纤维连接蛋白对人晶状体上皮细胞系的增殖、黏附和移行的影响

目的:探讨纤维连接蛋白(fibronectin,FN)对人晶状体上皮细胞系HLE-B3的增殖、黏附和移行的影响及其受体整合素α5亚基的表达。方法:培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3,接种于不同浓度的FN(0,10,20,40mg/L)包被的培养板中,倒置显微镜下观察HLE-B3的生物学特性,采用WST-8法检测细胞的增殖、黏附情况,划痕法观察细胞的移行并记录细胞缺损区闭合时间,免疫细胞化学法观察整合素α5亚基的表达。结果:各浓度FN包被后,增殖实验中WST-8法检测的吸光值增高不明显(P>0.05)。随FN包被浓度的增高,黏附实验中的吸光值逐渐增高,划痕实验中缺损区闭合的时间逐渐缩短,各浓度组在统计学上具有显著性差异。整合素α5亚基随FN包被浓度的增高表达增强(P<0.05)。结论:FN具有显著促进HLE-B3黏附和移行的作用,同时能上调其受体整合素α5亚基的表达。     

灵仙通络方对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原及基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的：探讨灵仙通络方对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原（COL-Ⅱ）及基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的影响。方法选取C518大鼠膝关节软骨细胞株,随机分为中药组（灵仙通络方）、西药组（氨糖美辛）和对照组（氯化钠溶液）,进行培养、诱导退变等处理,于给药后第1、2、3 d,分别检测中药组、西药组和对照组不同浓度下对软骨细胞增殖、COL-Ⅱ及MMP-13表达的影响。结果同一时间点的中药组、西药组不同浓度之间噻唑蓝（MTT）值差异有统计学意义（P＜0.01）。对照组不同浓度氯化钠溶液的MTT值差异不具有统计学意义（P＞0.05）。在COL-Ⅱ免疫组化染色中,中药组与西药组和对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）,且中药组优于西药组（染色指数χ2=16.26,df=2,P＜0.01）。在 MMP-13免疫组化染色中,对照组较中药组、西药组差异有统计学意义（P＜0.01）,且中药组优于西药组（染色指数χ2=54.31,df=2,P＜0.01）。结论 C518大鼠膝关节退变软骨细胞经灵仙通络方干预后能够促进其增殖,调节COL-Ⅱ、MMP-13的表达,延缓膝关节骨性关节炎疾病的发展进程。     

人脂肪间充质干细胞体外高效扩增新方法

目的 运用低强度脉冲场超声(LIPUS)刺激促进人脂肪间充质干细胞(hASCs)增殖,为临床干细胞体外高效增殖提供新方法.方法 通过LIPUS体外刺激hASCs细胞生长,采用Scepter 2.0手持细胞计数器进行细胞计数,运用荧光倒置显微镜观察细胞形态,运用流式细胞仪检测细胞表面标志物,并进行干细胞临床前质量检测.结果 刺激组50 mW/cm2和60 mW/cm2的LIPUS刺激强度均能促进细胞增殖,60 mW/cm2强度更显著,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞倍增时间比对照组缩短,差异具有统计学意义(P<0.05),刺激后刺激组细胞表面标志物无变化,增殖后干细胞质量检测符合标准要求.结论 LIPUS刺激可促进hASCs有效增殖,低强度脉冲场超声可作为干细胞体外扩增的新方法.     

人胚胸腺激素抑制组分对成人淋巴细胞增殖的影响

在研究人胚胸腺素的基础上,通过对提取工艺的改革,获得了人胚胸腺素抑制组分及促进组分。我们用~3H—TdR掺入DNA法观察了人胚胸腺素抑制组分对成人淋巴细胞增殖的影响,试验结果表明,呈现明显的剂量依赖关系,即40μg的人胚胸腺素抑制组分对PHA诱导的淋巴细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.001),当稀释至2μg或更低浓度时,淋巴细胞的增殖恢复到正常范围。而正常淋转无论是高浓度或稀释到较低浓度,都未显示出明显的抑制或促进作用。     

胃癌声像的病理机制初探

本文从两个方面对胃癌的声像进行了探讨：（１）用灰阶超声睦方图测定胃癌与自体胃平滑肌层的ＡＶ值，发现胃癌直方图ＡＶ值小于平滑肌层的ＡＶ值，有显著差异，提示癌灶回声低于平滑肌；（２）光镜下观察胃癌组织，发现癌组织内胶原纤维大量增长，各层中以粘膜下层最显著。     

桂皮醛对激素诱导的破骨细胞分化过程的保护作用及分子机制

目的研究桂皮醛对激素诱导的体外破骨细胞增殖分化及骨吸收功能增强的保护作用及分子机制。方法RANKL联合M-CSF体外诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞,分为对照组、地塞米松处理组和不同浓度(11.6、23.2、46.4μg·L-1)桂皮醛(cinnamic alde byde,CA)干预组;TRAP染色试剂盒鉴定成熟破骨细胞;MTT法观察地塞米松和桂皮醛在不同时间点对破骨细胞增殖的抑制作用;ELISA法检测细胞培养液上清中TRACP5b的表达水平;RT-PCR分析破骨细胞相关转录因子(RANK、NFATc1)mRNA的表达状态。结果地塞米松处理后,破骨细胞的增殖分化及骨吸收功能明显增强(P<0.05);而经不同浓度桂皮醛干预后,与地塞米松组相比,细胞增殖活性、上清液中TRACP-5b的含量以及RANK、NFATc1mRNA的表达水平随药物浓度的增加呈剂量依赖性降低(P<0.05)。结论桂皮醛可有效抑制激素诱导的破骨细胞的增殖及骨吸收功能,其作用机制可能是通过下调RANK以及下游NFATc1基因的表达。     

肝癌组织DNA-PKcs过量表达及其靶向siRNA分子的抗增殖作用

目的:研究肝癌组织中DNA依赖蛋白激酶催化亚基DNA-PKcs的表达差异及其生物学意义.方法:用组织芯片和免疫组化法检测肝胆癌组织86例,肝胆管结石切除肝组织17例标本和正常肝组织70例中DNA-PKcs蛋白表达情况,Western blot检测培养细胞中DNA-PKcs表达,Lipofectamine 2000介导DNA-PKcs的siRNA质粒DNA转染,细胞生长曲线分析细胞增殖,克隆形成法分析细胞辐射敏感性.结果:组织芯片检测显示,60例肝癌组织细胞中DNA-PKcs阳性表达率<25%(极低表达),25%-50%(低表达),51%-75%(中等表达)和>75%(高表达)分别占15%,20%,23.3%和41.7%,而64例正常肝组织中各DNA-PKcs阳性表达率分别为68.7%,10.9%,12.6%和7.8%,表明癌组织DNA-PKcs的表达水平显著高于正常组织(P=0.0008).26例肝癌组织病理切片的免疫组化结果也显示,其DNA-PKcs表达水平显著高于23例非肿瘤性肝组织(P= 0.001).Western blot检测结果显示,体外培养的肝癌细胞HepG2,7721和7402中DNA-PKcs表达水平,同样显著高于正常肝细胞LO2.siRNA分子靶向抑制DNA-PKcs表达,不但显著提高HepG2细胞对电离辐射的敏感性,同时还降低肝癌细胞的增殖速度.随着DNA-PKcs表达的抑制,癌基因c-Myc蛋白表达水平也显著降低.结论:肝癌组织细胞中DNA-PKcs表达水平显著高于正常肝组织和非肿瘤性肝病理组织,siRNA抑制DNA-PKcs表达,具有抗癌细胞增殖和放射增敏作用,c-Myc蛋白表达抑制可能是其抗增殖作用的相关机制之一.     

双氢青蒿素对非小细胞肺癌A549细胞增殖及放疗增敏的影响

目的观察双氢青蒿素(DHA)对非小细胞肺癌A549细胞的影响。方法通过CCK-8法测定双氢青蒿素的IC10,选择低毒剂量IC10作实验浓度,CCK-8法测定DHA对A549细胞增殖的影响,流式细胞术检测DHA对细胞周期及凋亡的影响,平板克隆形成实验检测DHA对放疗敏感性的影响。结果双氢青蒿素的IC10为23.47μmol·L-1,双氢青蒿素能抑制A549细胞增殖,阻滞细胞周期,将细胞周期控制在S期,增加放疗敏感性。结论青蒿素能明显抑制细胞增殖,增加放疗敏感性。     

IGF1对高糖下内皮细胞增殖及移行的影响

目的 观察高糖下胰岛素样生长因子1 ( IGF1 )对高糖下人脐静脉内皮细胞( HUVEC)增殖和移行的影响,并探讨其可能影响机制. 方法 体外培养HUVEC,分为对照组、高糖组、高渗组、高糖 +IGF1 组和高糖 +IGF1 +AZD5363组,四甲基偶氮唑蓝( MTT)比色法检测内皮细胞增殖,Tran-swell小室观察细胞移行. 实时荧光定量PCR测定丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)及叉头转录因子1(FoxO1)的mRNA水平. 免疫组化法测定内皮细胞 Akt、p-Akt、FoxO1 和 p-FoxO1的蛋白表达,并行半定量分析. 结果 与对照组比较,高糖组细胞存活率、移行率明显降低,FoxO1 mRNA表达明显升高,FoxO1/p-FoxO1蛋白表达增加,Akt/p-Akt比值增加,差异均有统计学意义( P<0. 05 ). 与高糖组比较,高糖+IGF1组细胞存活率、移行率明显增加, FoxO1 mRNA的表达明显降低,FoxO1/p-FoxO1蛋白表达降低,Akt/p-Akt蛋白表达降低,差异均有统计学意义( P<0. 05 );高糖+IGF1 +AZD5363组细胞存活率未见明显差异,移行未增加, FoxO1 mRNA的表达明显降低( P<0. 05 ) , FoxO1/p-FoxO1 未见明显差异. 5组Akt mRNA的表达差异无统计学意义. 结论IGF1能改善高糖对内皮细胞增殖移行的抑制作用,其机制可能是IGF1激活Akt 进一步调节FoxO1的表达.     

过继肿瘤特异性淋巴细胞联合mIL-21瘤苗抗肿瘤效应研究

目的 在环磷酰胺(Cy)所致小鼠淋巴细胞急剧减少状态下,过继mIL-21转染的瘤苗细胞(mIL-21-Sp2/0)免疫致敏的同系小鼠淋巴细胞,联合mIL-21-Sp2/0瘤苗免疫,探讨过继免疫抗瘤效应机制.方法 用Cy 100 mg/kg预处理BALB/c小鼠2 d后,以灭活mIL-21瘤苗免疫的同系小鼠脾及淋巴结的淋巴细胞作为肿瘤抗原特异性淋巴细胞过继给Cy预处理鼠,同时用mIL-21瘤苗免疫,7 d后以野生型Sp2/0细胞攻击,观察小鼠的肿瘤生长情况.流式细胞仪(FCM)分析CD4+、CD8+、CD4+CD25+T细胞等亚群的变化,分别以CFSE和7-AAD标记,FCM检测淋巴细胞增殖能力和效应细胞的细胞毒活性,用ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞数量.结果 与对照组相比,Cy预处理小鼠接受过继效应细胞及mIL-21瘤苗免疫后,可有效地抵抗野生型Sp2/0细胞的攻击.过继的肿瘤特异性淋巴细胞的体内增殖能力和体外杀伤活性显著增强,分泌IFN-γ效应细胞的数量显著增高.结论 在小鼠淋巴细胞减少期,过继mIL-21瘤苗免疫致敏的肿瘤抗原特异性淋巴细胞并同时给予mIL-21瘤苗免疫,利于输入的效应细胞及自身免疫细胞的增殖和特异性抗肿瘤功能的形成与维持.