汉黄芩素对肺腺癌A549细胞黏附和迁移能力的影响及其可能机制

目的:观察汉黄芩素对人肺腺癌A549细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其分子作用机制。方法:采用MTT法检测汉黄芩素对A549细胞增殖和黏附能力的影响;细胞划痕实验和侵袭小室法检测其对A549细胞迁移和侵袭能力的影响;RT-PCR和Western印迹法检测汉黄芩素对A549细胞中与转移相关的基因,如细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、内皮细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和c-Met表达的影响。结果:汉黄芩素能抑制A549细胞的生长,其细胞增殖抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖关系。低浓度的汉黄芩素处理A549细胞后,可明显降低肺癌细胞的黏附、迁移和侵袭能力。汉黄芩素能有效抑制ICAM-1、VCAM-1基因和蛋白的表达,但对c-Met基因及其蛋白并没有影响。结论:汉黄芩素具有抑制肿瘤细胞转移的作用,其分子机制可能与下调ICAM-1和VCAM-1的表达有关,但与c-Met表达无关。     

毛细管电泳法同时测定三黄片中7种有效成分的含量

目的:建立同时测定三黄片中7种有效成分——汉黄芩苷、汉黄芩素、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚含量的方法。方法:采用毛细管电泳法。内标为对乙酰氨基酚;毛细管柱为未涂层弹性融硅石英柱,有效长度为47 cm;运行缓冲液为25 mmol.L-1硼砂溶液+25 mmol.L-1十二烷基硫酸钠+4 mmol.L-1磺丁基β-环糊精+8%甲醇(pH 9.42);分离电压为14 kV;重力进样时间为5 s(高度为15 cm);检测波长为254 nm;温度25℃;湿度<70%。结果:7种有效成分检测浓度分别在2.02～20.16、1.00～10.00、1.60～16.00、1.20～12.00、2.00～20.00、7.20～72.00、1.00～10.00μg.mL-1范围内与各自峰面积积分值线性关系良好;回收率分别为100.6%、98.3%、99.9%、101.2%、99.8%、102.0%、101.8%,RSD均<3.0%。结论:本方法专属性强、结果准确可靠、重复性好,可用于三黄片的质量控制。     

黄芩中汉黄芩素的提取制备

为建立制备大量高纯度汉黄芩素的方法,将中药黄芩50g用pH 5水水解12h,再用95％的乙醇提取,得到的提取物浸膏,过30～60目的聚酰胺树脂柱纯化,将含有汉黄芩素的洗脱物采用高速逆流色谱（HSCCC）进行分离.通过该方法制得汉黄芩素525mg,纯度为98.7％.     

黄芩自生酶催化水解总黄酮苷的工艺研究

目的研究黄芩自生酶催化水解总黄酮苷的工艺条件。方法采用正交试验,考察了加水量、温度和时间等因素,采用HPLC法测定了药材中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素-A的含量。结果确定最优酶催化水解工艺条件为取药材,加4倍量水,于32℃酶催化水解12h,烘干后备用。结论黄芩自生酶催化水解总黄酮苷是一种环保、经济、可行的方法。     

HPLC法同时测定黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量.方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长为277 nm;流速1.0 ml·min -1;进样量10 μl;柱温35℃.结果:黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的线性范围分别为0.059 ～ 1.175 μg,r=1.000 0(n =7)、0.010～0.204μg,r=1.000 0(n =7)和8.210×10-3～1.642×10-1 μg,r =1.000 0(n =7);提取回收率分别为99.08％,RSD=0.5％(n=6)、98.66％,RSD =0.5％ (n =6)和98.31％,RSD =0.7％ (n =6).结论:本法操作简便、快速、结果准确,可用于黄芩的质量控制.     

不同产地黄芩中的有效成份含量分析

目的探讨不同产地黄苓中的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量变化。方法制备供试品、对照品溶液,采用HPLC法,测定不同产地（河北承德、内蒙古自治区乌兰浩特、山西大同、吉林长白山）黄苓中黄苓苷、黄苓素、汉黄芩素的含量。结果黄芩苷、黄芩素、汉黄苓素含量测定方法的线性关系、重复性良好。精密度稳定。河北承德黄苓中黄芩苷含量最高,其次依次由高到低为：山西大同、吉林长白山、内蒙古自治区乌兰浩特;内蒙呼兰浩特的黄芩素、汉黄芩素含量最低,表明该地区收购的黄芩野生黄芩相对较多,其他产地的黄芩的黄芩素、汉黄芩素含量由高到低为：河南承德、山西大同、吉林长白山。结论不同产地的黄芩苷、黄芩素、汉黄苓素含量不同,临床用药应根据不同病症、不同产地调整药物剂量。     

Wogonin, an active ingredient of Chinese herb medicine Scutellaria baicalensis, inhibits the mobility and invasion of human gallbladder carcinoma GBC-SD cells by inducing the expression of maspin

Ethnopharmacological relevance

A traditional Chinese medicine Scutellaria baicalensis is prescribed for the treatment of a variety of inflammatory diseases and tumors in clinic in China. However, the detailed mechanism of anti-metastasis effect of wogonin, a main active ingredient of Scutellaria baicalensis, remains elusive.

Aim of the study

The present study was designed to investigate the action and mechanism of wogonin on the mobility and invasion of human gallbladder carcinoma GBC-SD cells.

Materials and methods

Viability, apoptosis, mRNA and protein expression of tumor cells were analyzed by MTT, Annexin V staining, real-time PCR and Western blot, respectively. The migration and invasion assay was used to evaluate the anti-metastasis effect of wogonin. Knockdown of maspin was performed by specific small interference RNA.

Results

Wogonin at the dose of 1-10 μM, which did not induce apoptosis, significantly inhibited the mobility and invasion activity of human gallbladder carcinoma GBC-SD cells. In addition, the expressions of matrix metalloproteinase (MMP)-2, MMP-9 and phosphorylated extracellular regulated protein kinase 1/2 (ERK1/2) but not phosphorylated Akt were dramatically suppressed by wogonin in a concentration-dependent manner. Furthermore, the metastasis suppressor maspin was confirmed as the downstream target of wogonin. Both maspin mRNA and protein were upregulated by wogonin. Interestingly, the knockdown of maspin resulted in almost completely blocking of wogonin-induced inhibition of MMP-2, MMP-9 and phosphorylated ERK1/2 as well as the mobility and invasion activity of GBC-SD cells.

Conclusions

These findings suggest that wogonin inhibits cell mobility and invasion by upregulating the metastasis suppressor maspin. Together, these data provide novel insights into the chemoprotective effect of wogonin, a main active ingredient of Chinese medicine Scutellaria baicalensis.     

黄芩有效成分对四氯化碳致伤的原代培养大鼠肝细胞的作用

作者采用原代培养大鼠肝细胞研究黄芩有效成分的护肝作用，并对其中含量较多的结晶单体进行结构鉴定。结果表明：黄芩的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物（１．０～２．５ｍｇ／ｍｌ）均可使四氯化碳致伤的肝细胞培养液中ＡＬＴ活性显著降低（Ｐ＜０．００１）。从黄芩乙酸乙酯萃取物分离出来的晶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ在所试浓度下均有显著护肝作用；晶Ⅰ则主要为直接抑制酶活性作用。经理化鉴别和光谱分析，晶Ⅰ、Ⅱ分别为汉黄芩素和黄芩素。     

汉黄芩素及其抑制物细胞周期蛋白依赖性激酶1对人脑胶质瘤干细胞作用机制的研究

目的研究汉黄芩素及其抑制剂细胞周期蛋白依赖性激酶1（CDK1）对人脑胶质瘤干细胞（BGSCs）的作用机制。方法使用不同浓度的汉黄芩素（1、10、1000μmol/L）对BGSCs进行浸染,并设空白对照组。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测汉黄芩素对BGSCs增殖的影响;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CDK1 mRNA表达;同时检测脂质过氧化产物还原型谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的变化。结果汉黄芩素对人BGSCs增殖具有明显的抑制作用,各剂量汉黄芩素组BGSCs增殖〔吸光度（A）值〕较空白对照组明显降低,随给药浓度增加,细胞生长抑制率（IR）较空白对照组逐渐增加,以汉黄芩素100μmol/L组作用更显著〔A值：0.18±0.02比0.67±0.03,IR：（64.43±0.04）%比0,均P＜0.05〕;各剂量汉黄芩素组CDK1 mRNA表达（A值）均较空白对照组有不同程度的提高,在10μmol/L、100μmol/L汉黄芩素组出现显著提高（0.378±0.061、0.733±0.081比0.125±0.019,均P＜0.05）;脂质过氧化产物GSH （mg/g）、SOD（U/g）和MDA（nmol/g）在各个剂量汉黄芩素组与空白对照组比较差异均无统计学意义（GSH：474.51±38.63、479.67±15.89、481.17±36.41比487.00±28.53,SOD：26.58±2.26、26.75±1.96、27.08±1.52比27.31±1.89,MDA：4.92±0.45、4.72±0.73、4.61±0.47比4.45±0.26,均P＞0.05）。结论 CDK1可能参与汉黄芩素抑制人BGSCs生长的作用机制,该作用与脂质过氧化产物无关。