Decellularized porcine conjunctiva as an alternative substrate for tissue-engineered epithelialized conjunctiva

PurposeThe long-term success of visual rehabilitation in patients with severe conjunctival scarring is reliant on the reconstruction of the conjunctiva with a suitable substitute. The purpose of this study is the development and investigation of a re-epithelialized conjunctival substitute based on porcine decellularized conjunctiva (PDC).MethodsPDC was re-epithelialized either with pre-expanded human conjunctival epithelial cells (PDC + HCEC) or with a human conjunctival explant placed directly on PDC (PDC + HCEx). Histology and immunohistochemistry were performed to evaluate epithelial thickness, proliferation (Ki67), apoptosis (Caspase 3), goblet cells (MUC5AC), and progenitor cells (CK15, ΔNp63, ABCG2). The superior construct (PDC + HCEx) was transplanted into a conjunctival defect of a rabbit (n = 6). Lissamine green staining verified the epithelialization in vivo. Orbital tissue was exenterated on day 10 and processed for histological and immunohistochemical analysis to examine the engrafted PDC + HCEx. A human-specific antibody was used to detect the transplanted cells.ResultsFrom day-14 in vitro onward, a significantly thicker epithelium and greater number of cells expressing Ki67, CK15, ΔNp63, and ABCG2 were noted for PDC + HCEx versus PDC + HCEC. MUC5AC-positive cells were found only in PDC + HCEx. The PDC + HCEx-grafted rabbit conjunctivas were lissamine-negative during the evaluation period, indicating epithelial integrity. Engrafted PDC + HCEx showed preserved progenitor cell properties and an increased number of goblet cells comparable to those of native conjunctiva.ConclusionPlacing and culturing a human conjunctival explant directly on PDC (PDC + HCEx) enables the generation of a stable, stratified, goblet cell-rich construct that could provide a promising alternative conjunctival substitute for patients with extensive conjunctival stem and goblet cell loss.     

32例再生障碍性贫血的微循环及血液粘度

对３２例再障患者的甲襞、球结膜微循环及血粘度进行观察，结果表明：再障组均有不同程度的微循环异常改变（１００％），与正常对照组比较差异显著（Ｐ＜０．０１）；再障组全血粘度、全血还原粘度明显低于正常对照组（Ｐ＜０．０１），再障患者的Ｈｂ与全血粘度及血浆比粘度呈正相关。     

角膜缘干细胞移植治疗兔眼表碱烧伤的实验研究

目的 :探讨眼表碱烧伤后行角膜缘干细胞移植术的疗效 ,并与单纯行角膜移植术组作比较。方法 :在 16只兔双眼上制作碱烧伤模型 ,1d后 ,右眼行异体板层角膜缘干细胞移植术 ,左眼行异体板层角膜移植术 ,术后观察 6月 ,根据术眼的角膜新生血管分级、植片的混浊度、水肿度来计算移植排斥反应指数 (RI) ,以RI值判断植片的存活情况。结果 :行异体板层角膜缘干细胞移植术的 16眼中有 14眼RI <9,治愈率达 87.5 % ;行单纯异体板层角膜移植的 16眼中 6眼RI值 <9,有效率 3 7.5 % ;两者相比有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。两组的新生血管数、植片的混浊度、水肿度及RI值均有显著性差异。结论 :含干细胞的异体角膜缘移植治疗眼表碱烧伤的疗效明显优于单纯异体角膜移植 ,是一种较有效的方法。     

血管抑素抑制兔眼表碱烧伤角膜缘移植术后的角膜血管新生

目的:检测眼表碱烧伤角膜缘移植术后血管抑素抑制角膜新生血管的作用。方法:16只新西兰大白兔双眼制作碱烧伤模型1d后,双眼行角膜缘移植术,术后左眼局部应用血管抑素治疗2周,右眼作对照;观测4周,根据新生血管侵入角膜缘内的范围、角膜混浊与水肿程度进行分级并作统计学处理;同时测量术后7、14、21及28d的眼压。结果:术后4周时,应用血管抑素的左眼的新生血管的评分为1.19±0.10,而对照组为1.63±0.72,统计学处理显示左眼的新生血管较右眼的明显减少(P<0.05),角膜混浊与水肿程度亦明显下降。各时间点各术眼的眼压均在正常范围,无统计学差异。结论:局部应用血管抑素能有效抑制眼表碱烧伤角膜缘移植术后的新生血管增生。     

自体角膜缘移植治疗翼状胬肉的临床观察

目的 探讨自体角膜移植治疗翼状胬肉的疗效。方法 对４２例（４８只眼）初发性和复发性翼状胬肉行自体角膜缘移植术,术后随访３６例（４２只眼）,随访时间４个月～２年,平均９个月。结果 上皮愈合良好、稳定,无新生血管及结产生,角膜光滑,未见复发。结论 自体角膜缘移植可通过提供新的干细胞来源,提高翼状胬肉手术的成功率,降低术后的复发率,是一种有推广价值的手术方法。     

角膜缘干细胞与结膜移植治疗翼状胬肉

目的:观察角膜缘干细胞与结膜移植治疗翼状胬肉的疗效。方法:采用自体角膜缘干细胞与结膜移植术,对38例43眼初发和复发性翼状胬肉患者进行治疗,术后随访3～30月,平均10月。结果:38例43眼中34例38眼上皮愈合稳定,角膜恢复正常光滑、透明,胬肉无复发。4例5眼失访。结论:自体角膜缘上皮移植为病变区角膜和结膜提供新的干细胞来源,是治疗翼状胬肉的理想方法。眼科学报1999;15:89—90。     

自体角膜缘移植术治疗复发性翼状胬肉疗效观察

目的　观察自体角膜缘移植术治疗复发性翼状胬肉的疗效。方法　对 10例 (10眼 )复发性翼状胬肉患者施行患眼健侧带结膜的自体角膜缘移植术。结果　随访 6～ 12个月 ,10例患者角膜移植片均透明光滑 ,愈合良好 ,无一例复发。结论　自体角膜缘移植术治疗复发性翼状胬肉有效、安全、简便。     

老年人结膜囊细菌状况及药物敏感实验

目的:为了有效的预防术后眼内炎,对目前老年人结膜囊的细菌状况和对抗生素的敏感率进行评估。方法:北京市老年人(81.5±10.2)岁165眼,常规眼科检查除外眼前段,眼表面炎性疾患,行结膜囊细菌培养,对培养阳性者行细菌分离培养和药物(常用的16种抗生素)敏感实验;滴3g/L氧氟沙星滴眼液1wk,再培养。结果:首次培养阳性率为21.2%(35/165),第二次阳性率为7.3%(12/165)。首次培养中共41个菌株,11个菌种。葡萄球菌属最多,共27株(70.7%),其中表皮样葡萄球菌19株(46.3%),金黄色葡萄球菌7株(17.1%)。次之为棒状杆菌5株(12.3%)。万古霉素对G 菌全部敏感,亚胺培南对G-菌极敏感,头孢菌素和喹喏酮类药物耐药菌株增多,敏感率63.6%～78.8%。结论:术前滴抗生素眼液可显著减少结膜囊的细菌(P <0.01),但是不能达到完全无菌状态。目前头孢菌素和喹喏酮类药物耐药菌株增多,但仍可做为防治眼部感染和眼内炎的主要药物。     

自体带结膜瓣角膜缘干细胞移植联合羊膜移植治疗复发性翼状胬肉

目的:降低翼状胬肉术后复发率,减少术后并发症。方法:采用自体带结膜瓣的角膜缘干细胞移植联合羊膜移植治疗26例(26眼)复发性翼状胬肉患者。结果:在26眼中显效25眼,复发1眼,有效率为96%。结论:采用自体带结膜瓣角膜缘干细胞移植联合羊膜移植,可有效维持角膜上皮与结膜上皮之间的屏障途径,阻止结膜上皮长入和新生血管形成,并使结膜下成纤维增殖抑制,睑球粘连松解,从而降低翼状胬肉术后复发率,减少术后并发症。     

SARS-CoV S蛋白功能性受体ACE2在人、兔角膜、结膜中的表达

目的 SARS冠状病毒(SARS-CoV)的S蛋白介导了病毒与宿主细胞的结合。最近已鉴定出SARS-CoV S蛋白的功能性受体是血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme2，ACE2)。本研究检测了ACE2在人、兔眼结膜、角膜中的表达，由此来初步推断SARS-CoV由眼部入侵的可能。方法 分别采取：(1)成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织；(2)4～6月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织；(3)兔眼角膜、结膜、心、肺组织；(4)培养的人结膜成纤维细胞和兔角膜上皮细胞。分别采用RT-PCR和免疫组化方法检测各组织、细胞中ACE2的表达。取尸体解剖的成人心、肺组织作为对照、结果 RT-PCR法在上述各种组织和细胞中均检测到ACE2的扩增条带，其中胎儿、成人和兔的角膜、结膜扩增条带较心、肺稍弱，兔各组织的扩增条带亮度与对应的人体组织的扩增条带亮度相近。ACE2免疫组化反应产物主要位于胞浆和胞膜，呈棕黄色或棕褐色．角膜和结膜的上皮细胞及角膜内皮细胞呈明显的阳性表达，角膜和结膜的成纤维细胞呈弱阳性表达，培养的人结膜成纤维细胞和兔角膜上皮细胞亦可见阳性表达。兔组织中的ACE2表达强度及组织定位与人相近。结论 本研究从mRNA和蛋白质水平证实了眼组织存在SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体ACE2，由此初步推断SARS-CoV存在由眼部入侵的可能，为临床进一步研究SARS的防护和致病机制提供了线索。同时，为新西兰大白兔可能成为研究SARS-CoV入侵途径的动物模型提供了初步的实验依据。