河南省1例柬埔寨输入登革热病例的病原分子分型与全基因序列分析

目的鉴定河南省1例来自柬埔寨的登革热输入性病例的登革病毒(dengue virus,DENV)血清型和基因型及其序列特征和传播来源。方法患者血液标本来源于2019年国家疾病监测系统网络直报的登革热疑似病例。样品经快速检测DENV NS1抗原和IgM/IgG抗体,再提取血清中核酸,应用荧光RT-PCR法进行DENV血清型鉴定,同时用Vero和BHK-21细胞对血清标本进行病毒分离培养,阳性培养物扩增全基因组序列,进行序列系统进化分析。结果该病例实验室确诊为DENV 1型感染,并从血清标本中分离到病毒株,测序后拼接成全长10670 nt的全基因组序列,经系统进化分析,该病毒株属于DENV 1型基因Ⅰ型,与东南亚流行株具有较高同源性和较近亲缘关系。结论2019年河南省来自柬埔寨的输入性病例的病原体为DENV 1型基因I型,此为近年来东南亚输入我国的常见血清型和基因型。     

基于机器学习的脑胶质瘤多模态影像分析

脑部胶质瘤是临床中常见的一种原发性脑肿瘤，具有复发率高、死亡率高以及治愈率低的特点。常规临床诊断主要依靠计算机断层扫描(CT)和磁共振成像(MRI)检查技术进行鉴别。随着成像技术和机器学习方法的不断发展，多模态影像智能分析技术已经逐步成为研究热点，在脑胶质瘤的病灶分割测量、肿瘤分级、预后生存周期预测和基因型辨别等方面具有重要的应用前景。本文重点介绍基于机器学习和多模态影像在脑胶质瘤临床辅助诊断和预后评估中的应用进展。     

Creutzfeldt-Jakob病脑组织14-3-3蛋白表达及其意义

目的探讨Creutzfeldt—Jakob病（CJD）脑组织内14-3-3蛋白表达及其诊断意义。方法实验组为5例cJD额叶组织，对照组为4例非CJD额叶组织。采用14-3-3B和s抗体，通过链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶（S—P）免疫组织化学方法进行检测。并参照KB、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、PrP免疫组织化学染色和129基因型检测结果。结果实验组5例脑组织14—3-3蛋白有较多地表达，其中3例灰质与星形胶质细胞尤著。其表达程度与PrP沉积类型有关，而与PrP129基因型无关。对照组4例中除2例急性脑挫伤仅个别神经细胞有表达外，肾上腺脑白质营养不良与额颞叶痴呆灰质和白质均无表达。结论14-3．3蛋白在脑内较多地表达，有利于CJD的病理诊断。     

广州地区小儿乙肝无症状携带者及其父母的HBV DNA基因型研究

目的扩增HBV DNA S基因,建立 HBV DNA的分型方法,研究家庭中小儿乙肝无症状携带者与其父母的基因型.方法利用PCR-RFLP基因分型方法,扩增HBV DNA S基因,以限制性内切酶AvaⅡ,MboⅠ酶切分型;结果 12个家庭共27例乙肝无症状携带者血清,其中两个家庭儿童与父母的基因型相同,均为B型;9个家庭儿童与母亲的基因型相同(7个B型,2个C型),父亲HBV DNA阴性;1个家庭儿童与母亲为B型,父亲为C型,结论本文利用的分型方法经济实用,分型率高,广州地区的基因型以B型,HBV DNA的传播具有家庭聚集性特点及母婴传播的特点.     

肺炎链球菌β-内酰胺酶TEM基因的发现

目的：探讨肺炎链球菌是否产β-内酰胺酶。方法：对2002年9月至2003年4月在苏州大学附属儿童医院就诊的呼吸道感染患儿痰标本中分离到的23株肺炎链球菌进行β-内酰胺酶TEM基因PCR检测与PCR扩增产物直接测序分析。结果：23株肺炎链球菌经TEM基因PCR检测21株阳性，阳性率达91．3％。测得1号菌株(SR001)基因序列为TEM-1型，已登录美国国立生物信息中心，注册号：AY392531。结论：从肺炎链球菌中检出β-内酰胺酶TEM基因。肺炎链球菌对青霉素耐药机制包括产β-内酰胺酶。     

Specifically associated PCR products probed by coincident detection of two-color cross-correlated fluorescence intensities in human gene polymorphisms of methylene tetrahydrofolate reductase at site C677T: a novel measurement approach without follow-up mathematical analysis

Whole blood samples of known methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR) genotypes from 24 individuals were examined at site C677T. Their amplified DNA products were assessed by two-color fluorescence cross-correlation measurements and agarose gel electrophoresis/capillary gel electrophoresis. DNA subpopulations were identified which were not associated with the proper genotype by primer combinations and cycling conditions called multiplexes. We confirmed that DNA analysis by two-color fluorescence cross-correlation measurements allowed the detection of fluorescence signals specifically associated with the proper genotypes in a mixture of amplified nontarget DNA molecules without DNA sizing. The measurement approach does not require complex, follow-up mathematical analysis and is applicable to any single nucleotide polymorphisms. The simple immunogenetic model showed how the approach works to reveal specific DNA target by preventing detection of nontarget DNA. Under those experimental conditions, a new ultrasensitive, and specific method for clinical immunologists is born.     

华南地区质粒介导超广谱β-内酰胺酶的基因分型研究

目的：了解华南地区质粒介导超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）的发生率及基因型特征。方法：收集2001年4月－9月革兰阴性菌临床分离无重复株共1184株，采用NCCLS表型筛选和确认试验进行了ESBLs产酶的识别，E-test法检测各亚型ESBLs的MICs值，质粒接合及电转化实验，耐药质粒提取及酶切指纹分析，等电聚焦电泳，PCR通用引物扩增TEM、SHV、CTX－M、VEB、PER、SFO基因及其克隆测序进行ESBLs基因分型和质粒定位。结果：革兰阴性苗ESBLs的检出率为14．6％（173／1184）；获得产ESBLs接合子67株，电转化子11株，其中产CTX－M－14型ESBLs为33．3％（26／78）、CTX－M－3为23．1％（18／78）、CTX－M－9为14．1％（11／78）及SHV-2a为2．6％（2／78），未定型为5．1％（4／78）；29．5％（23／78）野生株伴广谱酶TEM－1或SHV－1型；各型ESBLs基因约定位在35－190kb大小的可接合性低执行者拷贝数天然质粒上；CTX－M型ESBLs以对头孢噻肟高水平高耐为特征。结论：华南地区质粒介导的ESBLs以CTX－M型衍生酶为主，其次是SHV型酶。     

丙型肝炎病毒基因分型及其与疾病程度、感染途径和干扰素疗效的关系

为探讨广州地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的基因型及其与疾病程度、感染途径和干扰素疗效的关系，作者应用分型ＰＣＲ技术对１５６例抗－ＨＣＶ阳性患者血清ＨＣＶＲＮＡ进行分型检测，并分析不同程度肝病及不同感染途径ＨＣＶ基因型分布，且对５１例经干扰素治疗的慢性丙肝作分型评价。结果１２４例ＨＣＶＲＮＡ阳性中，Ⅱ型占９０．３％（１１２例），Ⅲ型占８．１％（１０例），Ⅱ／Ⅲ型混合感染占１．６％（２例），未检出Ⅰ、Ⅳ型，说明广州地区ＨＣＶ感染以Ⅱ型为主；不同程度肝病及不同感染途径之间ＨＣＶ基因型构成比无明显差异，表明基因型与疾病严重程度及感染途径关系不大；干扰素治疗病例，ＨＣＶ－Ⅱ、Ⅲ型感染的总应答数、完全应答数及部分应答数分别为１８／４１，１１／４１，７／４１和８／１０，６／１０，２／１０，提示Ⅲ型感染疗效较好，ＨＣＶ基因型似可作为选择干扰素治疗病例及判断疗效的参考指标，但是由于观察的Ⅲ型病例数较少，需积累更多的资料才能作出更客观的结论。     

儿童呼吸道腺病毒基因分型方法的建立及其应用

目的 利用PCR技术,建立引起儿童呼吸道感染的腺病毒的基因分型方法,便于推广和应用.方法 分析GenBank中不同型别腺病毒的六邻体基因序列特点,设计不同型腺病毒的特异性引物,以PCR方法进行基因分型,建立基因分型方法,并利用此方法对广州市2004年7月某幼儿园流行的腺病毒感染进行了基因分型.结果 建立了呼吸道腺病毒的基因分型方法.广州市2004年7月某幼儿园流行的腺病毒为3型腺病毒.结论 PCR方法可进行腺病毒的基因分型,且简便、结果可靠,便于推广应用.     

HLA—DRB1＊04等位基因亚型的DNA分型

采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）检测我国汉族人群ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０４等位基因亚型频率，并与白种人群进行比较。利用５′端公用引物与３′端８个特异性引物进行ＰＣＲ反应，可准确分辨出１１个ＤＲＢ１＊０４等位基因，耗时４小时，无假阳性和假阴性结果。８５份随机样本的分型结果显示，我国汉族人群ＤＲＢ１＊０４基因亚型的频率与白种人之间存在非常显著性差异。