端粒酶核酶hTERT 5''RZ时辰治疗人肝癌裸鼠移植瘤

我们在既往的研究中 ,为探讨肝癌裸鼠移植瘤细胞DNA合成与端粒酶表达的生物节律 ,在时辰同步化裸鼠中构建了肝癌细胞SMMC 772 1裸鼠移植瘤。继续在程控光照条件下饲养 ,于光照后 3,6 ,9,1 2 ,1 5 ,1 8,2 1小时取样 ,用流式细胞仪测定各时期细胞DNA含量 ,细胞周期分布及端粒酶活性水平。结果 ,肝癌裸鼠移植瘤细胞DNA合成随昼夜节律变化 ,且伴随端粒酶活性的同步节律变化 ,均在光照后 2 1小时达高峰 ,光照后 9小时处于低谷 ;节律周期呈余弦分布。表明 ,肝癌裸鼠移植瘤的生长与端粒酶活性表达在静止相达高峰 ,为制定肿瘤时辰化疗方案提…     

实验试剂与仪器

RNA荧光定量标准品制备新方法的探讨；不同激活型缓冲体系对碱性磷酸酶活性测定的影响；HIV1＋2型抗体化学发光免疫分析试剂盒的研制；抗ENA4种试剂盒对风湿病诊断性能的比较研究；脑脊液凝胶电泳试剂盒研制初擦[编者按]     

衰老对大鼠阴茎组织NO-cGMP通路及端粒酶活性的影响研究

目的探讨衰老对大鼠阴茎组织结构、NO(nitric oxide)-cGMP(cvclic Guanosine Monophosphate)通路及端粒酶活性的影响作用。方法本课题以不同月龄大鼠阴茎组织及培养的平滑肌细胞为研究对象,检测不同月龄大鼠阴茎组织中NO量、NOS(Nitric Oxide Synthase)活性、cGMP量、端粒酶活性及海绵体结构的变化,并比较大鼠、人阴茎组织及大鼠原代海绵体平滑肌细胞的端粒酶活性。结果(1)大鼠阴茎组织中NO量、NOS活性均先升高后降低,各月龄组间有显著差异。阴茎组织cGMP含量逐渐降低,各月龄组间差别显著；(2)随龄增加,平滑肌纤维逐渐减少,胶原纤维增多,粗大成团,窦状隙变少、变窄：(3)大鼠阴茎组织端粒酶活性以2月龄活性最高,随龄增加逐渐下降。人阴茎组织中无端粒酶活性。结论(1)衰老对大鼠阴茎组织结构、NO．cGMP通路及端粒酶活性有显著影响,提示衰老与ED关系密切；(2)大鼠阴茎组织有端粒酶活性,可作为研究细胞衰老与ED关系有关端粒酶的模型。     

人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA，(human telomeraseRNA，hTR)的cDNA探针，分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法(TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。18例活检胃癌组织及45例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为l00％，相应TRAP分析的阳性率分别为88．89％、86．67％，低于RNA斑点杂交(P＜0．05)。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA，具有高度的敏感性和特异性，弥补了TRAP分析敏感性不足的缺点。     

遗传不稳定性在细胞衰老中的作用

遗传不稳定性是一个概括性术语。它是许多物种细胞衰老的重要成分[1,2 ] 。它导致去调节基因表达 ,因而导致细胞生理年龄障碍 ,细胞生长停止和最终导致细胞死亡或它的母细胞转化。基因组依赖年龄不稳定性在细胞的生活中可以具有积极的意义。同时控制障碍可以导致肿瘤形成、突变积累或衰老表现的病理学。它可能的原因有 :ＤＮＡ双链断裂 ,端粒缩短 ,ＤＮＡ修复功能效率降低和易位遗传成分的激活。1　遗传不稳定性和端粒变短根据已知的假说 ,由于从每一个新的细胞分裂周期起重复ＤＮＡ序列丢失 ,染色体端粒末端变短可以作为细胞衰老开始的信号…     

氟乙酰胺中毒患儿心肌酶活性变化及其临床意义

为探讨氟乙酰胺中毒患儿的心肌酶活性变化 ,我们对 37例氟乙酰胺中毒患儿进行了血清心肌酶活性测定 ,现总结报告如下。1　对象及方法1.1　对象 :37例患儿均为 1996年 3月～ 1999年12月在我科住院的氟乙酰胺中毒患儿 ,其中男性2 3例 ,女性 14例 ;年龄 1～ 3岁 13例 ,～ 7岁 15例 ,～ 12岁 9例。所有患儿均有明确误服氟乙酰胺灭鼠药的病史 ,自发病至入院时间 1～ 8ｈ。对照组为门诊健康查体儿童 ,共 31例 ,男性 2 0例 ,女性 11例 ;年龄 1～ 3岁 11例 ,～ 7岁 13例 ,～ 12岁 7例。1.2　方法 :氟乙酰胺中毒患儿于入院当日及此后6日每日晨抽空腹…     

用分子探针杂交法观测多次献血对造血系统的影响

目的建立非同位素标记的探针杂交测定外周血白细胞端粒DNA长度的方法,借此探讨无偿献血对献血者造血系统的影响。方法酚/氯仿提取基因组DNA,限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳,非同位素标记的探针Southern印迹杂交,化学发光X线片曝光显示杂交谱带,积分光密度扫描计算TRF值。结果所测样本获得了较好的低背景杂交谱带,测得35～40岁无偿献血组TRF值平均为11.73kb,相应无献血史对照组平均为11.78kb。结论建立了非同位素标记的探针检测端粒DNA的方法,用上述方法初步显示了固定的长期无偿献血并未对献血者的造血系统产生负面影响。     

慢性肾功能衰竭升降失衡证红细胞膜Na~+、K~+-ATP酶的研究

对30例慢性肾衰升降失衡证患者按升降不及、升降反常分两组,用保元汤加大黄治疗,总有效率63.3%。同时测定红细胞膜 Na~ 、K~ -ATP 酶活性(μM/mg 蛋白·小时)和哇巴因抑制率(%)与30名健康人比较,两组酶活性分别降低71%、76%;抑制率分别降低31%、33%。其中16例治疗后酶活性均值分别由治疗前85.1、75.3,提高到219.9、185.9;抑制率均值分别由治疗前62.7、57.2,提高到77.2、70.2。临床症状好转,肌酐、尿素氮下降。表明细胞膜运转障碍与升降失衡证存在联系,中药对酶活性有调节作用。     

二羧酸转运蛋白对细胞端粒长度的影响

目的：观察二羧酸转运蛋白对衰老细胞和不老细胞系端粒长度的影响。 方法：实验于2004-06／2005-07在南京大学医学院附属鼓楼医院中心实验室完成。在已构建的反转录病毒载体基础上，使用含有钠依赖二羧酸转运蛋白基因的反转录病毒液将二羧酸转运蛋白基因导入人胚肺二倍体成纤维细胞（WI-38）和肾小管上皮细胞中，并获得表达，①观察WI-38细胞传代数。②WI-38细胞端粒长度，用Southern blot检测端粒末端限制性片段的长度。③人肾小管上皮细胞端粒长度测定，Soutllern Rblot检测端粒末端限制性片段的长度。 结果：钠依赖二羧酸转运蛋白基因导入后，①WI-38细胞形态呈衰老细胞样变化，提前8-12代衰老。②WI-38／钠依赖二羧酸转运蛋白细胞（37代）端粒长度较中年细胞（37代）缩短[（6.08&;#177;0．10），（723&;#177;0．05）kb，P〈0．051。③人肾小管上皮细胞／钠依赖二羧酸转运蛋白细胞端粒平均末端限制性片段长度较人肾小管上皮细胞／neo细胞端粒平均末端限制性片段长度缩短[（4．85&;#177;0．18），（6．32&;#177;0．12）kb，P〈0．05]。 结论：钠依赖二羧酸转运蛋白可促进衰老细胞和不老细胞系端粒长度的缩短。