血管内皮生长因子及炎性因子在油酸性犬急性呼吸窘迫综合征中的变化

目的探讨油酸性急性呼吸窘迫综合征（ARDS）beagle犬血浆及肺泡灌洗液血管内皮生长因子（VEGF）、可溶性细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）水平的改变。方法12只英国纯种beagle犬，静脉注射油酸0．15mL／kg，在注射油酸前、后1h，出现ARDS的典型表现时，抽血测VEGF、sICAM-1、IL-8、TNF—α，并对此时相作肺泡灌洗液VEGF、sICAM—1、IL-8、TNF-α的测定。结果beagle犬静脉注射油酸后1h血浆TNF—α升高（P〈0．05），血浆反肺泡灌洗液IL8、sICAM-1和VEGF在1h较油酸前没有明显变化（P〉0．05），beagle犬油酸型ARDS模型建立后血浆及肺泡灌洗液VECF、sICAM-1、IL-8、TNF—α均显著高于建模前（P〈0．05）。结论VEGF、sICAM-1、IL-8、TNF～α在beagle犬油酸型ARDS发生发展过程中可能均起重要作用，其水平的高低可能与ARDS严重程度及预后有关。     

大鼠胰腺炎相关性急性肺损伤模型的探讨

目的研究重组纳豆激酶(recombinant nattokinase,r-NK)大剂量重复给药对Beagle犬和小型猪凝血和纤溶系统的不同影响。方法用血球计数仪测定血小板相关参数;用血凝仪采取凝固法依次测定纤维蛋白原(Fib)含量、活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间 (TT);以ELISA法分别测定纤溶酶原(PLG)、纤溶酶原激活因子(t-PA)活性。结果药物对Beagle 犬和小型猪有相似的血管刺激作用。给药1周后Beagle犬血小板计数下降,PT明显延长,Fib含量明显降低,PLG活性升高。而药物对小型猪的各项参数均无明显影响。结论不同动物对相同剂量r-NK毒性反应存在较大的差异性,r-NK大剂量重复给药可破坏Beagle犬的凝血/纤溶系统平衡,而不影响小型猪凝血/纤溶系统功能。     

淫羊藿次苷对犬颌骨间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

目的 研究淫羊藿次苷Ⅱ（Icarisid Ⅱ,ICSII）对体外培养的比格犬颌骨间充质干细胞（alveolar bone-derived stem cells, AMSCs）增殖与成骨分化的影响。方法 取比格犬颌骨骨片,体外分离培养出dAMSCs,传代至第4代,做多向分化鉴定。以10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9 mol/L浓度的ICSII刺激dAMSCs后,取1、3、5、7 d的细胞,分别用CCK-8及碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测dAMSCs的增殖及ALP活性;用10^-6 mol/L的ICSII处理dAMSCs后14 d,作ALP染色,21 d时作茜素红染色,以判断ICSII对细胞分化及矿化能力的影响。在成骨诱导及10^-6 mol/L的ICSII药物诱导第4、8天后,用蛋白免疫印迹试验分析成骨相关蛋白OSX、Runx-2及OCN的表达量;在诱导第6天时,利用RT-PCR分析成骨相关基因OSX、bFGF、Runx-2及OCN的表达情况。采用SPSS 22.0软件包进行统计分析。结果 原代培养的dAMSCs贴壁生长,呈梭形,具备多向分化能力;ICSII在不同浓度下均可促进dAMSCs的增殖,其ALP活性亦有提高,且在实验浓度时可观察到钙结节形成。各成骨相关基因在ICSII诱导后表达量有不同程度增加,均高于完全培养基组。随着时间延长,加药组Runx-2蛋白表达量有所下降, OCN蛋白表达量逐渐增多,与对照组差距加大;OSX的蛋白表达量虽高于对照组,但无统计学差异。结论 ICSII可促进dAMSCs的增殖及成骨分化。     

全胃切除术后不同消化道重建方式对比格犬小肠动力影响的机制研究

目的研究全胃切除术后不同消化道重建术式对犬小肠动力的影响。方法将13只比格犬分为对照组（3只,仅行假手术）,全胃切除后采用功能性间置空肠进行消化道重建（FJI组,7只）和全胃切除后采用Roux-en-Y吻合进行消化道重建（RY组,3只）。手术后48h处死比格犬。处死前1h灌人活性炭,检测小肠转运率。取吻合口上下5cm的小肠,分别应用苏木精一伊红染色、免疫组织化学染色和干涉显微镜观察和检测小肠炎性反应,小肠组织卡哈尔细胞（ICC）分布及上皮凋亡情况。结果对照组和FJI组的小肠转运率分别为0．14±0．03和0．32±0．11,显著低于RY组（0．52±0．21,P〈0．05）。FJI组较RY组的小肠分布更多的ICC;FJI组的小肠浆膜炎性反应（包括出血、纤维渗出、溃疡）、中性粒细胞和巨噬细胞浸润以及小肠上皮细胞凋亡情况均不如RY组明显。结论减少手术创伤、保持小肠连续性的功能性间置空肠吻合消化道重建方式,具有更好的食物储存功能,有利于术后小肠动力的恢复。     

富氢水对γ射线照射Beagle犬淋巴细胞基因表达谱的影响

目的 利用基因芯片技术研究富氢水对γ射线照射后Beagle犬外周血淋巴细胞基因表达的影响.方法 将雄性Beagle犬随机分为对照组、单纯照射组和富氢水组(n=5),采用基因芯片技术对2.0 Gy60Coγ射线照射后6h各组Beagle犬外周血淋巴细胞的差异表达基因进行筛选,利用CGO (gene ontology)和KEGG(Kyoto encyclopedia of genes andgenomes)数据库对差异表达基因进行生物信息学分析,并应用实时荧光定量PCR技术对基因芯片结果进行验证.结果 单纯照射组筛选出差异表达2倍以上的基因4 730条,富氢水组筛选出差异表达2倍以上的基因4 493条,单纯照射组与富氢水组共同差异表达2倍以上的基因有1 606条;单纯照射组的差异表达基因对应的生物学过程、细胞组分及分子功能分别有10、9、3个功能簇,富氢水组差异表达基因对应的生物学过程、细胞组分及分子功能分别有15、3、4个功能簇.单纯照射组差异表达基因涉及19条生物学通路,富氢水组差异表达基因涉及24条生物学通路,单纯照射组与富氢水组的差异表达基因有5条共同生物学通路.选择2条差异表达基因进行mRNA水平的验证,PCR扩增结果与芯片结果具有良好的一致性.结论 富氢水对γ射线照射后Beagle犬外周血淋巴细胞基因表达的影响,可能涉及多种生物学过程、细胞组分、分子功能的改变及多条信号通路的激活.     

Beagle犬自体肾移植模型建立

目的完善Beagle犬自体肾移植模型构建方法,总结成功建立模型的经验。 方法选取18只成年Beagle犬随机分为假手术组和模型组,每组各9只。假手术组保留左肾,摘除右肾;模型组采用自体左肾异位肾移植,摘除右肾,实验操作者均为同一组医师。分布于术后第1、2、3、5、7、10、13、16、19、22、25和28天上午8点抽取静脉血,检测血清肌酐和尿素氮。采用两独立样本t检验比较假手术和模型组Beagle犬术后28天内血清肌酐和尿素氮。P<0.05为差异有统计学意义。 结果模型组1只实验犬因血清肌酐持续升高且无好转迹象,于术后第7天行安乐死,解剖发现肾动脉血栓形成,移植肾坏死。其余8只模型组实验犬血清肌酐和尿素氮术后第2天短暂升高后逐渐降低并保存稳定,术后第1、2、3、5、7、10、13、16和19天血清肌酐和尿素氮水平均高于假手术组,差异均有统计学意义(t＝-4.544、-5.083、-5.171、-4.946、-5.460、-5.345、-3.757、-3.918和-3.435; t＝-4.810、-8.119、-10.379、-12.789、-15.210、-9.983、-5.014、-4.599和-2.657,P均<0.05)。模型组观察28天后予安乐死处理,解剖可见移植肾大小约7 cm×4 cm×2 cm,质地适中,肾周有肠道包裹,肾动脉与髂内动脉无血栓形成,肾静脉与髂外静脉回流正常。重建血管血流情况良好,输尿管及膀胱吻合口处未见狭窄。假手术组解剖后未见任何异常,剩余左肾呈现正常解剖形态,肾动脉、肾静脉与输尿管形态结构、位置关系均表现为正常生理状态。模型组实验犬移植肾组织HE染色光镜下可见肾组织结构改变轻微,肾小球分布均匀一致,包曼氏囊未见异常改变;肾小管上皮细胞呈方形或柱状,胞浆丰富,管腔结构完整,未见明显损伤;肾盂内可见中性粒细胞及浆细胞浸润。 结论通过实验成功摸索出Beagle犬自体肾移植围手术期管理方法,可使该动物模型制作简便、稳定性高,具有可重复性。     

氚标记小牛胸腺DNA在大鼠和犬体内的药动学研究

目的:研究氚标记小牛胸腺DNA(3H-小牛胸腺DNA)在大鼠和Beagle犬体内的药动学特征。方法:采用氚水交换法制备3H-小牛胸腺DNA。取大鼠尾静脉注射高、中、低剂量(15、5、1.67 mg/kg,n=5)的3H-小牛胸腺DNA,中、高剂量组大鼠连续给药7d(第1、7天给予3H-小牛胸腺DNA,其余时间给予未标记小牛胸腺DNA),低剂量大鼠仅单次给药;另取犬前肢静脉注射高、中、低剂量(1.5、0.5、0.167 mg/kg,n=3)的3H-小牛胸腺DNA,中剂量犬连续给药7 d,低、高剂量犬仅单次给药。分别于第1、7天给药后0.033、0.25、1、2、4、6、8、12、24 h取血,分离血浆后加入闪烁液并使用液闪计数仪分析,以WinNonlin软件计算药动学参数。结果:高、中、低剂量3H-小牛胸腺DNA在大鼠体内的药动学参数分别为:单次给药的AUC0-24 h为(11 742±2 245)、(3 571±851)、(727±202)ng-Eq·h/g,t1/2为(21.4±5.08)、(13±6.0)、(6.8±1.76)h;重复给药高、中剂量的AUC0-24 h为(5 706±1 009)、(7 601±1 861)ng-Eq·h/g,t1/2为(16.0±10.13)、(9±2.7)h。高、中、低剂量3H-小牛胸腺DNA在犬体内的药动学参数分别为:单次给药的AUC0-24 h为(4 444±999)、(2 719±139)、(501±101)ng-Eq·h/g,t1/2为(17.6±7.57)、(14.0±1.76)、(16.4±2.39)h;重复给药中剂量的AUC0-24 h为(3 073±200)ng-Eq·h/g,t1/2为(20.6±6.62)h。结论:3H-小牛胸腺DNA在大鼠与Beagle犬体内单次给药和重复给药均可被快速消除。     

Cardiovascular Safety Pharmacology of Sibutramine

Sibutramine is an anorectic that has been banned since 2010 due to cardiovascular safety issues. However, counterfeit drugs or slimming products that include sibutramine are still available in the market. It has been reported that illegal sibutramine-contained pharmaceutical products induce cardiovascular crisis. However, the mechanism underlying sibutramine-induced cardiovascular adverse effect has not been fully evaluated yet. In this study, we performed cardiovascular safety pharmacology studies of sibutramine systemically using by hERG channel inhibition, action potential duration, and telemetry assays. Sibutramine inhibited hERG channel current of HEK293 cells with an IC₅₀ of 3.92 μM in patch clamp assay and increased the heart rate and blood pressure (76 Δbpm in heart rate and 51 ΔmmHg in blood pressure) in beagle dogs at a dose of 30 mg/kg (per oral), while it shortened action potential duration (at 10 μM and 30 μM, resulted in 15% and 29% decreases in APD₅₀, and 9% and 17% decreases in APD₉₀, respectively) in the Purkinje fibers of rabbits and had no effects on the QTc interval in beagle dogs. These results suggest that sibutramine has a considerable adverse effect on the cardiovascular system and may contribute to accurate drug safety regulation.     

HPLC-MS测定Beagle犬血浆中非洛地平的浓度

目的探讨测定Beagle犬血浆内微量非洛地平浓度的方法。方法采用反相高效液相色谱-质谱联用法检测。以尼莫地平为内标,Cosmosil ODS(150 mm×2.0 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-0.1%醋酸铵水溶液(85∶15),柱温40℃,流速0.2 m.lm in-1。结果非洛地平的线性范围为0.5~200.0 ng.m l-1(r2=0.9992),最低定量限为0.5 n.gm l-1,批内、批间RSD均小于15%,提取回收率大于90%。结论所建方法方便、快速,灵敏度高,精密度和重复性好,测定准确,适用于Beagle犬血浆中微量非洛地平的测定及生物利用度试验。     

Beagle犬药物诱导急性肾损伤模型的研究

目的 建立顺铂诱导的Beagle犬急性肾损伤模型,为开展肾毒性生物标志物研究奠定基础.方法 通过对Beagle犬单次静脉注射3、4和5 mg/kg顺铂,探讨采用顺铂建立急性肾小管损伤模型的给药方案.密切观察动物给药后临床症状,测定不同时间点的传统血清及尿液新型肾损伤生物标志物的动态变化,在试验结束时解剖动物并进行肾脏组...