黄芪甲苷对高血压脑出血模型大鼠神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

【摘要】 目的 探讨LncRNA ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法 选取人胃癌细胞株,随机分为胃癌组（GC组）、ANCR siRNA组（siRNA组）、LncRNA ANCR组（ANCR组）3组,同时选取正常胃粘膜上皮细胞设为正常胃细胞组。GC组：单纯胃癌细胞株;siRNA组：将ANCR siRNA转染到胃癌细胞中;ANCR组：将LncRNA ANCR转染到胃癌细胞中。通过TUNEL法、Transwell、cck 8法、Westernblot法、RT PCR法分析3组胃癌细胞增殖情况,PI3K、AKT蛋白表达量,细胞凋亡情况,细胞侵袭能力,PI3K、AKT mRNA的表达量的差异性来探究LncRNA ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖迁移的作用机制。结果 GC组LncRNA ANCR蛋白含量最高,正常胃细胞组LncRNA ANCR蛋白含量最低(P＜0.05);ANCR组胃癌细胞侵袭能力强,显微镜下细胞数量多,siRNA组胃癌细胞显微镜下细胞数量少,侵袭能力弱（P＜0.05）,GC组与siRNA组相比较胃癌细胞数量明显增多,整体侵袭能力明显增强（P＜0.05）;GC组和siRNA组、ANCR组OD值相比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;ANCR组胃癌细胞的增殖情况明显高于GC组,而GC组明显高于siRNA组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。经TUNEL染色,siRNA组胃癌细胞凋亡数量最多,ANCR组胃癌细胞凋亡较少(P＜005),ANCR组和GC组与siRNA组相比较凋亡率明显下降(P＜0.05)。蛋白免疫印迹法分析显示,siRNA组的PI3K、AKT蛋白含量及表达量最低,ANCR组的PI3K、AKT蛋白含量及表达量最高,3组相比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 LncRNA ANCR能激活PI3K及AKT蛋白的表达,升高细胞的侵袭和增殖能力,促进胃癌细胞生长,加快病情的发展。     

长链非编码RNA ANCR在肺癌中的表达和作用

目的探讨长链非编码RNA ANCR(LncRNA ANCR)在肺癌组织中的表达及对肺癌细胞增殖和凋亡的作用。方法收集50例肺癌患者的肺癌组织和癌旁组织,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织中LncRNA ANCR和叉头框蛋白O1(FOXO1)mRNA的表达水平。将A549细胞分为第1转染组(转染慢病毒阴性对照质粒)、第2转染组(转染pHRi-ANCR)、第3转染组(转染pHRi-sh-ANCR)、第4转染组(转染pHRi-FOXO1)和第5转染组(同时转染pHRi-sh-ANCR和pHRi-sh-FOXO1),未处理细胞为空白组。用RNA pull-down和RIP实验检测ANCR与FOXO1的相互作用。用RT-qPCR检测ANCR和FOXO1的表达水平,用EdU标记技术和流式细胞术分别检测A549细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。结果肺癌组织和癌旁组织中LncRNA ANCR的表达分别为2.78±1.36,1.33±0.51,FOXO1 mRNA的表达为1.28±0.57,3.03±0.72。第1,3,4,5转染组细胞增殖比例分别为(47.90±2.36)%,(27.93±2.37)%,(29.93±0.64)%,(74.27±4.06)%,阻滞于G0/G1期细胞比例分别为(37.43±1.96)%,(64.20±4.05)%,(65.47±1.86)%,(24.93±1.38)%,细胞凋亡比例分别为(8.93±0.53)%,(17.81±1.42)%,(16.18±1.07)%,(7.78±0.55)%。肺癌组织与癌旁组织相比、第3,4转染组与第1转染组相比、第5转染组与第3转染组相比,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论LncRNA ANCR在肺癌中表达升高并通过抑制FOXO1的表达调控肺癌细胞的细胞增殖和凋亡。     

lncRNA ANCR对直肠癌细胞增殖和凋亡能力的影响及机制

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）抗分化非编码RNA（ANCR）对结直肠癌（CRC）细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 收集50例CRC患者的癌组织和癌旁组织，通过RT-qPCR检测组织中ANCR和叉头框蛋白O1（FOXO1）的表达水平并进行Pearson相关性分析。利用RNA 拉下和RNA免疫沉淀实验（RIP）确认ANCR是否可与FOXO1相互作用。将经过慢病毒包装的ANCR和FOXO1慢病毒质粒转染至人CRC细胞系SW480细胞中，细胞分为6组：对照组（未转染），NC组（转染慢病毒质粒空载），ANCR组（转染 pHRi-ANCR），sh-ANCR组（转染pHRi-sh-ANCR），FOXO1组（pHRi-FOXO1），sh-ANCR + sh-FOXO1组（同时转染pHRi-sh-ANCR和pHRi-sh-FOXO1）。RT-qPCR检测过表达和抑制ANCR后FOXO1的表达水平，5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）标记技术和流式细胞术分别检测各组细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。Western blot检测B淋巴细胞瘤-2（BCL-2）、BCL2相关蛋白X（BAX）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）及人P27蛋白（P27）的表达情况。结果 与癌旁组织相比，CRC组织中ANCR表达明显增加，FOXO1表达明显减少（P<0.01），二者表达水平负相关（P<0.01）。ANCR能够结合并抑制FOXO1表达。与NC组相比，sh-ANCR组和FOXO1组细胞增殖数减少，细胞阻滞于G0/G1期，细胞凋亡数增多，BAX和P27增多，BCL-2和cyclin D1减少（P<0.05）。与sh-ANCR组相比，sh-ANCR + sh-FOXO1组上述指标得到逆转（P<0.05）。结论 lncRNA ANCR在CRC中表达升高并通过调控FOXO1的表达调控CRC细胞的细胞增殖和凋亡。