间质纤维化等病理改变;抑制细胞凋亡;抑制磷酸化的IκBα及p65蛋白表达;使Bcl-2蛋白表达上调、Bax表达下调,且效果好于单用组。结论 在CKD进程中,RH和HSYA配伍使用可抑制肾脏组织的氧化损伤,抑制肾小球炎细胞浸润,降低细胞凋亡,且效果好于两个药物单用。     

大黄酸对体外大鼠皮质神经元突起长度及微管相关蛋白2mRNA表达的影响

目的研究大黄酸(RH)对大鼠皮质神经元的营养作用,并初步探讨其相关机制。方法体外DMEM/F12+0.4%B27培养新生大鼠皮质神经元,应用神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP2)免疫细胞化学染色法鉴定神经元。神经元细胞加入RH 2,4和8μmol·L-1作用72 h,计算神经元平均突起长度;或分别同时加入Trk受体拮抗剂K252a 50 nmol·L-1和PI3K抑制剂LY294002 10μmol·L-1测量神经元平均突起长度。MTT法检测细胞存活,并测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测MAP2 mRNA表达。结果 NSE及MAP2免疫荧光染色结果显示,绝大多数细胞呈阳性反应,所培养的细胞90%以上为神经元。MTT和LDH检测结果表明,与溶媒对照组相比,RH2,4和8μmol·L-1能明显提高神经元存活率(P<0.01);平均突起长度明显增加(P<0.01)。与RH8μmol·L-1组相比,同时加入K252a 50 nmol·L-1或LY294002 10μmol·L-1,平均突起长度明显缩短(P<0.01)。与溶媒对照组相比,RH 2,4和8μmol·L-1组MAP2 mRNA表达量明显增加(P<0.01)。结论 RH对新生大鼠皮质神经元具有神经营养作用,能促进神经元突起的生长和提高神经元的存活率。RH神经营养作用可能部分通过激活Trk受体,继而激活Ras/PI3K/PKB通路而发挥的。