香叶木素固体脂质纳米粒的制备及质量评价

目的 制备香叶木素固体脂质纳米粒并对其进行质量评价。方法 采用溶剂注入法制备香叶木素固体脂质纳米粒,用 Box-Benhnken效应面法优化处方,并通过包封率、微观形态、粒径分布和Zeta电位对香叶木素固体脂质纳米粒的质量进行评价。 结果 香叶木素固体脂质纳米粒最优处方组成：表面活性剂浓度3.39%,棕榈酸浓度0.116%,脂药质比为21:100,制备的香叶木素 固体脂质纳米粒外观澄清透明,带淡蓝色乳光;平均粒径为(91.73±3.18)nm(n=3),PDI为0.228,电位为(-11.46±0.74)mV(n=3);包 封率为95.13%,载药量为9.04%;透射电镜照片显示纳米粒大小均一,呈球形或类球形。 结论 该处方可用于香叶木素固体脂 质纳米粒的制备,工艺简单,稳定可行。     

Simultaneous determination of diosmin and diosmetin in human plasma by ion trap liquid chromatography–atmospheric pressure chemical ionization tandem mass spectrometry: Application to a clinical pharmacokinetic study

Diosmetin (3′,5,7-trihydroxy-4′-methoxyflavone) is the aglycone of the flavonoid glycoside diosmin (3′,5,7-trihydroxy-4′-methoxyflavone-7-ramnoglucoside). Diosmin is hydrolyzed by enzymes of intestinal micro flora before absorption of its aglycone diosmetin. A specific, sensitive, precise, accurate and robust HPLC assay for the simultaneous determination of diosmin and diosmetin in human plasma was developed and validated. Plasma samples were incubated with β-glucuronidase/sulphatase. The analytes were isolated by liquid–liquid extraction with tert-butyl methyl ether at pH 2, and separated on a C₁₈ reversed-phase column using a mixture of methanol/1% formic acid (58:42, v/v) at a flow rate of 0.5 ml/min. APCI in the positive ion mode and multiple reaction monitoring (MRM) method was employed. The selected transitions for diosmin, diosmetin and the internal standard (7-ethoxycoumarin) at m/z were: 609.0 → 463.0, 301.2 → 286.1 and 191, respectively.     

香叶木素通过线粒体凋亡途径对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨香叶木素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将MCF-7细胞分为对照组(0μmol·L^-1)和香叶木素5、10、20、30、40、50、60、70μmol·L^-1浓度组。采用CCK-8法及2,4二硝基苯肼法检测MCF-7细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)泄露量;采用罗丹明123(Rh123)荧光染色法、流式细胞术及荧光显微镜检测MCF-7细胞线粒体膜电位(MMP);DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)含量;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western Blot法检测p53、Bax、Caspase 3及Bcl-2蛋白的表达。结果与对照组比较,香叶木素在5~70μmol·L^-1范围内能够浓度依赖性地抑制MCF-7的细胞活力及促进LDH的泄露(P<0.01,P<0.001),选取浓度10、30、50μmol·L^-1进行后续实验;香叶木素10、30、50μmol·L^-1浓度组能显著降低MCF-7细胞线粒体膜电位(P<0.05,P<0.01,P<0.001),促进细胞内ROS的积累(P<0.01,P<0.001),提高细胞凋亡率(P<0.001),显著上调p53(30、50μmol·L^-1)、Bax及Caspase 3蛋白的表达(P<0.001),下调Bcl-2蛋白的表达(P<0.01,P<0.001)。结论香叶木素可能通过ROS及p53介导的线粒体凋亡途径抑制MCF-7细胞的增殖及促进其凋亡。     

Antitubercular constituents from Premna odorata Blanco

Ethnopharmacological relevance

Premna odorata Blanco (Lamiaceae) is a medicinal plant traditionally used in Albay Province, in southeastern Luzon, Philippines to treat tuberculosis. This study aimed to determine the antitubercular property of the crude extract and sub-extracts of the leaves, and to isolate the bioactive principles from the active fractions.

Materials and methods

Through extraction, solvent polarity-based fractionation and silica gel chromatography purification of the DCM sub-extract, compound mixtures from the bioactive fractions were isolated and screened for their in vitro antimycobacterial activity against Mycobacterium tuberculosis H₃₇Rv using the colorimetric Microplate Alamar Blue assay (MABA).

Results

The crude methanolic extract and sub-extracts showed poor inhibitory activity against Mycobacterium tuberculosis H₃₇Rv (MIC≥128 µg/mL). However, increased inhibitory potency was observed for fractions eluted from the DCM sub-extract (MIC=54 to 120 µg/mL). Further purification of the most active fraction (MIC=54 µg/mL) led to the isolation of a 1-heneicosyl formate (1), 4:1 mixture of β-sitosterol (2), stigmasterol (3) and diosmetin (4), which were identified through GC–MS analysis (with dereplication) and NMR experiments. The MIC of compound 1 was 8 µg/mL.

Conclusions

The results of this study provide scientific basis for the traditional use of Premna odorata as treatment for tuberculosis.     

香叶木素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞的机制研究

目的 研究香叶木素对人肝癌HepG2细胞的增殖、凋亡及周期阻滞的影响并揭示其分子机制.方法 MTT方法检测不同浓度香叶木素对肝癌HepG2的细胞活力的影响;流式细胞术检测不同浓度香叶木素处理对HepG2细胞周期阻滞及细胞凋亡的作用;Western blot检测香叶木素处理对细胞p53、Bcl-2、Bax、Cleaved-cas-pase3、Cleaved-caspase8、Cleaved-PARP、Bak、cdc2、cyclinB1、p21等细胞周期调节或细胞凋亡相关蛋白表达的调节.结果 香叶木素能显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并且诱导细胞凋亡(P<0.05);流式细胞术对细胞周期检测示:香叶木素处理HepG2细胞,使G0/G1期细胞比例显著降低,而G2/M期细胞比例显著升高(P<0.05).香叶木素可下调HepG2细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、cdc2、cyclinB1的蛋白表达,上调p53、p21、Bax、Bak,Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase8、Cleaved-PARP等促凋亡蛋白.结论 香叶木素在体外实验能通过激活p53/Bcl-2细胞凋亡通路抑制人肝癌HepG2细胞的增殖及促进细胞凋亡,同时通过上调p53、p21下调cdc2、cyclinB1诱导细胞G2/M周期阻滞.     

香叶木素对非酒精性脂肪肝病幼鼠的保护作用

目的　探索香叶木素对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病幼鼠的影响。 方法　高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病大鼠模型。酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测血脂及炎症因子水平。苏木素伊红（hematoxylin- eosin, HE）染色和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase- mediated dUTP nick labeling, TUNEL）染色分析肝脏组织病变及细胞凋亡。蛋白印记检测p-AMPKα1,AMPKα1,CPT-1, PPAR-α,SREBP-1c,FAS,p-P38,P38,p-AKT,AKT,p-AKT,AKT表达。 结果　与对照组相比,高脂饮食组大鼠TC, TG, LDL-c水平升高,HDL-c水平下降（P<0.01）。与高脂饮食组相比,香叶木素（10, 20, 50 mg/kg）组大鼠TC, TG, LDL-c水平降低,HDL-c水平上升（P<0.01）。香叶木素可缓解高脂饮食诱导的肝脏组织病变。高脂饮食组大鼠肝脏组织细胞凋亡高于对照组（P<0.01）。香叶木素（10, 20, 50 mg/kg）组大鼠肝脏组织细胞凋亡低于高脂饮食组（P<0.01）。高脂饮食组大鼠p-AMPKα1,CPT-1 和PPAR-α 表达低于对照组（P< 0.01）。与高脂饮食组相比,香叶木素（20, 50 mg/kg）组大鼠p-AMPKα1,CPT-1 和PPAR-α 表达升高（P< 0.01）。高脂饮食组大鼠SREBP-1c 和FAS表达高于对照组（P<0.01）。与高脂饮食组相比,香叶木素（10, 20, 50 mg/kg）组大鼠SREBP-1c 和FAS表达下降（P<0.01）。而且,高脂饮食组大鼠IL-6, IL-1β和TNF-α水平高于对照组（P<0.01）。与高脂饮食组相比,香叶木素（20, 50 mg/kg）组大鼠IL-6, IL-1β和TNF-α水平下降（P<0.01）。另外,香叶木素可逆转compound C对AMPK通路的抑制作用。 结论　香叶木素激活AMPK通路减轻高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病幼鼠脂质代谢异常,肝脏组织病变,细胞凋亡及炎症反应。     

咸虾花中的牻牛烷型倍半萜内酯

目的：分离鉴定斑鸠菊属植物咸虾花中的化学成分,为活性筛选提供样品。方法：90%乙醇提取,硅胶柱色谱分离,用IR,NMR,MS和X-衍射等方法确定结构。结果：分离到1个牻牛烷型倍半萜内酯,1个苯丙氨酸衍生物、1个生物碱和3个黄酮化合物,根据波谱数据和X-衍射分析分别鉴定为：incaspitolide D（1）,（S）-N-苯甲酰基苯基丙氨酸–（S）-2-苯甲酰氨基–3-苯基丙酯（（S）-N-benzoylalanine-（S）–2-benzamido-3-phenylpropyl ester,2）;吲哚-3-羧酸（indole-3-carboxylic acid,3）;香叶木素（diosmetin,4）,芹菜素（apigenin,5）和木犀草素（luteolin,6）。结论：化合物1-5是首次从咸虾花中得到,且首次通过二维NMR技术对化合物1的波谱数据进行了全归属,用X-单晶衍射确证1的立体构型。