人睾丸组织中成熟精子的分离方法初探

探索简单、适用的体外分离睾丸组织中成熟精子的方法,以用于男性无精子症病人行卵母细胞内单精子注射受精-胚胎移植为目的。用含不同浓度透明质酸酶的10 %人血白蛋白人类输卵管液培养人睾丸曲细精管组织匀浆2 4 h,再用Percoll梯度离心法洗涤后计算所获各级精子的总数,并设置前后对照和空白对照进行比较。用不同浓度透明质酸酶处理后的4个实验组分别与2个对照组比较,实验组所获得的各级精子的总数高于对照组,有显著差异(P<0 .0 1)。实验组中透明质酸酶浓度分别为5 0、10 0、15 0 u/ ml的10 %人血白蛋白人类输卵管液处理组获得的各级精子总数组间比较,处理前对照和处理后空白对照之间比较,无显著差异(P>0 .0 5 )。而用浓度为2 0 0 u/ ml的10 %人血白蛋白人类输卵管液处理组获得的各级精子的总数与其它浓度处理组之间比较存在统计学差异(P<0 .0 1) ,其所获得的各级精子总数相似,但活动能力较其它浓度处理组低。透明质酸酶结合Percoll梯度离心可从人睾丸曲细精管组织匀浆中分离出较多更纯的成熟精子,但过高浓度的透明质酸酶可能会影响分离出的精子的活动能力。     

玻璃酸酶预防诺维苯所致静脉炎的实验研究及临床应用

目的探讨局部外用硝酸甘油、玻璃酸酶、2%山莨菪碱、25%硫酸镁预防诺维苯(长春瑞滨,NVB)所致静脉炎的效果.方法采用NVB 0.7 mg/kg静脉推注,在静脉推注NVB前5 min分别采用上述四种药物溶液涂抹兔耳缘静脉的局部皮肤,静脉推注后于0,0.5,1,2,3 h沿静脉走向涂抹.以穿刺点及距穿刺点2 cm为中心,各切下面积为1 cm2的耳廓组织,福尔马林固定24 h做病理检查.23例患者应用NVB前后采用玻璃酸酶溶液涂抹,方法同动物实验,并与对照组相比较.结果应用不同药物涂抹后NVB对兔耳缘静脉及周围组织的损害以玻璃酸酶组最轻.临床实验组静脉炎发生率为3.9%,疼痛程度评分3.92±1.25,疼痛持续时间2.42±0.58 d;对照组静脉炎发生率为29.4%,疼痛评分6.26±1.96,疼痛持续时间8.25±2.41 d,两组差异有显著性.结论应用玻璃酸酶溶涂抹局部血管可有效地预防静脉炎的发生.     

Probing the biofunctionality of biotinylated hyaluronan and chondroitin sulfate by hyaluronidase degradation and aggrecan interaction

Molecular interactions involving glycosaminoglycans (GAGs) are important for biological processes in the extracellular matrix (ECM) and at cell surfaces, and also in biotechnological applications. Enzymes in the ECM constantly modulate the molecular structure and the amount of GAGs in our tissues. Specifically, the changeable sulfation patterns of many GAGs are expected to be important in interactions with proteins. Biotinylation is a convenient method for immobilizing molecules to surfaces. When studying interactions at the molecular, cell and tissue level, the native properties of the immobilized molecule, i.e. its biofunctionality, need to be retained upon immobilization. Here, the GAGs hyaluronan (HA) and chondroitin sulfate (CS), and synthetically sulfated derivatives of the two, were immobilized using biotin-streptavidin binding. The degree of biotinylation and the placement of biotin groups (end-on/side-on) were varied. The introduction of biotin groups could have unwanted effects on the studied molecule, but this aspect that is not always straightforward to evaluate. Hyaluronidase, an enzyme that degrades HA and CS in the ECM, was investigated as a probe to evaluate the biofunctionality of the immobilized GAGs, using both quartz crystal microbalance and high-performance liquid chromatography. Our results showed that end-on biotinylated HA was efficiently degraded by hyaluronidase, whereas already a low degree of side-on biotinylation destroyed the degrading ability of the enzyme. Synthetically introduced sulfate groups also had this effect. Hence hyaluronidase degradation is a cheap and easy way to investigate how molecular function is influenced by the introduced functional groups. Binding experiments with the proteoglycan aggrecan emphasized the influence of protein size and surface orientation of the GAGs for in-depth studies of GAG behavior.     

药物预防甲状腺手术切口粘连的探讨

目的 探讨糜蛋白酶、玻璃酸钠对甲状腺手术切口粘连的预防作用.方法 将甲状腺手术患者随机分成糜蛋白酶组、玻璃酸钠组、生理盐水组及对照组,术后2、4、6、1 2个月后进行随访观察切口粘连情况.结果 前三组与对照组的粘连发生率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 药物干预可以减少甲状腺手术切口粘连.     

人精子细胞膜结合型透明质酸酶促进人乳腺癌细胞增殖的实验观察

目的　探讨人精子细胞膜结合型透明质酸酶 (PH2 0 )促进乳腺癌细胞增殖的机制。方法　将人PH2 0cDNA转染到人乳腺癌细胞株MDA2 31中 (MDA2 31 PH2 0 ) ,对照组用pcDNA3空载体替代PH2 0重组体。将MDA2 31 PH2 0和MDA2 31 pcDNA3分别以同样数量种植到鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)上 ,种植后第 4天切取肿瘤称重 ,并用免疫组织化学方法研究肿瘤组织中血管形成的变化。另外 ,用Trans well细胞培养法研究MDA2 31 PH2 0和MDA2 31 pcDNA3细胞对牛主动脉内皮细胞 (ABAE)生长的影响 ;用Western印迹法观察这两组细胞的成纤维细胞生长因子 2 (FGF 2 )表达水平 ,并用酶联免疫吸附试验测定两组细胞的FGF 2和透明质酸 (HA)分泌量。结果　MDA2 31 PH2 0组平均肿瘤重量为4 4 7mg± 10 2mg ,MDA2 31 pcDNA3组为 2 1 3mg± 2 8mg,两组比较差异有显著意义 (t=2 4 18,P =0 0 38)。MDA2 31 PH2 0肿瘤组织中新生血管明显增多。MDA2 31 PH2 0细胞FGF 2蛋白质表达水平增高 ,同时细胞FGF含量 (8 10pg/ml± 1 5 6pg/ml)和HA含量 (12 2 0ng/ml± 2 5 4ng/ml)也均高于对照组(分别为 3 94pg/ml± 0 82pg/ml和 4 6 2ng/ml± 96ng/ml,均P <0 0 1)。结论　PH2 0可能通过促进癌细胞释放FGF 2和分解HA成小片段 ,刺激新生血管生长并促进肿瘤     

4′,5,7-三羟基黄酮,芹菜配基对人乳腺癌细胞生长和侵袭潜力的影响

目的探讨透明质酸酶（Hyaluronidase，Hyase）抑制剂4′，5，7-三羟基黄酮，芹菜配基（Apigenin）对人乳腺癌细胞生长、增殖及侵袭潜力的影响。方法通过体外侵袭模型观察Apigenin对人乳腺癌细胞穿透Matrigel（人工基底膜）能力的影响；MTT法和流式细胞仪检测Apigenin对人乳腺癌细胞株生长和增殖的影响。结果8株人乳腺癌细胞的侵袭潜力存在明显差异。加用Apigenin后其侵袭潜力均明显降低（P〈0．05），并与Apigenin存在量效关系；Apigenin对MDA-MB-435S和T47D细胞株的生长抑制作用均呈浓度依赖性；流式细胞仪显示Apigenin阻滞人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和ZR-75-30生长于G2／M期（P〈0．05）。结论Apigenin可抑制人乳腺癌细胞的增殖和Hyase的表达，并可降低人乳腺癌细胞株的侵袭潜能。     

电镜观察透明质酸酶对人眼晶状体上皮细胞作用

目的：探讨透明质酸酶是否可以溶解晶状体囊膜上皮细胞及其作用机制。方法。取人眼超声乳化白内障摘除术中撕下的前囊膜，对半切开，一半立即置于37℃水浴箱中的2ml平衡液中。另一半置于37℃水浴箱中的2ml平衡液 1500IU透明质酸酶中。分别放置5、1O、15min，然后立即放入4％戊二醛中固定，送透射电镜检查。结果：置于平衡液中5、10、15min的前囊膜，囊膜表面的晶状体上皮细胞之间的细胞连接完整;而置于透明质酸酶中5，10、15min的前囊膜，其表面的晶状体上皮细胞之间以及细胞与囊膜之间的缝隙随时间延长而增大。结论:透明质酸酶可以破坏晶状体上皮细胞之间以及细胞与囊膜之间的连接，从而使晶状体囊膜上的上皮细胞易于被清除。