miR-29b介导的TGF-β/Smad信号通路对大鼠肝纤维化进程的影响

目的:初步研究微小RNA-29b(mi R-29b)介导的TGF-β/Smad信号通路在肝星状细胞(HSC)活化中的作用及其对大鼠肝纤维化进程的影响。方法:构建肝纤维化大鼠模型并分离其HSC,同时通过体外获取并鉴定正常大鼠HSC。运用RT-qPCR和Western blot检测以上获取细胞中mi R-29b、TGF-β/Smad信号通路相关蛋白和肝纤维化标志蛋白的变化水平,并通过双萤光素酶报告基因检测系统鉴定mi R-29b对TGF-β1的直接靶向结合情况。结果:随着HSC活化加深,mi R-29b的表达量逐渐减少(P 0. 01),而HSC活性标志物I型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达量逐渐增加(P 0. 01)。在TGF-β/Smad信号通路中,Smad2/3/4的表达显著增加,而Smad7的表达明显下降(P 0. 01)。双萤光素酶报告基因检测结果显示,mi R-29b可直接结合于TGF-β1 3’UTR的"UCUCUCCGU"序列,表明TGF-β1为mi R-29b的一个下游靶基因。结论:mi R-29b可参与抑制HSC的活化和迁移,进而抑制肝纤维化进程,而其生物学功能可能是通过直接靶向抑制TGF-β1进而调控TGF-β/Smad信号通路实现的。     

微小RNA-23b-3p通过靶向TGFBR3促进人心房肌成纤维细胞纤维化相关基因表达

目的:探究微小RNA-23b-3p(mi R-23b-3p)对人心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用及其可能作用靶基因。方法:分离并体外培养房颤患者心耳中原代心房肌成纤维细胞,并用细胞免疫荧光染色实验鉴定;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-23b-3p与潜在靶基因转化生长因子β受体3(TGFBR3) 3'端非翻译区(3'-UTR)的结合作用; CCK-8、Ed U染色及Transwell实验检测细胞活力、增殖及迁移能力,RT-qPCR和Western blot法检测TGFBR3及纤维化相关基因的m RNA和蛋白表达。结果:在人心房肌成纤维细胞中过表达mi R-23b-3p不影响细胞的活力、增殖及迁移能力,但可显著增强细胞中纤维化相关基因COL1A1、COL3A1和ACTA2的表达(P 0. 05或P 0. 01)。双萤光素酶报告基因实验显示mi R-23b-3p与TGFBR3 3'-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot结果证实mi R-23b-3p可在转录水平抑制TGFBR3表达。过表达mi R-23b-3p和沉默TGFBR3均能显著促进人心房肌成纤维细胞中Smad3激活和纤维化相关基因表达(P 0. 05或P 0. 01)。结论:TGFBR3是mi R-23b-3p的作用靶基因,并介导mi R-23b-3p促进心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。     

转录组学在药用植物研究中的应用

药用植物转录组学研究已经成为药用植物基因组研究中最活跃的领域之一.以转录组学的产生、发展和研究方法为基础,介绍了药用植物中转录组学的应用现状,重点介绍了转录组学当前采用的技术手段以及在西洋参、丹参、乌拉尔甘草功能基因组学中的研究进展.同时对转录组学在药用植物中的发展前景进行了讨论.     

miR-31调控PAX9对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 研究miR-31调控配对盒基因9(PAX9)对肺癌细胞侵袭和增殖能力的影响.方法 运用免疫组织化学检测肺癌组织和癌旁正常组织PAX9蛋白的表达;运用荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁正常组织和肺癌细胞株M14中miR-31的表达.通过转染miR-31-inhibitor下调M14细胞中miR-31的表达,双荧光素酶活性检测miR-31对PAX9转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-31对M14细胞的侵袭能力的影响;平板克隆实验检测miR-31对M14细胞的增殖能力的影响.结果 与癌旁正常组织比较,PAX9蛋白在肺癌组织中表达降低,miR-31在肺癌组织中表达明显升高(P<0.05);双荧光素酶活性检测结果显示,miR-31可以直接调控PAX9的转录活性;抑制miR-31的表达后,肺癌细胞株M14的PAX9蛋白表达水平上调,侵袭和转移能力明显降低(P<0.05).结论 miR-31靶向PAX9的表达,从而调控肺癌细胞的侵袭和增殖能力.     

骨肉瘤患者血浆中microRNA-181b水平的检测

目的检测骨肉瘤患者血浆中microRNA-181b (miR-181b)的水平变化,初步探讨其临床意义.方法选择25例骨肉瘤患者和30例健康对照,采用茎-环定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测血浆中miR-181b的水平,并分析miR-181b与骨肉瘤临床病理指标之间的关系.结果骨肉瘤患者血浆中miR-181b水平(0.62±0.25)与正常对照组(0.41±0.18)相比明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.01);骨肉瘤患者血浆中miR-181b的水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、病理类型及Enneking分期均无明显相关性(P＞0.05).结论骨肉瘤患者血浆中miR-181b水平增高,miR-181b可能参与了骨肉瘤的发病过程.     

MicroRNA-21与胃癌关系的研究进展

胃癌的发生和发展是一个复杂、多步骤的过程,涉及原癌基因和抑癌基因的遗传失调,最近研究较多的微RNA(miRNA)起着重要作用。miRNA是一种长为21²3个核苷酸的非编码RNA分子,参与细胞增殖、凋亡和分化以及恶性肿瘤的发生,是重要的调节器。近些年来,人们针对miR-21在恶性肿瘤中的表达研究最为广泛深入,该文就miR-21与胃癌的关系进展予以综述。     

人类微小RNA-208a的靶基因预测及生物学过程和信号通路的生物信息学分析

目的 采用生物信息学技术预测人类微小RNA-208a(hsa-miRNA-208a)靶基因及分析其可能参与的生物学过程及信号通路.方法 应用miRbase数据库和UCSC Genome Browser分析工具获取hsa-miRNA-208a的染色体定位、碱基序列和物种保守性等基本信息,利用miRanda、miRDB、TargetScan和miRwalk进行靶基因预测,采用miRwalk网站对靶基因取交集,合并有文献支持和经实验证实的靶基因作为基因集,对基因集进行功能富集分析(GO分析)和信号通路分析.结果 hsa-miRNA-208a序列在各物种间高度保守.对TargetScan、miRDB、miRanda和miRwalk预测的靶基因进行交集后共得到16个靶基因(CPEB2、CSNK2A2、DLD、MTF2、FBXO28、LEP、SMAD4、NLK、GPR88、VPS13D、ZNF215、CHD9、SLC7A5、C19orf44、SLC45A3、MAP4K4),miRwalk、DIANA Lab TarBase检索到已验证的靶基因分别为12个(CASP3、MRGPRX3、FPRL1、MED13、IL10、GATA4、HSH2D、MYH6、MYH7、TNNI3、CDKN1A、PAK3)和3个(SOX6、MTM1、TAB3).GO分析结果显示靶基因富集于心室肌组织发育、心室形态发育、心腔发育、心肌发育、心脏发育以及细胞发育等生物学过程(P＜0.05);信号通路分析结果显示靶基因富集于黏附连接、紧密连接、心肌收缩、Wnt信号通路以及病毒性心肌炎、肥厚型心肌病和扩张型心肌病的相关信号通路中(P＜0.05).结论 hsa-miRNA-208a参与心脏生长发育的生物学过程,与心肌疾病的发生密切相关.     

微小RNA-454、微小RNA-132、液泡膜-ATP酶表达与结肠癌临床病理特征关联性分析

目的 探讨组织微小RNA(miR)-454、miR-132、液泡膜-ATP酶（V-ATPase）表达与结肠癌病人临床病理特征关联性。方法 选取2011年9月至2014年11月新乡医学院第一附属医院行手术切除的96例结肠癌组织标本、96例癌旁正常结肠组织标本、82例良性结肠病变标本为研究对象。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）测定标本中miR-454、miR-132、V-ATPase mRNA表达,分析miR-454、miR-132、V-ATPase mRNA表达与结肠癌病人一般资料、临床病理参数的关系,随访5年,统计miR-454、miR-132、V-ATPase高表达、低表达病人3年、5年生存率。结果 结肠癌组织标本中miR-454表达69.86±7.29与V-ATPase mRNA表达5.42±0.41高于良性结肠病变组织10.74±2.03、2.79±0.38、癌旁正常结肠组织标本1.28±0.74、1.96±0.32,miR-132水平表达1.46±0.25低于良性结肠病变组织3.68±0.73、癌旁正常结肠组织标本4.59±1.24(P<0.05);中低...     

微小RNA-148a-3p靶向调控MAP3K9表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-148a-3p（miR-148a-3p）对丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9（MAP3K9）的靶向调控作用及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 向对数生长期胃癌细胞株MGC-803转染miR-148a-3p模拟物（mimics组）和阴性对照（NC组），以未转染的MGC-803细胞为对照组；采用实时定量PCR（QPCR）检测各组miR-148a-3p水平以评价转染效率，MTT法检测各组细胞增殖能力，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况，分别采用QPCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3及MAP3K9 mRNA和蛋白水平，同时采用双荧光素酶报告实验验证miR-148a-3p与MAP3K9的靶向作用关系。结果 QPCR结果显示，对照组、NC组和mimics组的miR-148a-3p水平分别为1.021±0.123、1.087±0.196和2.854±0.368，与对照组和NC组比较，mimics组的miR-148a-3p水平升高（P＜0.05）。mimics组MGC-803细胞的增殖活力较其余两组减弱（P＜0.05）。mimics组MGC-803细胞凋亡率为（15.2±1.6）％，高于对照组的（3.5±0.9％）％和NC组的（4.5±1.1）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与对照组和NC组比较，mimics组的MAP3K9和Bcl-2的mRNA和蛋白水平均下调，而Bax和caspase-3的mRNA和蛋白水平均上调（P＜0.05）；双荧光素酶报告实验证实MAP3K9是miR-148a-3p的直接作用靶点。结论 MiR-148a-3p可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡，可能通过靶向MAP3K9来发挥抑癌作用，调控miR-148a-3p／MAP3K9轴在胃癌防治中有一定应用前景。     

miR-429 expression in bladder cancer and its correlation with tumor behavior and clinical outcome

We previously showed that microRNA-429 (miR-429) played an important role in epithelial–mesenchymal transition (EMT) of urothelial cell carcinoma of the bladder. We herein evaluated the expression of miR-429 in bladder cancer and its potential relevance to clinicopathological characteristics and patient survival. Relative expression levels of miR-429 in surgical bladder cancer tissue specimens obtained from 76 patients with bladder cancer were measured by chromogenic in situ hybridization. miR-429 expression was significantly higher in specimens from alive patients than expired patients in both of 5-year overall survival (OS) (0.59 ± 0.09 vs. 0.27 ± 0.12; p < 0.05) and 5-year recurrence-free survival (RFS) (0.63 ± 0.10 vs. 0.33 ± 0.10; p < 0.05). The univariate Cox proportional hazards analysis revealed that tumor grade, stage, and miR-429 expression were significantly associated with patient survival. In multivariate analysis, tumor stage and miR-429 expression were significantly associated with 5-year OS (hazard ratio [HR] 4.70, p < 0.001) and 5-year-RFS (HR 2.20, p < 0.05). The Kaplan–Meier analysis showed that patients with miR-429 expression had significantly better 5-year OS and 5-year RFS rates than those without miR-429 expression (84.4% vs. 61.4%, p < 0.05 and 71.9% vs. 45.5%, p < 0.05, respectively). miR-429 may be considered as an adjunctive prognostic marker in addition to tumor grade and stage in bladder cancer.