细胞生物学学习辅导（第五章、第六章）

细胞周期各时期的结构特点及发生事件。细胞分裂的实质是加倍的遗传物质平均地分配到两个子细胞中。有丝分裂与减数分裂的区别。     

米非司酮对人子宫内膜癌HHUA细胞ER、PR及亚型体外作用的研究

目的　探讨抗孕激素米非司酮体外对人子宫内膜癌HHU A细胞ER、PR及亚型的影响及其与抗肿瘤作用的相关性。方法　体外培养子宫内膜癌HHU A细胞,不同浓度米非司酮处理细胞4 8小时,采用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)半定量法检测PR- A m RNA,PR- B m RNA的表达水平;应用免疫组化法检测HHU A细胞ER、PR受体蛋白的表达变化。结果　米非司酮(5 μmol/ L)显著地降低HHU A细胞PR- B m RNA和PR受体蛋白的表达水平(P<0 .0 5 ) ,但增加米非司酮剂量并不能增强其降调作用。抗孕激素米非司酮对HHU A细胞PR- Am RNA和ER受体蛋白表达无明显影响(P>0 .0 5 )。结论　抗孕激素米非司酮可明显降调子宫内膜癌HHU A细胞PR- B m RNA水平和PR蛋白的表达,并与抑制癌细胞增殖密切相关     

干细胞与神经元、神经胶质细胞的分化

神经细胞与神经胶质细胞的分化是发育神经生物学中颇具挑战性问题，目前仍有许多问题有待探索与解决。对这一领域的研究作一回顾与总结，有助该课题的深入研究。     

基因Cdca2敲除对小鼠精子发生和生育力无明显影响

目的 探究睾丸高表达细胞分裂周期相关蛋白2基因(Cdca2)在小鼠精子发生和生育力中的生理功能。方法 通过Q-PCR和Western blot检测Cdca2在小鼠不同组织部位的表达情况;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre-loxP介导的重组系统构建Cdca2组织特异性敲除的小鼠品系;通过苏木精-伊红(HE)染色和形态学分析了解小鼠CDCA2缺失对精子发生的各个阶段生精细胞形态的影响;通过精子全自动检测分析系统检测小鼠CDCA2缺失对精子活率及运动参数的影响;通过生育力测试实验检测CDCA2缺失对雄性小鼠生育能力的影响。结果 Cdca2是一个睾丸高表达的基因;利用CRISPR/Cas9技术和生殖系统特异性Cre的工具鼠,成功获得了Cdca2生殖细胞特异性敲除的小鼠;小鼠CDCA2缺失对精子发生中各阶段生精细胞、精子运动参数及雄性生育能力的影响改变无统计学意义。结论 基因Cdca2对于小鼠精子发生和雄性生育力的维持可能是非必需的。     

锌促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化

目的　研究锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法　从大鼠颅骨分离出成骨细胞,于 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 培养基中进行传代培养。实验设置４ 个组,分别为对照组和１０ μｍｏｌ／ Ｌ、２５ μｍｏｌ／ Ｌ及５０ μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ ３ 个剂量组,采用３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 参入法确定成骨细胞在不同时点 Ｄ Ｎ Ａ 的合成状况,应用流式细胞仪技术分析细胞周期、３ Ｈ脯氨酸参入法测定胶原蛋白的合成;采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。结果　３ 个锌剂量组细胞３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入量在各个时点均明显高于对照组;２５ μｍｏｌ／ Ｌ 及５０ μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 可以促进成骨细胞从 Ｇ０／ Ｇ１ 期向 Ｓ期转化。３ 个锌剂量组胶原蛋白、骨钙素的合成量、碱性磷酸酶活性均高于对照组。结论　锌能够促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化。     

多肿瘤组织芯片在评价肿瘤细胞增殖与凋亡状态研究中的作用

目的 :研究多种常见肿瘤组织芯片在观察癌细胞增殖和凋亡中的作用。方法 :在病理档案材料中选取 10种常见恶性肿瘤及其癌旁或正常组织的石蜡包埋标本 ,HE染色切片定位穿刺部位 ,每一蜡块穿取直径 0 6mm大小组织柱 ,排布成 196点列阵的芯片 ;用ki 67、p5 3、rasp2 1、bcl 2和bax单抗SP法进行免疫组化染色 ,对各切片阳性细胞进行计数观察。结果 :组织芯片经染色后结构完整 ,在肿瘤组织中ki 67、p5 3和rasp2 1标记的阳性细胞比癌旁和正常组织明显增高 ;而大多数肿瘤中bcl 2和bax表达呈负相关 ,即bcl 2阴性或低表达者 ,则bax呈不同程度阳性表达 ,反之则相反。结论 :组织芯片技术可以同时用于评价多种不同类型肿瘤样本的增殖活性和凋亡状态 ,为临床预后判断提供资料     

中药复方搏癌丸对人肝癌HepG_2细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究中药复方搏癌丸对人肝癌HepG_2细胞增殖及凋亡的诱导作用。方法:采用细胞药理学和血清药理学方法,对比观察(阴性无药血清对照、阳性药5-氟尿嘧啶血清对照)搏癌丸诱导HepG_2细胞的增殖及凋亡。(1)MTT法观察4个搏癌丸药物血清浓度对HepG_2细胞增殖的抑制作用,从中筛选出搏癌丸的有效药物浓度。(2)电镜及流式细胞仪观察HepG_2细胞凋亡。结果:(1)10%、5%、2.5％搏癌丸药物血清3个有效浓度均对HepG_2细胞增殖有显著抑制作用(P<0.01),增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性(P<0.01)。(2)10％搏癌丸药物血清作用HepG_2细胞48小时后,HepG_2细胞核明显缩小,浆比减少,核仁减少、浓缩甚至消失,核内异染色质明显增多,核膜完整,可见早、中、晚期细胞凋亡,出现凋亡小体。(3)10％搏癌丸药物血清作用HepG_2细胞48小时后,流式细胞仪检测的细胞凋亡率为25.34％,均显著高于相应无药血清对照组的3.54％(P<0.05)。结论:搏癌丸能在一定程度上抑制HepG_2细胞的增殖和诱导HepG_2细胞凋亡。     

孕酮对离体胎鼠头盖骨成骨细胞增殖与分化的影响

目的：从细胞、基因水平探讨孕酮对成骨细胞增殖及分化的影响。方法：胎鼠头盖骨成骨细胞在体外经不同浓度（１０－９ｍｏｌ／Ｌ～１０－６ｍｏｌ／Ｌ）的孕酮作用后，对其细胞增殖、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性、骨钙素ｍＲＮＡ表达、骨钙素分泌及骨小结形成进行检测分析。结果：（１）孕酮对成骨细胞增殖无明显促进作用；（２）孕酮增加细胞ＡＬＰ活性；（３）孕酮提高骨钙素ｍＲＮＡ表达及骨钙素的分泌，孕酮对骨钙素基因表达的刺激作用呈剂量依赖性；（４）孕酮增加骨小结形成的数量及面积。结论：孕酮对离体胎鼠头盖骨成骨细胞的分化具有多重促进效果，但对细胞的增殖无影响。     

生物节律相关基因 Cry1与肝癌的相关性探讨

目的研究生物节律相关基因Cry1与肝癌发生发展的相关性.方法逆转录PCR、Northern blot和免疫组织化学方法检测Cry1在各种肿瘤细胞系、人正常组织及人肝癌与配对的癌旁组织中的表达.构建Cry1重组的真核表达质粒并转染肝癌细胞SMMC-7721.生长曲线和软琼脂克隆形成试验检测Cry1过表达的SMMC-7721细胞的体外增殖速度.逆转录PCR检测与Cry1相互作用的生物节律基因在Cry1过表达的SMMC-7721中的表达.结果Cry1在人各种正常组织中均有不同程度的表达.Cry1在人肝癌癌旁组织中的表达水平高于癌组织中的表达.过表达Cry1对SMMC-7721细胞的体外增殖没有明显影响.结论生物节律相关基因Cry1与肝癌发生发展可能有一定的相关性.