纳米雄黄对药物敏感性白血病细胞的凋亡诱导作用

目的: 研究纳米雄黄对药物敏感性白血病细胞的凋亡诱导作用。 方法: 采用机械研磨法制备纳米雄黄。以白血病药物敏感K562细胞为靶细胞,采用MTT法检测纳米雄黄对K562细胞的增殖抑制作用,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,细胞流式细胞术检测Bax,Bcl-2,P-gp,BCRP,P-53蛋白的表达水平,Caspase-3活性。 结果: 雄黄经高能球磨机球磨10~50 h,扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察,电镜测量纳米雄黄的平均粒径为(72.72±22.18) nm,符合纳米颗粒的形貌特征。纳米雄黄对K562细胞有明显的增殖抑制作用。24,48,72 h的IC₅₀分别为43.48,20.52,16.07 mg·L^-1。20,50 mg·L^-1纳米雄黄作用48 h后Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增高,凋亡率分别为10.52%,73.25%。纳米雄黄作用48 h后Bax蛋白表达由对照的(75.80±2.40)%升高到(87.50±1.20)%和(99.60±0.10)%;Bcl-2蛋白表达由对照的(73.85±0.15)%升高到(94.80±2.00)%和(97.75±0.55)%。20,50 mg·L^-1纳米雄黄处理K562细胞24 h后,K562细胞Caspase-3蛋白表达水平由对照的(3.14±0.24)%升高到(8.87±2.74)%和(72.55±1.45)%;细胞的BCRP,P-gp蛋白,P53蛋白表达总体呈上升趋势,共表达也呈上升趋势。 结论: 纳米雄黄可以显著诱导白血病药物敏感K562细胞发生凋亡。     

纳米雄黄对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨纳米雄黄对不同宫颈癌细胞株Hela(HPV18阳性,腺癌),Caski(HPV16阳性,鳞癌), C33A(HPV阴性,腺癌)增殖、凋亡的影响。方法：体外培养3种不同宫颈癌细胞,采用不同质量浓度(5,10, 20,40 mg/L)纳米雄黄作用于不同宫颈癌细胞24,48,72,96 h,相差显微镜下观察不同质量浓度组与对照 组细胞形态学变化;MTT法测定药物对细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果： 纳米雄黄混悬液(5,10,20,40 mg/L)作用于Caski,Hela,C33A细胞24,48,72,96 h,均可抑制细胞增殖, 且呈时间剂量依赖性,抑制率波动于9.02%~49.06%,以20 mg/L质量浓度组为例,抑制率Caski(39.15%)>Hela (36.17%)>C33A(30.56%)。随着质量浓度的增加,早期凋亡、中晚期凋亡细胞均增加,凋亡率(早期+中晚期凋亡率)波 动于19.29%~99.54%,以20 mg/L质量浓度组为例,凋亡率Caski(60.43±2.88)%>Hela (41.95±3.01)%>C33A (43.49±2.19)%。 细胞周期结果显示高质量浓度组(20,40 mg/L)对Hela,Caski细胞有G2/M期阻滞。结论：纳米雄黄混悬液可抑制不同 宫颈癌细胞株的增殖,促进细胞凋亡,其对Caski细胞的作用最强,对Hela细胞次之,对C33A细胞相对最弱。对HPV 阳性的细胞可产生G2/M期阻滞。     

纳米雄黄对单纯疱疹病毒Ⅱ型的体外抗病毒活性

目的：探讨纳米雄黄对单纯疱疹病毒II型(herpes simplex virus Type II,HSV-2)的体外抗病毒活性。方法： 以阿昔洛韦作为阳性对照,采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法观察 不同浓度(200.00,150.00,100.00,50.00,25.00,12.50,6.25,3.13,1.54,0.78,0.39和0 mg/L)纳米雄黄对正常非洲 绿源猴肾细胞(Vero细胞)作用48 h的细胞毒性;空斑法测定病毒滴度,建立病毒感染细胞模型,并采用细胞病变观 察和MTT结合的方法对不同浓度(20.00,10.00,5.00,2.50,1.25,0.63,0.31,0.15,0.08,0.04和0 mg/L)纳米雄黄在 预防、治疗及直接灭活病毒3种给药方式下的抗HSV-2活性进行评价。结果：纳米雄黄对正常Vero细胞的半数细胞毒 性浓度为37.15 mg/L,HSV-2病毒滴度为7.30 log PFUs/mL,纳米雄黄在预防、治疗和直接灭活病毒3种给药方式下对 HSV-2感染细胞的半数有效浓度分别为0.13,1.80和0.52 mg/L,对应的治疗指数分别为285.77,20.64和71.44,纳米雄 黄在预防给药下的治疗指数高于其治疗和直接灭活给药。结论：纳米雄黄在3种给药方式下均具有良好的抗HSV-2活 性,且预防给药的疗效较好。     

复方纳米雄黄中砷在大鼠体内的药动学*

目的:研究复方纳米雄黄中砷在大鼠体内的药动学行为。方法:用氢化物发生-双道原子荧光光谱法测定血清中砷元素的浓度,并计算药动学参数。结果:低、中、高(35,70,140 mg·kg~(-1))三剂量组主要药动学参数分别为t_(1/2)Ka:0.34,0.30,0.29 h;t_(1/2)Ke:19.0,21.6,22.1 h;CL/F:7.1,6.5,6.0 mL·kg~(-1)·h~(-1);V_d/F:188.6,200.1,191.0 mL·kg~(-1);C_(max):180.9,334.4,693.1 ng·mL~(-1);AUC:5069,10650,23393 ng·mL~(-1)·h。除C_(max)和AUC外,其他药动学参数在3种剂量组间比较和雌雄性别之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而C_(max)和AUC则与剂量呈正比。结论:复方纳米雄黄中砷在大鼠体内的药动学行为符合开放性血管外给药一室模型一级速率过程。     

纳米雄黄抗肿瘤的药理毒理研究及临床应用

雄黄,辛温,有毒,归肝、大肠经,属于以毒攻毒的药物,具有解疟抗癌、解毒杀虫、燥湿祛痰的作用。古代医家常应用雄黄治疗痈肿疔疮,聚积腹痛等,近现代医家用以治疗恶性肿瘤及血液病,由古到今为临床所用。雄黄的毒性导致其用药安全范围小,现代学者将传统中药与纳米科技手段相结合,将雄黄研磨成为纳米雄黄,相比较雄黄可言,提高了生物利用度,降低了雄黄的体内毒性,将雄黄的临床应用推动到了新的高度。现代药理研究通过运用纳米雄黄干预肺癌细胞、卵巢癌细胞、皮肤癌细胞、宫颈癌细胞和白血病细胞等实验,证实纳米雄黄具有抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡、诱导细胞分化、抑制核酸合成、抑制新生血管生成等功能,还具有抗病毒、杀菌镇痛的功效。现代毒理研究通过应用不同浓度的纳米雄黄制剂给予小鼠灌胃治疗,记录各时间段小鼠的症状体征及各项辅助检查指标,得出安全剂量下纳米雄黄对血液生化指标等影响均处于正常范围内。临床试验应用纳米雄黄外敷治疗恶性肿瘤破溃创面,发现纳米雄黄有促进患者肿瘤破溃创面愈合,减轻疼痛,缓解渗血、流脓、散发恶臭味等临床症状,提高患者生活质量的作用。并且用药简易,患者依从性好,无需住院治疗,节约医疗资源,值得临床推广应用。