杂交瘤细胞株功能性与非功能性Vk基因结构分析

本研究利用逆转录ＰＣＲ技术和家族特异性引物，先后从９株分泌不同特异性单抗杂交瘤细胞株中扩增出轻，重链可变区基因，并经克隆和序列测定。其中利用轻链引物从分泌抗转铁蛋白受体单抗的杂交瘤细胞株中扩增出了无功能的ＶＫ序列。经分析和ＧｅｎＢａｎｋ数据库比较，该序列虽与ＢＡＬＢ／ｃＶＫ２１－Ｅ细胞株分泌的抗体轻链有９８％同源性，但是在Ｖ／Ｊ连接区内有４个碱基对缺失，导致后续阅读框架移位，因而出现终止密码子而致     

人源化抗体构建过程中假链的产生及应对策略

目的在人源化抗体构建过程中，采用方便、快捷的分子克隆手段。消除SP2／0内源性畸形轻链转录本以获得正确的轻链cDNA。方法在mRNA抽提时，不用常规的TRIZOL法抽提总RNA，而采用经腹腔培养。生长状态良好的杂交瘤细胞。用QIAGEN公司Oligotex Direct mRNA Purification Kit，将polyA^＋的mRNA富集。可有效减少畸变转录本的含量，提高功能型mRNA的丰度。利用polyA^＋RNA。采用RT-PCR，我们成功地克隆到了轻链可变区序列，序列分析证实读码框完全正确，属于轻链可变区基因。结果NCBI数据库BLAST显示。克隆的基因序列符合小鼠lg可变区特征，具有正确的CDR和FR功能区及VJ连接区。结论采用polyA^＋ mRNA富集技术，成功克隆获得阻断型抗人CD154 mAb（4F1）单克隆抗体的轻链、重链可变区基因，成功地消除了SP2／0内源性畸形转录本对免疫球蛋白功能性轻链基因的影响。     

临床常用分子靶向药物

单克隆抗体 1975年 Koehler等采用细胞融合技术，使小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，后者产生的抗体，称为单克隆抗体（monoclonal antilxxly ,MoAb），简称单抗，由于单抗具有性质纯、效价高，特异性强，少或无血清交叉反应等特点 ，已被广泛应用于肿瘤的治疗。     

分泌IL－5T细胞杂交瘤的培养及IL－5的分离纯化

高浓度ＩＬ－５可以从Ｔ细胞杂交瘤培养的上清液中获得。本文介绍分泌ＩＬ－５的Ｔ细胞杂交瘤的培养及其上清液中分高纯化ＩＬ－５的方法，提纯了高浓度的ＩＬ－５。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响 I.乳酸的作用

研究了无血清批培养中乳酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响，当乳酸浓度低于5．3mmol/L时，乳酸对细胞生长和代谢无明显影响，当乳酸浓度在10mmol/L-25mmol/L时，对杂交瘤细胞的生长代谢有弱抑制，当乳酸浓度高于34mmol/L时，对细胞生长代谢有较明显的抑制。     

B细胞杂交瘤技术制备抗同种特异T细胞膜抗原单克隆抗体

目的：为进一步分析ＴＣＶ免疫诱导同种免疫反应低下的机制。方法：采用Ｂ细胞杂交瘤技术获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果：两次的细胞融合中共得到１２株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞，为分析抗体在ＴＣＶ中的作用提供条件。结论：ＴＣＶ免疫可引起抗ＴＣＶ细胞抗体的产生，以同系免疫的方法得到的活化Ｂ细胞用于Ｂ细胞杂交生产单抗是可行的。