喹喔啉类药物对V_(79)细胞hgprt基因位点的突变效应

喹喔啉类药物具有抗菌促生长的作用,曾广泛应用于畜牧生产,部分品种因临床毒副作用大已被禁止或限制使用。有关本类化合物的毒性研究已开展很多,但本类的遗传毒性一直是国际上悬而未决的疑难问题,有待进一步的考察。本研究采用V79细胞基因突变试验检测五种常用的喹喔啉类药物乙酰甲喹、卡巴氧、喹乙醇、喹烯酮和喹赛多的遗传毒性,预测其对哺乳动物细胞的遗传毒性。V79细胞培养24h后,加入不同浓度的喹喔啉类药物,使乙酰甲喹、卡巴氧、喹乙醇和喹烯酮的终浓度为1.25、2.5、5和10μg/ml,喹赛多的终浓度为0.625、1.25、2.5和5μg/ml,同时设立加与不加S9代谢活化系统,受试物与细胞作用4h后,采用克隆形成法考察五种喹喔啉类药物对V79细胞的慢性毒性作用,并在此基础上观察其对V79细胞hgprt基因位点突变频率的影响。结果表明,不论加与不加S9代谢活化系统,乙酰甲喹与卡巴氧≥2.5μg/ml和喹乙醇≥5μg/ml的剂量范围均能引起V79细胞hgprt基因突变率显著增加,呈现剂量反应关系,为阳性反应;喹烯酮仅在10μg/ml的剂量下与溶剂对照组差异有统计学意义,但无剂量反应关系;喹赛多在0.625~5μg/ml的剂量范围内,未发现其对V79细胞hgprt基因的突变率有显著增加,为阴性反应。综上所述,在本试验条件下,乙酰甲喹、卡巴氧和喹乙醇能引起V79细胞hgprt基因位点突变,而喹烯酮和喹赛多对V79细胞无致突变作用。     

喹乙醇对豚鼠生长促进作用的研究

用喹乙醇作为饲料添加剂对豚鼠进行了５０ｄ的喂养研究。结果表明，喹乙醇对豚鼠的生长具有极显著的促进作用（Ｐ＜０．０１），喹乙醇含量不同，对豚鼠生长的促进作用有明显差异；含量为５０μｇ／ｇ时，豚鼠增重最为明显，说明该浓度是此添加剂的最佳使用浓度。     

喹乙醇诱导HepG2细胞线粒体的氧化损伤

背景与目的:探讨喹乙醇(olaquindox)对人肝癌细胞(HepG2)线粒体的氧化损伤作用. 材料与方法:用0、200、400和800μg/ml喹乙醇处理HepG2细胞24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法确定喹乙醇对HepG2细胞的IC50分子探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFDA)和双氢溴乙啶(dihydroethidium,DHE)检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;罗丹明123检测线粒体膜电位(△Ψm)变化;钙离子荧光探针Fluo-3AM检测胞浆游离钙离子浓度并用定量PCR方法检测线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的损伤情况. 结果:随着喹乙醇浓度的增加,HepG2细胞的存活率逐渐降低(P均<0.01),呈时间-剂量-反应关系;不同浓度的喹乙醇作用细胞24 h后,随着喹乙醇浓度的增加细胞内ROS和胞浆游离钙离子浓度显著增加(P<0.05或P<0.01),△Ψm明显降低且呈剂量-反应关系;喹乙醇能引起HepG2细胞mtDNA和nDNA损伤(P均<0.01),且mtDNA损伤程度显著高于nDNA,并呈剂量-反应关系. 结论: 喹乙醇在体外实验中,可诱导HepG2细胞线粒体氧化性损伤.     

动物喹乙醇中毒浅析

喹乙醇(Olaquindox)属喹哑琳类药物,是价廉、有很好抗菌促生长作用的饲料添加剂,在养殖业中得到了广泛的应用。但是喹乙醇很容易引起动物中毒,鸡、鸭、鱼对喹乙醇均较敏感。因此我们要重视喹乙醇的蓄积毒性作用及其残留肉食中对人体健康的危害。有关喹乙醇的致突变性问题仍须深人研究。     

2012年鞍山市水产品中喹乙醇代谢物残留量监测分析

目的开展水产品中喹乙醇代谢物残留量的监测分析,保障水产品的食品安全。方法随机在鞍山市本地农贸市场河鱼批发部采集淡水鱼类,采用《水产品中喹乙醇代谢物残留量的测定高效液相色谱法》（农业部1077号公告-5-2008）进行喹乙醇代谢物残留量检测。结果 MQCA在0.005～1.000μg/ml范围内,线性关系良好,r=0.999 3;高、中、低3种浓度的加标样品平均回收率分别为76.5%、85.1%、95.4%;相对标准偏差（RSD）分别为9.40%、5.66%、4.31%;本方法最低检出限为4μg/kg。对黑鱼、鲢鱼、草鱼、泥鳅、眼眶鱼、鳝鱼、嘎鱼、鲫鱼、鲤鱼、武昌鱼、鲶鱼等水产品进行喹乙醇代谢物MQCA的含量测定,在所检样品中均未检出喹乙醇代谢物。结论有效落实食品安全风险监测工作计划,为卫生监督和防控提供科学依据。     

HPLC-PDAD/MS法检测中兽药散剂中违规添加2种喹喔啉二氧化物的研究

目的:建立检测止痢散等7种中兽药散剂中违规添加喹乙醇、乙酰甲喹的HPLC-PDAD法,并用MS进行确证。方法:根据处方和临床治疗量配制阴性中兽药散剂和阳性供试品;用90%乙腈提取,HPLC-PDAD法进行检测,并用MS进行确证。结果:检出限为0.05 g.kg-1,喹乙醇和乙酰甲喹在止痢散中的平均回收率分别为93.69%和101.22%。结论:该方法快速、简便、准确,可用于中兽药散剂中违规添加喹乙醇、乙酰甲喹的检测。     

p38 MAPK在喹乙醇诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的:研究p38 MAPK信号通路在喹乙醇诱导的HepG2细胞凋亡中的作用。方法:分别用不同浓度(0、200、400、800μg/ml)的喹乙醇染毒HepG2细胞24 h和800μg/ml喹乙醇染毒HepG2细胞不同时间(0、0.5、1、2、4、6、12、24 h)后,采用Westernblot法检测细胞内磷酸化p38蛋白和p38总蛋白的表达情况,以p38 MAPK磷酸化水平反映p38 MAPK信号通路的活性。分别采用0、10、20μmol/L的p38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理HepG2细胞1 h后,再用800μg/ml喹乙醇染毒24 h,采用Annexin VFITC/PI法检测细胞凋亡。结果:随着喹乙醇染毒浓度和时间的增加,HepG2细胞的p38磷酸化蛋白表达量逐步增加,其中800μg/ml喹乙醇染毒细胞24 h的实验组与对照组相比,p38磷酸化蛋白的表达量明显上调(P0.01)。10、20μmol/L的SB203580对喹乙醇诱导细胞凋亡有促进作用,细胞的凋亡率分别为35.4%±2.83%、40.2%±3.98%,较喹乙醇对照组(23.1%±3.59%)明显升高(P0.05)。结论:喹乙醇能激活p38 MAPK信号通路,且p38 MAPK信号通路的激活参与抑制喹乙醇介导的HepG2细胞凋亡的过程。     

喹乙醇致肾脏毒性的内质网应激相关凋亡途径研究

目的通过喹乙醇染毒人源肾小管上皮细胞(HK-2细胞)并检测活性氧(ROS)和凋亡相关蛋白的表达,探讨喹乙醇肾脏毒性产生过程及其可能的内质网应激相关凋亡机制。方法分别以不同浓度(1、2、3、4、5、6、7和8μmol/ml)喹乙醇染毒HK-2细胞24 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖率以确定剂量-效应关系;Hoechst-33258荧光染色检测各组细胞凋亡形态,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和细胞内活性氧含量;免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关凋亡蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和凋亡促进因子CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达。结果根据MTT毒性实验结果 ,喹乙醇对HK-2细胞凋亡效应的适宜剂量确定为1、2、3和4μmol/ml。在喹乙醇不同剂量观察组中,喹乙醇染毒2μmol/ml以上剂量组,细胞凋亡率、内质网凋亡相关蛋白GRP79、GRP94和CHOP表达增加,喹乙醇各染毒剂量均可见活性氧水平增加(P<0.05);在喹乙醇不同染毒时间观察组中,喹乙醇染毒12和24 h组,细胞凋亡率、内质网凋亡相关蛋白GRP79、GRP94表达增加,喹乙醇染毒6、12和24 h组,活性氧水平、内质网凋亡相关蛋白CHOP表达增加(P<0.05)。结论喹乙醇可致肾小管上皮细胞发生细胞凋亡从而造成肾脏毒性,凋亡的发生可能与内质网应激相关凋亡途径相关。     

超高效液相色谱法测定肉制品中喹乙醇

目的:建立超高效液相色谱测定肉制品中喹乙醇的方法。方法:采用5%甲醇作为提取液,OasisHLB固相萃取小柱净化进行样品前处理,超高效液相色谱-紫外检测器测定。色谱柱XTerra Ms C18 3.5μm×2.1 mm×100 mm,流速:0.3 ml/min,流动相:甲醇∶水=10∶90,柱温30℃,检测波长260 nm,进样量:10μl。结果:喹乙醇方法检出限0.04 mg/kg,在0 mg/L～10.0 mg/L范围内呈良好线性关系,相关系数r=0.9992。方法平均回收率为85.9%,RSD为4.2%。结论:本方法适用于肉制品中喹乙醇的测定。     

喹乙醇对鸡生物膜磷脂酶A2活性和膜磷脂代谢的影响

目的： 研究喹乙醇（olaquindox）对生物膜磷脂酶A₂活性（PLA₂）和膜磷脂代谢的影响。方法: 将150只健康艾维茵肉鸡随机分成正常对照组（第1组）和喹乙醇处理组（第2组）。2组均饲喂相同不含喹乙醇的空白饲料，其中第2组每天按15 mg/kg体重将喹乙醇原粉装于胶囊中，给鸡1次内服,实验时间共6周。每周采样本1次，随机抽取2组鸡各6只，颈静脉采血后用于制备红细胞膜（ECM）和肝线粒体膜（MiM）。结果: 第2组ECM和MiM中PLA2活性在整个实验过程中除1、2周外其余3-6周活性均显著高于第1组（P＜0.05，P＜0.01）；第2组中2种膜样品的磷脂含量在整个实验过程中均低于第1组（P＜0.05,P＜0.01）。结论: 喹乙醇能影响ECM和MiM上的PLA₂活性和磷脂含量，从而引起生物膜损伤。