一腓骨肌萎缩症家系临床及基因分析

目的分析一腓骨肌萎缩症家系的临床表现及不同基因检测方法的特点。方法收集一CMT家系8名成员临床资料,并应用等位基因特异性PCR-双酶切方法及多重连接依赖的探针扩增技术(MLPA)检测PMP22基因突变情况,同时选择60名性别、年龄无明显差异的健康人做为对照组。结果该家系中患病者以行走不稳、跨阈步态,伴有弓形足为主要临床表现。该家系中5名成员经等位基因特异性PCR-双酶切及MLPA方法均检测出PMP22基因重复序列,其中出现临床症状的有4名(Ⅱ3、Ⅱ9、Ⅱ11、Ⅲ7),未出现临床症状但基因检测结果示PMP22基因重复序列的为携带者有1名(Ⅲ5),家系中余3名成员及对照组60名均未见重复序列。结论基因检测在明确CMT诊断中起重要作用,且MLPA法筛查基因时操作更简便、灵敏度更高、特异性更好。     

泪小管断离吻合术的新方法

我科自 1 995年元月以来 ,采用注射针头自制鱼钩形探针固定 ,对 5例泪小管断离行泪小管吻合术 ,取得较满意的效果 ,现介绍如下 ;1　一般情况　 5例均为下泪小管断离 ,男性 ,年龄1 8～ 3 5岁 ,受伤原因 ,金属物击伤 2例 ,拳击伤 2例 ,摔伤 1例 ,创口组织边缘不整齐 ,手术时间均在伤后 2 4小时之内。2　材料与方法2 .1　鱼钩形探针的制作 ,用 5ｍｌ 1次性注射针头 ,尖端磨成钝园 ,弯曲成鱼钩形 ,酒精浸泡消毒备用。2 .2　 2 %利多卡因作筛前神经阻滞及眶下神经阻滞麻醉 ,泪点扩张器扩张上泪点 ,鱼钩形探针自上泪点插入 ,顺着上泪小管到泪囊或…     

用分子探针杂交法观测多次献血对造血系统的影响

目的建立非同位素标记的探针杂交测定外周血白细胞端粒DNA长度的方法,借此探讨无偿献血对献血者造血系统的影响。方法酚/氯仿提取基因组DNA,限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳,非同位素标记的探针Southern印迹杂交,化学发光X线片曝光显示杂交谱带,积分光密度扫描计算TRF值。结果所测样本获得了较好的低背景杂交谱带,测得35～40岁无偿献血组TRF值平均为11.73kb,相应无献血史对照组平均为11.78kb。结论建立了非同位素标记的探针检测端粒DNA的方法,用上述方法初步显示了固定的长期无偿献血并未对献血者的造血系统产生负面影响。     

用逆转录—聚合酶链反应法对类胰岛素生长因子cDNA的扩增

逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法是将PCR方法与逆转录法结合应用,可快速高效地扩增某一基因的全cDNA。类胰岛素生长因子-I(IGF-I)在人染色体中只有一个基因,全长超过45kb,并有内含子,其cDNA却只有几百个bp,为了表达得到IGF-I,本文利用RT-PCR方法,从胎肝提出的混合mRNA中,筛选并扩增了IGF-I的cDNA。经过分子克隆与测序,证明不需制备胎肝cDNA库,即可快速获得IGF-I的cDNA。     

Cloning and Subcloning of cDNA Coding for Group Ⅱ Allergen of Dermatophagoides Farinae

Objective: To clone, sequence and subclone the cDNA coding for group Ⅱ allergen of Dermatophagoidesfarinae(Der f2). Methods: The cDNA gene fragment of Der f2 was amplified by RT-PCR. After being purified, the gene fragment was cloned into a vector pMD-18T. The recombinant plasmid pMD-18T-Der f2 was transformed into E. coli JM109. Positive clones were screened and identified by PCR and digested with restriction endonuclease, and the sequence of inserted Der f2 cDNA was also analyzed. Then Der f2 was subcloned into the vector of pET-32a( ). Results: The Der f2 cDNA was specifically amplified from RNA by RTPCR. The recombinant plasmid pMD-18T-Der f2 and pET-32a( ),Der f2 was constructed and digested by SacⅠ and NotⅠ, and the size of gene fragment was 455bp and in accordance with the expected one. Conclusion: The pET-32a( )-Der f2 subclone was constructed successfully.     

cDNA探针对高辛标记法检测肺中诱生型一氧化氮合成酶的表达

目的；探讨内毒素（ＬＰＳ）诱导后家兔肺组织中诱生型一氧化氮合成酶的表达。方法：采用地高辛标记ｉＮＯＳ探针，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术和比色法检测ｉＮＯＳ表达。结果：经内毒素导后ｉＮＯＳ在家兔肺组织中有表达，注射ＬＰＳ５小时后表达量最大，２４小时表达最减少。结论：地高辛标记ｉＮＯＳｃＤＮＡ探针可较好地用于ｉＮＯＳ基因表达的研究。     

用DIG标记的寡核苷酸基因探针杂交技术进行人轮状病毒VP7G血清型鉴定

目的：建立用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ，ＤＩＧ）标记的寡核苷酸基因探针鉴定Ａ群轮状病毒ＶＰ７Ｇ血清型的分子杂交技术，并应用该技术研究河南Ａ群轮状病毒的Ｇ血清型分布。方法：根据轮状病毒编码糖蛋白ＶＰ７的基因核苷酸序列，选择该基因高保守区序列中与ＶＰ７Ｇ血清型高度相关的核苷酸片段，人工合成，并用ＤＩＧ标记。在优选的杂交条件下进行杂交：结果：①Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３和Ｇ４四种Ｇ血清型特异性寡核苷酸探针只与同血清型的轮状病毒参考毒株杂交，无交叉杂交现象。灵敏度和特异性达到放射性同位素３２Ｐ标记的水平。②１８８份经ＰＡＧＥ确定的轮状病毒阳性标本中，７９份（４２．０％）、３５份（１８．６％）、１５份（７．９％）分别与Ｇ１、Ｇ２或Ｇ３型探针杂交；未检出Ｇ４型；５６份（２９．８％）未能分型；３份分型特殊。结论：该Ｇ血清型分型技术具有高度特异性和灵敏度     

一种新的五步蛇蛇毒类凝血酶Cdna的克隆和序列分析

目的：克隆出五步蛇的类凝血酶cDNA，为研究其结构和功能的关系。并为下一步基因表达开发抗血栓药物提供依据和基础。方法：从五步蛇蛇腺中提取了总RNA，通过反转录合成第一链cDNA，经PCR扩增出五步蛇毒腺中类凝血酶TLE1的cDNA片段，并将其连接到质粒载体扩增，然后进行DNA测序。结果：成功克隆出一种新的五步蛇类凝血酶的cDNA片段。此片段全长794bp，包括编码部分的全长为777bp。推导其编码的蛋白质序列为258个氨基酸，其中包括18个氨基酸的信号肽，6个氨基权的前肽和234个氨基酸的成熟氨基酸顺序。TLE1成熟肽与其它蛇毒类凝血酶相比，蛋白质一级结构具有较高的同源性。结论：从五步蛇中成功克隆出一 种新的类凝血酶cDNA，并确定了它的DNA顺序。     

ZDY101和SZ201对α-分泌性淀粉样前体蛋白生成的影响

目的探讨ZDY10 1和SZ2 0 1及二者不同配比联合应用对HEK2 93sw细胞生成α -分泌性淀粉样前体蛋白的影响。　方法用Westernblot法检测HEK2 93sw细胞生成的α -sAPP含量 ,观察ZDY10 1、SZ2 0 1及二者不同配比联合应用在 2 4～ 48h、48～ 72h时段内α -sAPP生成量的变化。　结果 2 4～ 48h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1浓度分别为 1× 10 - 5mol L时 ,α -sAPP含量分别为 2 .0 6± 0 .73、2 .6 4± 1.2 1,明显高于DMSO对照组的 1.0 0(P <0 .0 1) ;48～ 72h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1单独应用且浓度分别为 1× 10 5mol L时 ,α -sAPP含量也明显高于DMSO对照组的 1.0 0 (P <0 .0 1)。二者相加的效果高于ZDY 10 1、SZ2 0 1单独应用 (P <0 .0 5 )。如果二者联合应用 ,降低各自的浓度 ,总浓度仍为 1× 10 - 5mol L时 ,提高α -sAPP含量的效果不明显。　结论ZDY10 1、SZ2 0 1在一定浓度时 ,能增加α -sAPP的生成 ,二者联合应用效果更强。