叶酸受体靶向土大黄苷前药与HSA相互作用研究

目的 从分子水平上研究叶酸受体靶向土大黄苷前药(FRHA)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的结合作用.方法 模拟生理条件,采用荧光光谱和紫外-可见光谱研究FRHA与HSA结合反应的光谱学特征,探讨药物对蛋白质内源性荧光的淬灭机制,并结合三维、同步荧光光谱和圆二色谱分析FRHA对HSA微环境及构象的影响.结果 FRHA-HSA复合物的形成将导致HSA发生荧光淬灭,298、302、306和310 K时FRHA与HSA相互作用的结合常数分别为1.4322×105、1.1793×105、0.9334×105和0.7896×105 L/mol.由实验计算出热力学参数焓变ΔH为-38.772 kJ/mol,熵变ΔS为-31.39 J/(mol·K).结论 FRHA-HSA复合物的形成是自发进行的,范德华力和氢键作用力是使该复合物稳定的主要作用力,并且复合物的形成使HSA的微环境和构象发生改变,进而导致HSA发生荧光淬灭,淬灭机制为静态淬灭.     

网络药理学与分子对接技术指导下土大黄苷对慢性粒细胞白血病作用机制研究

目的 近年来,蛋白质相互作用网络及分子对接技术成为中药现代化研究领域十分活跃的一部分,逐渐成为链接中药应用与现代化的重要纽带.本研究基于分子对接技术与网络药理学分析,探讨中药大黄活性成分土大黄苷与慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)相关基因之间的相互作用,寻求土大黄苷作用与CML的可能机制.方法 前期研究中构建了CML蛋白质相互作用网络,并筛选了CML关键靶点蛋白,作为本研究的受体;通过软件Chemoffice 8.0构建土大黄苷的分子结构,导入SYBYL软件中,进行一系列数据处理,作为本研究的配体.利用SYBYL8.1软件的Surflex-Dock模块进行分子对接,用配体-受体亲和力的一致性评分函数进行打分,并对氢键及其结合部位进行观察、分析.进一步对分子对接结果进行文献验证.结果 得到土大黄苷与CML19个相关基因之间的分子对接评分及氢键数,其中与JUN(2G01)受体对接得分及氢键数是最高的,说明土大黄苷与JUN(2G01)结合最好,可以推断JUN(2G01)是土大黄苷优先选择的作用受体.其次,得分较高的还有SRC (SRC)、JAK2 (5AEP)、MAPK14(2YIX)、FRAP1(3OAW)、MAPK8(3PZE)和PARP1(1U5Y)等.结论 大黄活性成分土大黄苷对CML的作用机制是多靶点、多途径相互作用的,其作用受体可能与JUN、SRC、JAK2、MAPK14、FRAP1、MAPK8和PARP1等基因相关.     

采用TLC和HPLC法检查炎可宁片中的土大黄苷

目的：建立TLC结合HPLC法检查炎可宁中的土大黄苷的检测方法;方法：采用硅胶G板,乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10：7：1：1）为展开剂,在365nm下检视;采用Lichrospher C18（4．6mm×250mm,5μm）,乙腈-甲醇-水（7：30：63）为流动相,检测波长为320nm。结果：炎可宁片非法掺入的土大黄的指标性成分土大黄苷在365nm下显持久的蓝紫色荧光斑点。通过高效液相色谱法进一步验证。对25批市售的炎可宁片进行筛查,检出土大黄苷的炎可宁片有14批。结论：TLC结合HPLC法简便,快速,专属性强,能有效地检查炎可宁片是否掺入土大黄。     

毛脉酸模果实不同部位中大黄素及白藜芦醇的含量分析

目的考察毛脉酸模果实不同部位中大黄素及白藜芦醇的含量,为其合理开发利用提供理论依据。方法采用高效液相色谱（HPLC）法分析大黄素及白藜芦醇的含量。结果毛脉酸模一等种子的大黄素及白藜芦醇含量均高于二、三等种子,大黄素在花被片中含量较高,白藜芦醇在一等种子中含量较高。结论在生产中,选择果实入药较种子更经济、简便。     

TLC、HPLC、UPLC-MS法联合定性检查厚朴排气合剂中的土大黄苷

目的建立厚朴排气合剂中土大黄苷的检测方法。方法采用薄层色谱（TLC）法鉴别土大黄苷,采用高效液相色谱（HPLC）法和超高效液相色谱．质谱联用（UPLC-MS）法对土大黄苷进行定性分析。结果2批次产品中检出土大黄苷。结论所建立的方法专属性强,灵敏度高,重现性好,可作为该类产品是否含有土大黄苷的检测方法。     

一清颗粒中土大黄苷检查方法的研究

目的对一清颗粒中大黄的质量进行研究。方法建立以土大黄苷为对照的TLC、HPLC和液质联用法检查土大黄苷的方法。结果薄层检查法适用于一清颗粒中土大黄苷的检查,并采用二极管阵列及液质联用法对结果进行验证,能鉴别出样品中所用正伪品大黄药材。结论上述3种方法均可用于控制一清颗粒中大黄的质量。     

中药活性成分土大黄苷与人血清白蛋白的结合反应机制研究

应用荧光光谱法结合紫外-可见分光光度法研究了土大黄苷(rhaponticin,RT)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的结合反应机制,并考察了金属离子的介导作用。依据不同理论模型测定了反应体系的结合常数K、结合位点数n并进行了分析比较,探讨了荧光猝灭机制。根据Frster非辐射能量转移机制确定了授体-受体间结合距离和能量转移效率。采用同步荧光技术考察了RT对HSA分子构象的影响。结果表明,不同理论模型计算出的结合参数基本相符并显示出RT与HSA的结合反应为形成静态复合物,说明RT在生理条件下能被HSA载运至靶位发挥药效。RT对HSA分子结构域微区构象产生影响,造成亚结构域IIA、IIB的疏水性改变。Co(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)的介导作用在RT-HSA反应中起桥联作用并增强RT-HSA的相互作用,即在生理条件下,Co(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)对RT药效的发挥起促进作用。     

生长时期施肥种类对柴胡HPLC指纹图谱影响分析

目的 建立柴胡HPLC-PDA指纹图谱分析方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为SunFire^TM C18柱（250mm×4．6mm,5μm）,以乙腈．0．1％磷酸梯度洗脱,检测波长为210nm,柱温30℃。结果建立了柴胡的HPLC—PDA指纹图谱,确定了15个共有峰,不同施肥柴胡样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在0．90以上,可以用于柴胡药材的定性鉴别。结论此方法简单、准确、重复性好,为柴胡的质量控制提供了有效的方法。     

基于化学分析的不同品种大黄区分研究

该文建立了HPLC对不同品种大黄中5种蒽醌成分以及土大黄苷进行检测,分析比较了不同品种大黄中蒽醌及土大黄苷的含量差异.结果表明,大黄酸与土大黄苷是正品大黄(掌叶组)与非正品大黄(波叶组)区分的指标性成分.正品大黄中未检出土大黄苷,非正品大黄中大黄酸含量痕量.唐古特大黄大黄酸含量较高,通过比较大黄酸与大黄酚含量之间的比值可以将唐古特大黄与另2种正品大黄进行区分.波叶组大黄间土大黄苷含量相差悬殊.     

Anti-oxidative Activities of Ethanol Extracts from Both Wild Plant and Suspension Cell Cultures of Rheum franzenbachii

Objective To evaluate the content of rhaponticin and anti-oxidative activities of theethanol extracts from both the wild plants and suspension cell cultures of Rheum franzenbachii.Methods Quantitative analysis of rhaponticin was performed by HPLC.The anti-oxidative activities of the ethanol extracts were evaluated using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH)scavenging assays.Results The content of rhaponticin in the roots of the wild plant was 4.36 mg/g,while the content was only 1.59 mg/g in the leaves.The content of rhaponticin in suspension cells cultured on Murashige and Skoog(MS)medium supplemented with 1.0 mg/L 6-benzylaminopurine(6-BAP)and 2.0 mg/L 2,4-dicholorophenoxy acetic acid(2,4-D)was 17.64 mg/g,which increased by 4.05 times compared with the content in the roots of the wild plants.The roots of wild plants displayed the strongest anti-oxidative activity,followed by thesuspension cells 5 and 6,and the scavenging percent was 91.96%,91.23%,and 89.27%,respectively,at the concentration of 100μg/mL.The IC50 values were 2.477,15.644,and 31.415μg/mL,respectively.In particular,the DPPH scavenging activity of the ethanol extracts from the roots of the wild plant was generally comparable to the control of ascorbic acid(VC),and the IC50 value of the extracts was lower than that of VC(2.502μg/mL).Conclusion Rhaponticin production in the cell culture can be modulated and the accumulation can be increased.The roots of the wild plant display the strongest anti-oxidative activity.These results suggest that R.franzenbachii could hold a good potential source for human health.