多孔陶瓷板固定床生物反应器设计及模拟

设计了一种结构新型的多孔陶瓷固定床生物反应器，与传统的固定床相比，该反应器具有氧传递性能好，能够均匀接种等优点，通过模拟，考察了反应器内的流体流动和气液传递性质，计算证明反应器的供氧能力能够满足链霉菌发酵过程对氧的需求。     

耐磷酸盐土霉素菌株选育和发酵的研究

以土霉素生产菌株138^#为出发菌株，经饥饿培养、5-FU、UV、咖啡因复合诱变处理，再用含高磷酸盐的培养基定向筛选，得到高产突变菌株100^#。该突变株遗传特性稳定，代谢特性优于出发菌株，经57m^3发酵罐生产验证，生产稳定，低效价罐批减少59．5％，在磷酸盐浓度提高到0.04％～0.05％时，统计一年的正常罐批平均发酵效价比对照菌株提高5．76％。     

海绵共附生链霉菌Streptomyces parvulus 162432次级代谢产物研究

目的 研究海绵共附生链霉菌Streptomyces parvulus 162432的化学成分。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶填料（ODS）中压柱色谱和半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化,得到的单体化合物采用HR-ESI-MS、NMR以及文献比对等方法进行鉴定,新化合物的绝对构型通过计算NMR和圆二色谱（ECD）确定。结果 从菌株Streptomyces parvulus 162432中分离纯化了9个环二肽类化合物,包括1个新化合物链霉菌二肽A（1）和8个已知化合物：环-(D-顺式-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸)（2）、环-(D-脯氨酸-D-苯丙氨酸)（3）、环-(L-羟脯氨酸-L-亮氨酸)（4）、环-(L-羟脯氨酸-D-亮氨酸)（5）、环-(D-脯氨酸- L-亮氨酸)（6）、环-(L-脯氨酸-D-亮氨酸)（7）、环-(D-脯氨酸-L-异亮氨酸)（8）、环-(L-亮氨酸-D-缬氨酸)（9）。对分离得到的化合物1～9进行肿瘤细胞增殖细胞毒和抗菌活性评价,活性结果显示,化合物1～9在10 μg/mL下对肿瘤细胞增殖均未显示出明显的细胞毒活性;化合物9对苏云金芽孢杆菌显示抑菌活性,最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）为25 μg/mL。结论 化合物1为新化合物,化合物2和4～9为首次从链霉菌Streptomyces parvulus中分离得到,化合物9具有一定的抗菌活性。     

云南美登木共生放线菌菌株CS产生的新多羟基环己烷衍生物

从云南美登木共生放线菌菌株(Streptomyces sp.)CS的发酵产物中分离得一个新的多羟基环己烷衍生物,并通过波谱学特征鉴定化合物的结构为1-isobutyroxymethyl cyclohex-1(6)-ene-2,3,4,5-tetrol-2-isobutyrate.     

黄直丝链霉菌生产的新的细胞周期抑制剂(-)-脱水亚胺环己酮和l-亚胺环己酮

采用tsFT210细胞的流式细胞术活性筛选模型,通过活性跟踪分离,从黄直丝链霉菌18522发酵物中分离得到两个具有细胞周期抑制活性的化合物,并根据波谱数据和理化性质分别鉴定为(-)-脱水亚胺环己酮(1)和l-亚胺环己酮(2).活性测试结果表明,1和2将tsFT210细胞的细胞周期抑制在G0/G1期,最低有效浓度分别为23.8 μmol/L(1)和10.8 nmol/L(2).化合物1为新天然产物,也是新的亚胺环己酮类细胞周期抑制剂.     

复合诱变筛选avermectins高产菌株

由Streptomyces avermitilis初始菌株经过自然分离可以得到三种不同类型的菌株，即灰色粉末型、白色和光秃型。其中灰色粉末型产素水平最高，摇瓶发酵效价达到6835．1μg／ml，B1组分达到56．3％。经过紫外线和亚硝基胍对初始菌株的孢子的诱变及对其原生质体的诱变再生。并且经过异亮氨酸和链霉素的定向筛选，得到的高产菌株摇瓶发酵效价达到8542．9μg／ml，B。组分达到64．9％；同时通过对高产菌株进行传代培养检验其传代稳定性，结果表明，传代3代后，菌株开始退化，并且其发酵效价有比较显著的下降。     

前体对纳他霉素生物合成的影响

研究如何通过加入前体来提高生物合成纳他霉素的产量，进行了前体种类选择、前体加入量及加入时间的优化实验，结果表明，丙酸钠是比乙酸钠、丁酸钠、正丙醇更佳的纳他霉素合成前体，乙醇及正丁醇对纳他霉素生物合成无明显促进作用；在发酵24h时向发酵培养基中添加0．6％的丙酸钠．纳他霉素产量达3014．43mg／L，与不添加前体相比提高了185.8％，具有较好的工业应用价值。     

棒状链霉菌中lat基因的置换与克拉维酸的选择性生产

目的提高棒状链霉菌的克拉维酸生产能力 ,去除副产物头霉素C。方法将安普霉素抗性基因片段插入到 4 7kb的lat pcbAB基因片段中 ,采用接合转移方法对棒状链霉菌中头霉素C生物合成的关键基因lat基因进行了置换。结果与结论经PCR验证 ,染色体上正常的lat pcbAB基因被插入失活的基因所替代。对重组菌株的发酵产物进行HPLC检测 ,发现所有的重组菌株均不再合成头霉素C ,并且重组菌株C35 85 lat ::apr、C2 5 1 lat::apr和C16 6 lat::apr的克拉维酸产量较出发菌株分别提高了 2 6 7 6 8%、4 3 6 9%和 35 0 5 %。结果表明基因插入失活是去除多余组分 ,提高目标组分产量的可行途径     

海洋链霉菌Streptomyces sp. S598中抗菌活性产物的研究

目的 对海洋链霉菌Streptomyces sp. S598固体发酵提取物的抗菌成分进行研究。方法 采用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、反相柱色谱、硅胶柱层析及半制备HPLC等方法分离纯化该菌株的活性次级代谢产物,并通过ESI-MS、NMR等波谱技术结合文献对比鉴定其结构。结果 从10L固体发酵提取物中分离得到5个单体化合物,分别鉴定为缬氨霉素(1)、二活菌素(2)、亚油酸(3)、亚油酸甲酯(4)和油酸(5)。结论 海洋链霉菌Streptomyces sp. S598能代谢产生具有多种生物活性的化合物。化合物1对MRSA 28300和白念珠菌(ATCC10231)的MIC为1μg/mL,化合物2具有较强的广谱抗细菌活性,对肺炎链球菌、流感嗜血菌的MIC为0.125μg/mL,尤其具有显著的抗MRSA的活性,对MRSA     

活跃链霉菌nshA基因失活对那西肽发酵的影响

目的通过对活跃链霉菌那西肽生物合成基因簇中的nshA基因进行内部片段缺失,考察其对那西肽生物合成的影响。方法利用重叠延伸PCR(Gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)的方法失活nshA基因,并构建具有接合转移功能的大肠杆菌-链霉菌重组质粒pSH03,通过接合转移将重组质粒pSH03导入到活跃链霉菌细胞内,并通过同源交换形成活跃链霉菌基因组上的nshA基因失活。采用摇瓶进行发酵,采用HPLC的方法检测发酵液中诺西肽的含量。结果重组菌株的那西肽发酵产量较对照菌株有明显提高。结论 nshA基因对那西肽的生物合成有负调节作用,该基因的失活,有利于那西肽生物合成酶结构基因的表达,使诺西肽的产量有明显提高。