人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA，(human telomeraseRNA，hTR)的cDNA探针，分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法(TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。18例活检胃癌组织及45例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为l00％，相应TRAP分析的阳性率分别为88．89％、86．67％，低于RNA斑点杂交(P＜0．05)。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA，具有高度的敏感性和特异性，弥补了TRAP分析敏感性不足的缺点。     

慢性低氧大鼠肺动脉内皮素mRNA的表达及定位

目的：探讨慢性低氧大鼠肺动脉内皮素－1基因表达及分布。方法：采用生物素标记cRNA探针，对Wistar大鼠肺动脉进行原位杂交。结果：低氧1周组及低氧2周组大鼠大部分肺动脉内皮细胞ET－1mRNA表达呈阳性信号，而对照组大鼠仅极少数阳性信号（P＜0．01）；低氧1周组大鼠部分显示强阳性信号。低氧1周组及低氧2周组大鼠部分肺动脉平滑肌细胞呈现ET-1mRNA表达阳性信号，而对照组大鼠则无阳性信号表达（P＜0．01及0．05）。结论：慢性低氧对大鼠肺动脉ET－1分泌的影响是在基因转录水平进行，且主要细胞定位在肺动脉内皮细胞，此外还包括肺动脉平滑肌细胞。     

一种较好的RNA分离制备方法及其在人胚RNA提取中的应用

以钒基核苷酸复合物为核酸酶抑制剂,从人胚组织中制备总RNA,所得产品几乎不含DNA和蛋白质,经过分离Poly(A)~ mRNA,证明制品有合成cDNA的完整功能,方法比较简捷,适于大量制备以满足分离mRNA 之需,并讨论了此法的优缺点。     

Dipeptidyl peptidase IV is down-regulated in rat hepatoma cells at the mRNA level

Dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) is a cell surface ectopeptidase that has been implicated in cell-extracellular matrix interactions, lymphocyte growth and the regulation of biological peptides. Previous studies have shown that immunostaining for DPP-IV and DPP-IV enzyme levels is decreased in hepatoma cells and levels have been correlated with the ability of such cells to adhere in vitro. The aim of this paper was to measure DPP-IV enzyme levels in rat hepatoma cells and to examine whether changes were associated with alterations at the mRNA level. The results indicate a greater than 90% reduction in DPP-IV enzyme levels in two rat hepatoma cell lines, HTC and H35, compared with rat hepatocytes. Enzyme levels of the control enzyme leucine aminopeptidase (LAP) were not decreased. mRNA studies indicated that these changes were associated with similar reductions in rat DPP-IV mRNA. It is concluded that DPP-IV is markedly reduced at the protein, enzyme and mRNA levels in rat hepatoma cells. The significance of these changes is unclear but may lead to decreased extracellular matrix interactions by such cells.     

大鼠肝细胞Ⅰ，Ⅲ型前胶原基因表达及PDGF的影响

目的观察大鼠肝细胞Ⅰ，Ⅲ型前胶原基因的表达及ＰＤＧＦ对其表达的影响．方法应用原位杂交技术检测分离培养的ＳＤ大鼠肝细胞（ｎ＝３０）内Ⅰ，Ⅲ型前胶原基因的表达．同时观察１０μｇ／Ｌ（ｎ＝３０）和３０μｇ／Ｌ（ｎ＝３０）ＰＤＧＦ促进前胶原基因表达的作用．测定基因表达颗粒总面积占细胞总面积的百分比，并作比较分析．结果无论正常肝细胞或是在两种浓度的ＰＤＧＦ存在时，肝细胞内均可见到Ⅰ，Ⅲ型前胶原基因的表达．正常肝细胞Ⅰ，Ⅲ型前胶原基因表达面积的百分比（％）为７７±１９和７５±２１；加１０μｇ／ＬＰＤＧＦ后为１１５±１９和１１２±１０，而加３０μｇ／Ｌ后为１５２±３４及１８１±２８，且在后者中表达明显增强（Ｐ＜００５及Ｐ＜００１）．结论ＰＤＧＦ在转录水平上促进肝细胞胶原的合成．     

二甲亚砜对人表皮的核酸和蛋白质合成的影响

用体外培养的人的伪表皮作为模型，进行药物毒理学作用的研究，观察了二甲亚砜（ＤＭＳＯ）在不同浓度和不同接触时间条件下，对人的伪表皮细胞脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）、核糖核酸（ＲＮＡ）和蛋白质合成的影响：随着接触时间的延长，ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质合成均受抑制。低浓度条件下（１％），ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质合成增加；在１５～５０％浓度下，ＤＮＡ和蛋白质合成抑制，而ＲＮＡ合成仍增加；在高浓度条件下（７０％～１００％），ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质合成均明显抑制。     

核糖核酸的酶消化方法直接顺序分析

应用硷基特异性核酸内切酶进行RNA的顺序分析。以~(32)P标记RNA分子的5′或3′末端的四种硷基能被酶试剂部分裂解。放射性的水解产物经胶电泳按其大小而分离。放射自显影后它的核苷酸顺序从带谱上可以直接读出。核糖核酸酶(RNasc)T_1(G特异性)、U_2(A特异性)、Phy M(U+A特异性)和B.cereus(C+U特异性)是最常用于顺序RNA的四种酶。     

RNA干扰及其在胶质瘤基因治疗中的应用

RNA干扰（RNA interference。RNAi）是双链RNA（double—stranded RNA，dsRNA）降解特异性靶基因转录出的mRNA。从而抑制靶蛋白表达的现象。自从二十世纪九十年代发现RNAi这一现象以来，RNAi已被广泛应用于研究基因功能、信号转导通路和基因治疗等方面。随着分子生物学、分子遗传学等学科的发展．发现了许多与肿瘤发生、发展和预后密切相关的基因。经过大量临床前期试验表明，针对特异性靶基因的小干扰RNA（short／small interfering RNA．siRNA）治疗胶质瘤是行之有效的。为基因治疗胶质瘤提供了新的思路。[第一段]