问号钩端螺旋体rLTB/rCTB-LipL32/1免疫保护作用及野生株LipL32基因表达和患者抗体检测

目的构建LTB—LipL32／1和CTB—LipL32／1融合基因原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫和佐剂活性及保护作用，了解问号钩端螺旋体(简称钩体)野生株LipL32基因携带、表达及钩体病人血清LipL32基因产物抗体产生频率。方法采用常规分子生物学技术构建LTB—LipL32／1和CTB—LipL32／1融合基因及其原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rLTB-LipL32／1及rCTB-LipL32／1表达情况。分别采用Western blot和GM1-ELISA检测rLTB-LipL32／1及rCTB—LipL32／1的免疫反应性和佐剂活性。采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株LipL32基因及其表达情况。采用ELISA检测228例钩体病人血清LipL32基因产物的抗体。采用豚鼠保护试验检测重组蛋白的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较，LTB—LipL32／1和CTB-LipL32／1融合基因核苷酸序列相似性分别为99．12％～99．71％和98．54％～99．42％，氨基酸序列相似性分别为97．58％-99．63％和96．77％～99．63％。rLTB-LipL32／1和rCTB—LipL32／1表达产量均约为细菌总蛋白的10％，并主要以包涵体形式存在。rLTB—LipL32／1和rCTB-LipL32／1均分别能与LipL32／1兔抗血清和牛GMI结合。97．9％(95／97)问号钩体野生株含有LipL32基因，95．9％(93／97)问号钩体野生株与rLipL32／1和rLipL32／2兔抗血清的MAT结果阳性。97．4％(222／228)和94．7％(216／228)的病人血清rLipL32／1和rLipL32／2抗体阳性。rLTB-LipL32／1、rCTB-LipL32／1和rLipL32／1豚鼠保护率分别为75．0％、75．0％～87．5％、50．O％～62．5％。结论成功构建了LTB—LipL32／1和CTB—LipL32／1融合基因及其原核表达系统。rLTB-LipL32／1和rCTB-LipL32／1融合蛋白有良好的抗原性和佐剂活性及一定的免疫保护作用，具有成为问号钩体属特异性疫苗的良好前景。LipL32／1是不同问号钩体血清群中广泛存在、序列保守、高频率表达的基因。     

乙型肝炎病毒感染的孕妇胎盘组织中CD3、CD68及IL-2的检测

目的：通过检测受到及未受到乙型肝炎病毒感染的胎盘组织中的CD3、CD68及IL－2，并对二加以比较探讨受HBV感染的孕妇胎盘组织中细胞介导的免疫应答反应情况。方法：对象分为：（1）30名乙肝病毒血清标志物阳性且胎盘亦受感染的孕妇，（2）11名乙肝病毒血清标志物阳性但胎盘未受感染的孕妇，（3）7名乙肝病毒血清标志物阴性胎盘也未受感染的孕妇。收集其胎盘组织标本，用免疫组织化学法分别检测胎盘组织中多种免疫细胞（每张切片随机选取10个放大200倍视野作细胞计数，然后取平均值）以及细胞因子。结果：各组CD3阳性的T淋巴细胞和CD68阳性的巨噬细胞（Hofbauer细胞）的相应平均计数分别为：第1组3．6和20．5，第2组1．0和12．2，第3组0．7和10．6。方差分析结果显示第1组两项指标与第2、3组比较有显差异（P＜0．01），而2、3组之间无差异（P＞0．05）。第1组感染HBV的胎盘中的IL－2阳性率为77．8％，而未感染HBV的第2组胎盘中阳性率为12．5％，第3组阳性率则为0，可以看出HBV感染的胎盘中CD3阳性的T淋巴细胞和CD68阳性的巨噬细胞数显增加，同时白介素2（IL－2）表达量也增加。结论：胎盘受到HBV感染时，T淋巴细胞和Hofbauer细胞介导的细胞免疫可能有所增强。     

乳腺癌患者外周血T细胞亚群与NK、NKT细胞检测的临床意义

目的:检测乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群及NK、NKT细胞表达率的变化,探讨乳腺癌患者免疫状况与肿瘤分期的关系以及免疫指标变化在治疗前后的临床价值。方法 :采用荧光标记法与多参数流式细胞仪检测40例正常女性和120例乳腺癌患者的总T淋巴细胞(CD3+)、T辅助/T诱导细胞(CD3+CD4+)、T抑制/细胞毒细胞(CD3+CD8+)、自然杀伤细胞(NK)、NK样T细胞(NKT)的表达率,并进行统计学分析。结果:无淋巴结转移组乳腺癌患者治疗前CD3+、CD3+CD4、CD3+CD8+、CD4+/CD8+与对照组比较无统计学意义,NK、NKT显著低于对照组(P<0.05)。淋巴结转移组乳腺癌患者CD3+、CD3+CD4、CD3+CD8+、NK、NKT表达率均明显低于对照组(P<0.05)。经过综合治疗后乳腺癌组各项免疫指标均恢复到正常值。结论:外周血T细胞亚群的检测对判断乳腺癌患者的病情、临床分期有一定意义;经过治疗后能够有效地改善乳腺癌患者的免疫状态。     

抗Plasmodium inui单克隆抗体亲和力的研究

本文对建立的两株抗Plasmodium inui单克隆抗体亲和力进行了研究,结果发现,通过混合及偶联单克隆抗体能显著提高抗体的亲和力,提高抗原检测试验的敏感性,同时减少用不同法方处理的抗原对抗原抗体反应亲和力的影响。