石蒜碱对裂殖酵母生长的抑制作用

 目的 研究石蒜碱对裂殖酵母生长周期的影响,分析石蒜碱的抗肿瘤机制,推测用裂殖酵母作为模型筛选抗肿瘤药物的可行性。方法 在不同浓度石蒜碱条件下培养裂殖酵母,测量生长曲线;流式细胞术检测细胞周期分布;光学显微镜观察形态,DAPI及Calcofluor染色观察细胞核、细胞间隔变化;real-time PCR检测细胞周期相关基因的表达。结果 在试验条件下,石蒜碱显著抑制裂殖酵母生长,并呈现时间浓度依赖性,作用20.5 h后IC50值为212 μmol/L;酵母细胞变长、细胞核及细胞间隔增多,G2/M期细胞比例增加,部分细胞周期相关基因在mRNA水平有所变化。结论 石蒜碱对裂殖酵母生长具有明显抑制作用,可引起细胞表型变化,影响部分细胞周期相关基因的表达。     

细胞蛋白依赖性激酶10与病理性瘢痕

1970年,Paul Nurse等以裂殖酵母为实验材料,发现了许多细胞周期调控基因,如:裂殖酵母cdc2等。CDC2与细胞周期蛋白结合才具有激酶的活性,称为细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK),因此CDC2又被称为     

蜂毒肽融合蛋白在裂殖酵母中的表达研究

将抗菌肽之一的蜂毒溶血肽(Melittin)基因序列定向克隆到表达载体pESP-2中,构建GST-Melittin融合蛋白。利用载体上严格受硫胺素浓度调控的启动子Pnmtl,采用先扩大培养后诱导表达的两步培养法,实现了融合蛋白在裂殖酵母Schizosaccharomyces Pombe中的异源表达。然后通过GST亲和层析法一步纯化得到融合肽。研究中1L培养液收集到约5g鲜活酵母菌,纯化得到400μg融合蛋白,融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot验证,表明蜂毒肽融合蛋白已在裂殖酵母中高效的表达,并可以通过GST亲和层析法得到有效纯化。初步的活性实验证明所获得Melittin蛋白对Escherichia Coli DH5α菌种有良好的抑菌效果。     

直接发酵木糖为酒精的新酵母基因工程菌的选育

裂殖酵母,Schizosacchatomyces porebe不能发酵木糖,也不能用它来增殖细胞。但是,这种酵母能发酵木酮糖为酒精,产率和转化率都很高。这表明,它缺少异构酶基因,如果将其它微生物的这种基因克隆到酵母中去,它就能直接发酵木糖。本文介绍了Schizosaceh.porebe的五碳糖磷酸代谢途径,这种代谢途径使得它成为用于这一目的的理想菌株。含有异构酶基因的DNA片段来自Clark和Carbon的大肠杆菌基因库,它的大小为2.4kb,PstⅠ-抗性。将这个基因克隆到上述酵母中去,得到的酵母基因工程菌株不仅能利用木糖作为唯一碳源和能源,还能发酵木糖为酒精,它具有在工业上应用的潜力     

重组死亡素裂殖酵母工程菌发酵的研究

在裂殖酵母基本培养基的基础上，通过正交设计，优化了培养基6个组分；优化后的培养基，摇瓶发酵，目的蛋白产量在26～51mg／L之间，发酵罐的批次发酵，产量在51～102mg／L之间。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对裂殖酵母核基因SRK1和线粒体基因转录的影响

 目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors)丙戊酸（valproic acid,VPA）对裂殖酵母体内应激激酶核基因SRK1和线粒体基因转录的影响。方法 在裂殖酵母972细胞中加入梯度稀释的VPA测定细胞生长曲线并计算半数抑菌浓度（IC50）。检测分别加入1和5 μmol/L VPA处理6 h后,核基因SRK1的转录水平;检测同等处理条件下裂殖酵母体内线粒体基因的转录水平。结果 VPA对972细胞的IC50为7.57 μmol/L。1 μmol/L VPA处理的细胞中核基因SRK1转录水平上调5.5倍,外加5 μmol/L VPA处理的细胞中SRK1基因转录水平上调4.2倍;经1 μmol/L VPA处理后,线粒体基因COB,SPMIT2,SPMIT3上调倍数分别为3、4.59和6.31倍,其他基因变化不大,经5 μmol/L VPA处理后,线粒体基因转录水平全部上调,上调范围2.63～7.02倍。结论 在裂殖酵母体内,VPA能通过抑制细胞内去乙酰化酶而调节细胞核基因和线粒体基因的转录水平,加入IC50水平的VPA引起与应激相关核基因SRK1的转录水平显著上升,且线粒体内大部分基因转录水平也随之升高,说明细胞受到刺激后核基因和线粒体基因均能通过调节转录水平来阻挡外界刺激对细胞的影响。     

La(Sal)_2(Qu)对重组Fas基因酵母促凋亡作用

目的观察氯化镧水杨酸8-羟基喹啉三元稀土配合物[La(C7H5O3)2.(C9H6NO)],对重组Fas基因酵母的促凋亡作用。方法抽提Jurkat细胞RNA;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)制备Jurkat细胞的cDNA;PCR扩增人Fas基因;将人Fas基因克隆到pREP3X-HA质粒中构建pREP3X-HA-Fas穿梭载体,电转化穿梭载体到野生型粟酒裂殖酵母细胞中;应用蛋白印迹法(Western blotting)鉴定蛋白表达产物;应用La(Sal)2(Qu)诱导重组Fas酵母产生凋亡应答。结果经原位末端标记(TUNEL)法显微计数检测发现,对照组细胞膜泡形成、细胞核碎裂和细胞核溶解的细胞各占计数细胞总数的2.80%、3.74%和2.80%,而处理组分别为26.67%、22.86%和13.33%,差异有统计学意义(P0.01);流式细胞术检测发现,对照组细胞凋亡检出率为1.24%,而处理组为50.17%,差异有统计学意义(P0.01)。结论 La(Sal)2(Qu)可能通过Fas诱导酵母细胞凋亡。     

裂殖酵母复制检查点调控

细胞在繁殖时可能遇到各种各样的干扰 ,因此细胞需要用检查点时时监控基因组。当复制干扰发生时 ,复制检查点被激活并保证 M期在 S期完成后进行。检查点通过感受器 ,信号转导蛋白 ,效应器之间的一系列信号传导级联反应 ,作用于其最终调控对象 ,并排除“故障”。由于裂殖酵母同哺乳动物的检查点结构最为相似 ,文章将详细论述裂殖酵母复制检查点调控过程及其与人类检查点的相似之处。     

死亡素在裂殖酵母中的表达

目的：在裂殖酵母中表达死亡素。方法：通过PCR方法人工合成死亡素基因，构建重组表达载体pRHZ-41-Tha，转化到裂殖酵母中，杯碟法检验表达产物活性。结果：重组载体构建成功并且转化到酵母中，外源基因在转化子中得到了表达，表达产物具有抑茵活性。结论：本研究成功构建了具有抑茵活性的表达产物，为进一步将死亡素研制成添加剂和药物奠定了一定的基础。     

死亡素突变体TH1在裂殖酵母中的分泌表达

通过PCR方法人工合成带有K28信号肽的死亡素突变体基因，构建了重组表达载体pRHZ-41k28Th1，转化到裂殖酵母中进行表达，发酵液中检测到与TH1理论分子量一致的多肽分子，微量稀释法检验表达产物具有抑菌活性，并计算了粗产物对4种供试菌的最低抑菌浓度。