Investigation of the mechanisms of Genkwa Flos hepatotoxicity by a cell metabolomics strategy combined with serum pharmacology in HL-7702 liver cells

1. To investigate Genkwa Flos hepatotoxicity, a cell metabolomics strategy combined with serum pharmacology was performed on human HL-7702 liver cells in this study.

2. Firstly, cell viability and biochemical indicators were determined and the cell morphology was observed to confirm the cell injury and develop a cell hepatotoxicity model. Then, with the help of cell metabolomics based on UPLC-MS, the Genkwa Flos group samples were completely separated from the blank group samples in the score plots and seven upregulated as well as two down-regulated putative biomarkers in the loading plot were identified and confirmed. Besides, two signal molecules and four enzymes involved in biosynthesis pathway of lysophosphatidylcholine and the sphingosine kinase/sphingosine-1-phosphate pathway were determined to investigate the relationship between Genkwa Flos hepatotoxicity and these two classic pathways. Finally, the metabolic pathways related to specific biomarkers and two classic metabolic pathways were analyzed to explain the possible mechanism of Genkwa Flos hepatotoxicity.

3. Based on the results, lipid peroxidation and oxidative stress, phospholipase A₂/lysophosphatidylcholine pathway, the disturbance of sphingosine-1-phosphate metabolic profile centered on sphingosine kinase/sphingosine-1-phosphate pathway and fatty acid metabolism might be critical participators in the progression of liver injury induced by Genkwa Flos.     

试论乌梅丸以气味配伍组方

乌梅丸出自《伤寒论》厥阴病篇，其为历代医家推崇的关键在于紧扣病机，方证对应，组方合理，配伍精当。本文从酸辛苦甘，刚柔相济；清上温下，攻补兼施；辛开苦降，土木两调3个方面讨论了乌梅丸按照气味配伍组方的特点。     

复方丁香洗剂中丁香酚和苦参碱的含量测定

目的建立紫外分光光度法及酸性染料比色法测定复方丁香洗剂中丁香酚和苦参碱的含量.方法丁香酚、苦参碱均可与氢氧化钠成盐而溶于碱,易于分离,前者于(296±2)nm波长处测定吸收度,后者与溴麝香草酚蓝络合后于(415±2)nm波长处测定吸收度.结果丁香酚平均回收率为98.30%,RSD为0.76%,在10.26～23.95 mg·L-1范围有良好的线性关系(r=0.999 8);苦参碱平均回收率为98.63%,RSD为0.83%,在3～10.5 mg·L-1范围线性关系良好(r=0.999 6).结论本方法准确,灵敏度好,可用于复方丁香洗剂或中药制剂中的丁香酚、苦参碱含量测定.     

红心大白菊挥发油成分的GC-MS分析

目的 :分析我国中药材GAP基地红心大白菊挥发油的化学成分 ,为其质量评价提供科学依据。方法 :采用水蒸气蒸馏法提取红心大白菊挥发油 ,用GC毛细管柱进行分析 ,归一化法测定其相对含量 ,并用GC-MS法鉴定化学成分。结果 :检出 136个色谱峰 ,鉴定出 47个化合物 ,占挥发油总量的 62.24%。结论 :红心大白菊挥发油中 ,雪松醇、喇叭醇和 1-(1,5-二甲基-4-己烯基 )-4-甲基苯是其主要成分 ,以倍半萜类化合物喇叭醇含量最高 ,占总挥发油量的 13.9%。     

银翘解毒片中掺伪山银花成分监测

目的：建立银翘解毒片中掺伪山银花成分灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的检测方法。方法：采用高效液相色谱-电喷雾检测器法(HPLC-CAD),色谱柱为Superiorex ODS C₁₈(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^-1,雾化器温度45℃,采集频率10Hz,滤光片10.0s,并对检出的掺伪山银花采用高效液相色谱-质谱联用方法确认。结果：灰毡毛忍冬皂苷乙在0.239～7.158μg内呈良好线性关系,r=0.9992 (n=7),平均回收率为99.43%,RSD=0.94%(n=9);川续断皂苷乙在0.202～6.066μg内呈良好线性关系,r=0.999 3(n=7),平均回收率为98.86%,RSD=0.76%(n=9)。结论：该方法科学、准确,适用于银翘解毒片中掺伪山银花,以检查保证用药安全。     

国医大师禤国维应用酸敛法治疗小儿特应性皮炎经验

介绍禤国维教授应用酸敛法治疗小儿特应性皮炎的临床经验。认为表虚兼有表燥是本病的基本病机特点,酸敛法可调理肺气、收敛心神、收敛肝气;治疗上注重散收并用,乌梅、五味子、白芍为其最常用的酸敛药,可调理肺、心、肝三脏的功能,并通过与辛散类药物(紫苏叶、防风、蝉蜕等)的配合,达到敛阴而不留邪、祛邪而不伤正的效果。并附验案1则。     

对药酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及皮质ERK-CREB细胞信号转导通路的影响

目的探讨对药酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及皮质细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)细胞信号传导通路的影响。方法将雄性2月龄SD大鼠75只,按随机数字表法分为正常组、模型组、中药组、西药组、PD184161组,每组15只。采用孤养加慢性不可预知性温和应激(CUMS)复制大鼠抑郁模型,于实验前1d及实验第1、2、3周末用旷场实验、糖水消耗实验观察各组大鼠的行为学改变。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Time PCR)法对皮质CREB、BDNF mRNA行定量分析。蛋白质免疫印迹(Western Blot)法测皮质ERK1/2、p-ERK1/2、p-RSK及p-CREB蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠旷场实验得分、糖水消耗度下降,从第2周末开始有统计学意义(P<0.05,P<0.01)、皮质CREB、BDNF mRNA水平下降(P<0.05,P<0.01)、ERK1/2、p-ERK1/2、p-RSK、p-CREB蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组、PD184161组大鼠旷场实验得分、糖水消耗度提高,从第2周末开始有统计学意义(P<0.05,P<0.01),皮质CREB、BDNF mRNA水平上调(P<0.05),ERK、p-ERK、p-RSK、p-CREB蛋白表达增强(P<0.05,P<0.01);与中药组比较,PD184161组大鼠旷场实验得分、糖水消耗度下降,第3周末有统计学意义(P<0.05),皮质CREB、BDNF mRNA水平下降(P<0.05),ERK、p-ERK、p-RSK、p-CREB蛋白表达降低(P<0.05)。结论对药酸枣仁-合欢花能够改善抑郁模型大鼠的抑郁症状,具有抗抑郁功效,其作用机制可能与激活ERK-CREB信号传导通路,增强通路中关键因子的表达有关。     

基于网络药理学及分子对接探讨丁香-柿蒂治疗食管癌的分子机制

目的预测丁香-柿蒂药对治疗食管癌的作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)筛选出丁香、柿蒂的活性成分;在PubChem数据库中搜索活性成分的化学分子式,将化学分子式上传至靶点预测数据库(SwissTargetPrediction)得到预测的基因靶点。以"esophageal cancer"为关键词,在基因疾病关联数据库(DisGeNET)中检索食管癌的相关靶基因,将其与药对的活性成分靶基因相互映射,筛选出共同靶点。利用Cytoscape 3.7.1软件绘制活性成分-靶点网络。将筛选出来的靶点在蛋白质相互作用网络数据库(STRING)中构建蛋白互作网络;同时,选择生物信息分析学习平台(Omicshare)进行基因GO功能及KEGG通路的富集分析。使用分子对接软件(AutoDock Vina),将核心靶点与活性成分进行分子对接,并使用分子绘图软件(PyMol)和(LigPlus)绘制图片。结果从丁香-柿蒂药对中共筛选出11个活性成分,包括槲皮素(quercetin)、山奈酚(kaempferol)、齐墩果酸(oleanolic acid)等,主要作用于AKT1、SRC、EGFR 3个靶点,主要涉及FoxO、Relaxin、PI3K-AKT、Rap1等信号通路。结论本研究通过网络药理学的方法预测丁香-柿蒂药对治疗食管癌的分子机制,为丁香-柿蒂药对治疗食管癌的基础研究和临床应用提供参考。     

论乌梅在二陈汤中的祛痰作用

二陈汤中配伍乌梅,多认为是取其酸收润燥之性。但分析《太平惠民和剂局方》治痰方的用药规律,发现乌梅是祛痰止咳的配伍常用药。乌梅敛肺而不敛痰、生津而不滋腻,可佐制温燥以"减毒";其长于止咳化痰,又可协助祛痰而"增效"。二者兼论,方能全面体现出乌梅在二陈汤等祛痰方中的双重配伍价值。特别是针对后世"用二陈而畏乌梅"的局面,尤其应当强调:乌梅为二陈汤中的有效药物,不可随意舍弃。