补骨脂素抗增生性瘢痕作用机制研究

目的探讨补骨脂素抗增生性瘢痕的作用机制。方法体外培养成纤维细胞,按随机数字表法分为正常组(培养正常成纤维细胞)、瘢痕组(培养增生性瘢痕成纤维细胞)、TGF-β1组(10 ng/ml TGF-β1处理增生性瘢痕成纤维细胞5 min^12 h)、Smurf2 RNA干扰组[Smad泛素化调节因子2(Smad ubiquitin regulatory factor2,Smurf2)siRNA转染增生性瘢痕成纤维细胞72 h]、补骨脂素组(10μmol/L补骨脂素处理增生性瘢痕成纤维细胞继续培养72 h)、补骨脂素+TGF-β1组(增生性瘢痕成纤维细胞加入补骨脂素培养72 h后加入TGF-β1培养6 h)。采用Western blot法检测Smurf2、α-平滑肌肌动蛋白(α-actin SMA,α-SMA)蛋白表达;RT-PCR法检测Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达;ELISA法检测TGF-β1蛋白分泌。结果与正常组比较,瘢痕组Smurf2蛋白[(0.83±0.08)比(0.38±0.07)]表达增加(P<0.05);与瘢痕组比较,Smurf2 RNA干扰组TGF-β1[(2.2±0.18)比(4.2±0.47)]表达降低(P<0.05);TGF-β1组Smurf2[(0.71±0.06)比(0.42±0.04)]、α-SMA[(1.42±0.12)比(0.91±0.09)]蛋白表达增加(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA[(0.72±0.09)比(0.41±0.07)]表达增加(P<0.05);补骨脂素组Smurf2[(0.05±0.01)比(0.42±0.04)]、α-SMA[(0.71±0.07)比(0.91±0.09)]蛋白表达降低(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达[(0.12±0.04)比(0.41±0.07)]降低(P<0.05)。结论补骨脂素可能通过TGF-β1/Smurf2信号通路抑制α-SMA蛋白表达,从而降低Ⅰ型胶原蛋白表达,起到抑制瘢痕形成的作用。     

雌性杜洛克猪作为增生性瘢痕动物模型的临床和病理学观察

目的通过对雌性杜洛克猪(FRDP)皮肤深层结构损伤的进一步的观察,说明其产生增生性瘢痕,为FRDP作为增生性瘢痕的动物模型提供科学依据。方法将2只FRDP背部造成4种不同深度的创面。将0.038 cm、0.076 cm组视为浅创面组;0.114 cm、0.152 cm组视为深创面组。分别在伤后不同时间点上切取组织标本行HE和弹性纤维(VVG)染色。大体观察创面愈合及瘢痕形成情况;组织病理学观察增生性瘢痕的形态;行瘢痕组织厚度的测定。结果HE和VVG染色观察到正常FRDP背部皮肤存在一种结构单位。深创面组该结构单位的深层部分受损,伤及脂肪穹隆以及腺体。伤后150 d,脂肪穹隆以及腺体结构消失,并被大量堆积的、没有特定的方向、排列紊乱的胶原纤维束充盈。结论FRDP的皮肤深层受损直接导致了增生性瘢痕的形成,为增生性瘢痕的FRDP模型提供了又一个证据。     

~（90）Sr照射抑制青光眼术后瘢痕形成的实验与临床研究

在动物实验的基础上，为青光眼术后瘢痕形成高危病人２３例３１只眼作小梁切除术，术后３天开始分次给予局部~（９０）Ｓｒ照射，总剂量为３０．２４Ｇｙ，结合局部用激素，随访１～２４个月（平均７个月），眼压控制率为９０．３％，未见晶体损害及其他并发症，提示作为青光眼滤过手术后抗瘢痕形成的一种方法，该治疗措施是可取的。     

经阴道子宫峡部剖宫产瘢痕部位妊娠物切除术的疗效

目的 探讨经阴道子宫峡部剖宫产瘢痕部位妊娠(CSP)物切除术的临床疗效.方法 安徽医科大学附属省立医院2012年8月至2015年8月收治的CSP患者 36例,停经时间为32~87 d.子宫峡部剖宫产切口处包块最大直径9~83 mm,均经阴道行CSP物切除术.结果 35例患者手术成功,1例因术中出血多,中转开腹行妊娠物切除术.手术成功患者术后无并发症,术后血β~hCG恢复正常时间为12~30 d,术后均无不规则阴道流血、月经过多或过少等并发症出现.结论 经阴道子宫峡部CSP物切除术,可以完全切除妊娠物,并修补子宫峡部切口缺陷,CSP物切除术式安全、简单、微创,值得临床进一步推广.     

粉防己碱对瘢痕成纤维细胞活性功能的影响

目的　观察粉防己碱对体外培养的巨噬细胞介质介导瘢痕成纤维细胞活性功能的调控作用 ,并探讨其在瘢痕防治中的意义。方法　取 5例手术切除的人增生性瘢痕组织标本行瘢痕成纤维细胞体外培养 ,于传代培养至第 4代的成纤维细胞 (5× 10 4)中分组加入巨噬细胞介质、粉防己碱继续培养 ,然后分别用3 H TdR和3 H 脯氨酸脉冲标记 ,放射性核素液闪烁仪定量检测各组3 H TdR和3 H 脯氨酸掺入值。并采用三维培养方法测定体外模拟瘢痕样组织的收缩指数变化。结果　粉防己碱 3mg/L不抑制细胞DNA合成时 ,即可明显减少瘢痕成纤维细胞 3 H 脯氨酸掺入值 ,由对照组的 94 5± 191减少至6 82± 2 0 5 (P <0 .0 5 ) ;并能显著降低巨噬细胞介质介导的瘢痕成纤维细胞3 H TdR掺入值和3 H 脯氨酸掺入值 ,由单纯介质组的 2 75 6± 2 4 4、1384± 2 93分别降低至 194 8± 2 82、10 34± 14 2 (均P <0 .0 1)。粉防己碱 1mg/L即可降低体外瘢痕样组织的收缩指数 (P <0 .0 1)。结论　粉防己碱对体外培养的巨噬细胞介质介导瘢痕成纤维细胞增殖、胶原合成以及收缩三方面具有抑制效应 ,可望在增生性瘢痕的防治中发挥重要作用。     

Experimental study on He—Ne Iaser irradiation to inhibit scar fibroblast growth in culture

OBJECTIVE: To explore the inhibitory effect of He-Ne laser irradiation on fibroblast growth of hypertrophic scars in culture. METHODS: He-Ne laser with wavelength of 632.8 nm, power density of 50 mW/cm(2) and doses of 3 J/cm(2), 30 J/cm(2), 90 J/cm(2) and 180 J/cm(2) was used to irradiate human scar fibroblasts in culture 1, 3 and 5 times respectively, and then the cell count and cell cycle analysis were done. RESULTS: Repeated irradiation with He-Ne laser at dose of 180 J/cm(2) three and five times led to an evident decrease in total cell number compared with that of the control group and there was a significant difference (P<0.05). The cell cycle analysis showed after three and five times of irradiation with 180 J/cm(2) He-Ne laser the cell number in S-phase decreased from 51% to 20% and 14% respectively, the cell number in G(0)/G(1) phase increased from 28% to 55% and 60% respectively, and the cell percentage in Sub-G1 phase was 6.7% and 9.8% respectively. CONCLUSIONS: Repeated irradiation with 180 J/cm(2) He-Ne laser can inhibit scar fibroblasts growth in culture. It may be that He-Ne laser irradiation causes cell stagnation in G(0)/G(1) phase and apoptosis.     

岛状皮瓣修复瘢痕性睑外翻

目的 探讨眼轮匝肌蒂颞部岛状皮瓣与颞浅动脉蒂反流轴型耳后岛状皮瓣在修复瘢痕性睑外翻中的应用,提高睑外翻矫正后所致皮肤缺损的美学修复效果.方法 自1998年2月以来,对18例瘢痕性睑外翻, 采用眼轮匝肌蒂颞部岛状皮瓣旋转180°移位修复13例,皮瓣最大面积2.7 cm×3.6 cm; 采用颞浅动脉蒂反流轴型耳后岛状皮瓣经面部皮下隧道转移修复5例,皮瓣最大面积 3.1 cm×5.4 cm.结果 1例反流轴型耳后岛状皮瓣术后出现静脉回流障碍,经对症处理后仅皮瓣远端部分表皮坏死,Ⅱ期植皮后治愈,其余17例皮瓣完全成活.随访6个月,睑外翻矫正,皮瓣颜色、质地与眼周皮肤相近,供区瘢痕不明显.结论 根据睑外翻程度,可制备颞部岛状皮瓣或耳后岛状皮瓣转移.前者适用于修复较小面积的皮肤缺损,后者适用于修复较大面积的皮肤缺损.     

人增生性瘢痕组织内下丘脑—垂体—肾上腺皮质轴成分的表达

目的 探讨增生性瘢痕组织中下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴成分的表达及意义.方法 应用实时荧光定量PCR法,检测人增生性瘢痕(12例)和正常皮肤(7例)组织中HPA轴的活性物质促肾上腺皮质素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质素释放激素受体1(CRH-R1)、阿片-促黑素细胞皮质素原(POMC)、黑素皮质素受体2(MC-2R)以及糖皮质激素受体α(GR-α)的mRNA表达差异,免疫组织化学法观察CRH、CRH-R1、促肾上腺皮质激素(ACTH)、MC-2R以及GR-α的分布差异.对数据进行独立样本t检验. 结果 PCR结果显示,增生性瘢痕组织标本中CRH、CRH-R1、POMC及GR-α的mRNA表达分别为3.1±0.8、0.05±0.03、0.020±0.007、0.0000±0.0010,均低于正常皮肤组织的20.6±4.7、0.30±0.12、0.060±0.020、0.0200±0.0070,差异有统计学意义(t值为2.10-4.75,P值均小于0.05);但2种组织中MC-2R mRNA表达水平接近(t=1.48,P=0.15).免疫组织化学法检测结果显示,CRH,CRH-R1、ACTH、MC-2R以及GR-α分布于瘢痕组织的表皮基底层、真皮层的Fb和汗腺管壁中.在正常皮肤组织中阳性细胞除分布于上述部位外,还可见于毛囊和皮脂腺. 结论 增生性瘢痕形成与组织中HPA轴的活性物质表达降低有关.     

病理性瘢痕裸鼠模型的建立

目的 验证所构建裸鼠瘢痕疙瘩和增生性瘢痕模型在病理性瘢痕研究中的可行性。方法 将0．8cm×0．8cm×0．5cm的人瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组织块移植到裸鼠皮下，大体观察裸鼠及植入物情况。移植后第16天取出移植物与原标本进行下列指标的比较：体积、瘢痕的镜下特征、酸性黏多糖含量及Ⅰ、Ⅱ型胶原含量。结果 移植后裸鼠全部存活且创面愈合良好。瘢痕疙瘩、增生性瘢痕组织块的酸性黏多糖含量移植前分别为3448±1452、1940±509，移植后分别为3237±1871、1809±552，移植前后比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。植入物保持着原有的胶原特性及含量，未检测到细胞变性坏死。结论 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩以适当体积移植到裸鼠皮下，其生物学特性可在一定时间内保持稳定，该动物模型适用于病理性瘢痕的临床研究。     

增生性瘢痕中血管内皮细胞生物学功能的研究

目的 探讨增生性瘢痕中血管内皮细胞的生物学功能及其与瘢痕形成的关系。方法 取人增生性瘢痕组织和正常皮肤组织，进行组织学观察。分离和纯化2种标本中的血管内皮细胞，应用酶联免疫吸附测定法分别检测单个血管内皮细胞中转化生长因子β1，（TGF-β1）、成纤维细胞生长因子2（FGF2）、血小板源性生长因子（PDGF）、内皮素1（ET-1）和血管内皮生长因子（VEGF）的水平。结果光学显微镜下可见正常皮肤微血管数目较少；增生性瘢痕微血管数目增多，血管狭长扭曲甚至闭塞。透射电镜可见增生性瘢痕中毛细血管管腔狭窄，有内皮细胞脱落。增生性瘢痕中血管内皮细胞分泌TGF-β1、PDGF、ET-1、VEGF、FGF2的水平分别为（60±8）、（30±4）、（0．12±0．03）、（52±5）、（18．1±1．2）μg／个细胞，明显低于正常皮肤（P〈0．05）。结论 增生性瘢痕中血管内皮细胞生物学功能减退，可能与瘢痕中胶原的大量产生和缺氧有关。