应用原生质体融合法选育林可霉素高产菌株

将林可霉素产生菌N65—2^#、S78—1^#的原生质体分别热灭活和紫外灭活，并将灭活原生质体用PEG融合，从中获得92-201^#融合株，其摇瓶效价分别较N65—2^#、S78—1^#提高17％、52％，且色素分泌少，传代稳定性强。     

Gene-disruption of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana incubated with dsRNA

The species of Beauveria bassiana is widely used for the management of agricultural insect pests. In this study, we integrated egfp-double-stranded RNA (dsRNA) to a previously generated egfp-expressing B. bassiana transformant (Bb-egfp#3) using a protoplast integration method. The Bb-egfp#3 protoplast was mixed with the dsRNA under PEG/CaCl₂ conditions and liquid-cultured in Sabouraud dextrose broth for 5 days. A control culture followed the same procedure without dsRNA. Bb-egfp#3/egfp-dsRNA cultures showed very low fungal growth (OD₆₃₀ = 0.2) compared to the control culture, Bb-egfp#3 only (OD₆₃₀ = 1.1). Screening of possible transformants on Sabouraud dextrose agar revealed a transformant T3, without egfp signal. T3 was confirmed as B. bassiana through sequencing of conserved genes and insect bioassays. Interestingly, the genomic egfp fragment of T3 was disrupted, and the egfp signal was not detected over four subcultures, which was also confirmed by RNA-seq of Bb-egfp#3 and T3. This study provides an interesting observation that protoplast integration with dsRNA could possibly generate significantly reduced gene expression in B. bassiana and it is stable across several generations.     

洛伐他汀产生菌的原生质体制备、灭活及融合条件研究

目的 探索构建洛伐他汀高产菌株的原生质体制备和融合方法.方法 考察了各种细胞裂解酶和渗透压稳定剂等对红曲霉和土曲霉的原生质体制备、灭活及融合的影响.结果和结论 土曲霉和红曲霉在加石英砂混合酶体系中获得的原生质体数最多,而最适宜的渗透压稳定剂为0.6 mol/L的NaCl.红曲霉的原生质体在紫外灯(18 W)下15 cm照射50 min和土曲霉的原生质体在60 ℃水浴下保持40 min灭活率均达到100%.最适合红曲霉和土曲霉的原生质体融合的条件为20% PEG在28 ℃下处理15～20 min.     

2-酮基-L-古龙酸产生菌原生质体的属间融合

用配对法筛选得一株氧化葡萄糖酸杆菌（Gluconobacter oxydans)10-3的优良伴生菌短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus)97002，混合菌发酵产生2－酮基－L－古龙酸，山梨糖的转化率达90％左右，两菌分别经诱变处理，获得耐利福平B.pumilus 97002-1-6 Rif^r和耐红霉素G.oxydans 10-3-20 Em^r遗传标记菌株，并确定B.pumilus 97002-1-6Rif^r菌原生质体形成和再生最佳条件。初步尝试两菌属间原生质体融合。     

芦荟原生质体的电融合研究

目的:探讨芦荟原生质体电融合条件,为芦荟种质改良提供细胞工程技术。方法:以芦荟无菌苗为材料,用化学酶解法处理芦荟幼叶得到原生质体,并且进行电融合。结果:在交流电电场强度(E)1.60×10~5 V/m作用时间20 s,直流脉冲强度(E)0.90×10~6 V/m、脉冲宽幅30μs,施加1次脉冲后,可使细胞有效融合率达到17.78%。结论:芦荟原生质体经过一定电场刺激,可实现原生质体的融合,供抗感染药用植物资源的种质改良提供参考。     

野油菜黄单胞菌原生质体形成及再生条件的研究

目的：研究野油菜黄单胞菌原生质体形成和再生的最适条件及进一步进行诱变，筛选高产优质的优良菌株提供实验依据。方法：先根据培养时间，绘制出野油菜黄单胞菌的生长曲线，分别选取不同菌龄的菌体，用不同的溶菌酶浓度，不同的酶作用时间、作用温度，在３种不同的渗透压稳定剂中进行处理，记录其原生质体形成率和再生率。结果：选用对数生长早中期的菌体，用１０μｇ／ｍｌ的溶菌酶液在３０℃时酶解３０ｍｉｎ，采用以蔗糖为主的渗透压稳定剂，野油菜黄单胞菌原生质体的形成和再生最佳。结论：野油菜黄单胞菌可形成原生质体并进行再生。     

原生质体融合技术选育高效菌株降解聚乙烯醇

从自然界中分离聚乙烯醇(PVA)的降解细菌，经紫外线诱变，得到两株具有单重抗药性的突变菌株S7(Str^s，Kan^r)和K15(Str^r，Kan^s)，两者对PVA的去除率分别达到52％和58％．将S7和K15作为亲本菌株进行原生质体融合，并对融合条件进行优化，融合子F4菌株对PVA去除率达到79．9％，将其培养成活性污泥后，PVA去除率可达87％，是普通活性污泥的三四倍．     

紫外线和氯化锂对核糖甙链霉菌原生质体诱变作用的探讨

核糖霉素产生菌核糖甙链霉菌（Streptomyces ribosidificus)原生质体经紫外线和氯化锂复合处理得到2株新的菌株RF2－25和RF3－173,产生抗生素核糖霉素的能力分别比出发株RF－5提高了17％和15．3％,且已供工业化正常生产。该方法简单易行,效果很好。     

吸水链霉菌井冈变种原生质体的制备与再生

目的研究井冈霉素产生菌吸水链霉菌井冈变种的原生质体制备与再生的最佳条件。方法使用溶菌酶水解菌体细胞壁法,分别考察影响吸水链霉菌井冈变种原生质体的制备与再生的各种因素。结果在R2YE液体培养基中,一级菌丝体的最佳培养时间为24 h,二级菌丝体的最佳培养时间为16 h,最佳甘氨酸质量浓度为5 g.L-1,最佳溶菌酶质量浓度为2 g.L-1,最佳酶解时间为60 min,最佳再生培养基为R2YE,原生质体的再生率最高可达到15.79%。结论本实验确定了吸水链霉菌井冈变种的原生质体制备与再生的最佳条件,能够得到较高的再生率。     

茯苓原生质体制备与再生条件初探

目的研究茯苓原生质体制备及其再生条件。方法采用不同菌龄、酶液浓度、酶解时间、稳渗剂对茯苓原生质体产率及再生条件进行研究。结果不同菌龄、酶液浓度、酶解时间、稳渗剂对茯苓原生质体产率及再生产生不同影响。结论Z10-2原生质体制备时菌丝最适菌龄为72 h,酶液浓度为3%,稳渗剂以0.5 m o l/L的甘露醇为佳。Z10-3原生质体制备时菌丝最适菌龄为56 h,酶液浓度为3%,稳渗剂以0.6 m o l/L的甘露醇为佳。Z10-2和Z10-3原生质体均以甘露醇作稳渗剂再生率较高,其最佳浓度为0.6 m o l/L。在该条件下Z10-2原生质体再生率为7.5×1-0 3,Z10-3为1.3×10-2。