荧光定量PCR和ELISA检测乙肝病毒的应用比较

目的　探讨荧光定量PCR检测HBV—DNA的应用价值。　方法　从 2 92 0份用ELISA检测乙肝 5项的体检血清标本中 ,抽取 2 88份HBsAg阳性标本及 10 0份全阴标本 ,进行荧光定量聚合酶链式反应 (FQ—PCR)HBV—DNA定量分析。　结果　经FQ—PCR检测 ,80份HBsAg、HBeAg、HBcAb都阳性的标本 ,HBV—DNA阳性率为 10 0 % ( 80 /80 ) ,平均HBV—DNA拷贝数为 2 2× 10 8cp/ml ;164份HBsAg、HbeAb、HBcAb都阳性的标本 ,HBV—DNA阳性率为79 3 % ( 13 0 /164 ) ,平均HBV—DNA拷贝数为 1 5× 10 6cp/ml;12份HBsAg单项阳性的标本 ,HBV—DNA的阳性率为83 3 % ( 10 /12 ) ,平均HBV—DNA拷贝数为 1 6× 10 5cp/ml;10 0份HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb都阴性的标本 ,HBV—DNA的阳性率为 2 % ( 2 /10 0 ) ,平均HBV—DNA拷贝数为 4 5× 10 5cp/ml。　结论　FQ—PCR可以检测HBV的感染和复制情况 ,对准确报告HBV感染 ,指导其选择治疗方案和观察疗效具有重要的临床意义     

247例丙型肝炎病毒(HCV)RNA FQ-PCR定量结果分析

目的为了了解丙型肝炎病毒载量在两性间的流行状况.方法荧光定量PCR用于HCV RNA定量检测.结果男性患者阳性率为20.27%(30/148),病毒拷贝对数值为4.18±1.04;而女性分别为29.29%(29/99),4.28±1.07.结论男女HCV阳性病人的阳性率(P=0.103,χ2=2.656)和病毒量(P=0.487 ,t=0.699)在男女两性间无统计学差异.     

孕妇血浆中胎儿DNA的数量变化的研究

目的探讨孕妇血浆中胎儿游离DNA的数量变化的规律。方法提取68例孕妇血浆中的DNA,用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术检测其胎儿SRY基因,并对其中怀男胎孕妇外周血浆中的胎儿DNA的数量进行动态分析。结果在怀男胎的孕妇外周血中均检测到了SRY基因,而在怀女胎的孕妇中未检测到。胎儿游离DNA最早出现的时间平均为7.7周,SRY基因拷贝数平均为5.53copies/ml。随孕期的增加,母血浆中胎儿DNA的含量在逐渐增加,并得出各孕周的标准参考值。在分娩后母血中胎儿DNA的含量就显著下降,到分娩后第二天就完全不能检测到。结论孕妇外周血浆中游离DNA的含量变化具有一定的规律,可以利用其进行无创伤性产前诊断。     

涂片、培养和实时荧光定量PCR检测在妇科的临床应用

目的比较涂片革兰染色、培养和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测妇科性病淋球菌感染的临床应用价值,寻找一种快速而敏感的淋球菌检测方法.方法同时用涂片革兰染色、培养和FQ-PCR检测临床疑诊淋病123例女性阴道标本中的淋球菌,以培养法为"金标准",将另外两种方法与之比较,分别计算其敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值.结果涂片检出率为76.4%、培养法检出率为66.7%、FQ-PCR检出率为69.9%;经配对计数资料χ2检验,FQ-PCR与培养法的检出率比较差异无显著性(P＞0.05).涂片法和FQ-PCR法的敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值分别为94.2%、66.7%、87.2%、82.8%和97.6%、89.7%、95.3%、94.6%.结论FQ-PCR检测淋球菌,可弥补涂片法较粗糙、培养法耗时长的缺点.FQ-PCR具有准确快速,敏感性和特异性较高的特点,是一种具有临床应用价值的淋球菌快速定量检测方法.     

荧光定量聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒的实验研究

目的:探讨尖锐湿疣(CA)患者人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况及荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HPV与分型的临床意义。方法:用FQ-PCR测定292例CA患者疣体组织或分泌物的HPV6、11和HPV16、18及HPV-DNA载量。结果:292例CA患者标本中HPV-DNA阳性感染率95.55%,其中HPV6、11型感染率85.62%,HPV16、18型感染率22.95%,HPV6、11型和HPV16、18型混合感染的感染率为13.01%。定量测定结果显示:HPV6、11型患者病毒载量最高1.0×108copies/ml,最低2.8×103copies/ml;HPV16、18型患者病毒载量最高1.0×108copies/ml,最低2.75×104copies/ml。结论:FQ-PCR检测技术具有灵敏、简捷、安全、特异性等的特点,其定量检测的结果可为临床治疗及观察CA患者感染HPV后病情变化提供可靠依据,有较高的临床实用价值。     

全血标本冷藏保存一周对血清HBV DNA复测结果的影响

目的 探讨全血标本冷藏保存1周对血清乙肝病毒DNA(HBV DNA)复检结果的影响.方法 采集乙肝患者外周全血150例,及时2～8℃保存,分别于采血后第1天和第7天用实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测血清HBV DNA水平.结果 150例全血标本第1天、第7天时血清HBV DNA载量分别为:5.50±1.46、5.64±1.53,结果呈小幅升高趋势,但两组差异无统计学意义(P＞0.05);以第1天结果为基准,第7天时结果偏倚绝对值为(4.26±0.03)％,其中15例偏倚大于±7.5％.结论 以分析中质量控制为前提,全血标本冷藏保存l周对血清HBV DNA复测结果的影响符合ISO 15189室内质控要求,能满足临床追加检测或复查申请;操作误差和FQ-PCR方法学的不足仍是造成复测较大偏差的最主要原因.     

人乳腺珠蛋白基因表达和趋化因子CXCL16及CA153在乳腺癌诊断中的应用

目的探讨人乳腺珠蛋白(HMAM)、趋化因子CXCL16及CA153在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测50例女性体检者、134例良性乳腺肿瘤患者、129例乳腺癌患者和104例其他肿瘤患者外周血中HMAM mRNA,化学发光法检测CA153,ELISA检测CXCL16,分析三种标志物与乳腺癌患者临床组织学分期的关系、手术前后的差异及联合检测在乳腺癌诊断中的应用。结果乳腺癌组HMAM、CA153和CXCL16水平高于对照组和良性乳腺肿瘤组,HMAM和CA153水平高于其他肿瘤组(P<0.05)。乳腺癌组HMAM、CA153和CXCL16水平在手术后均下降,Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)。HMAM的检测特异性最强,CXCL16的检测灵敏度最高;CA153和CXCL16联合检测可提高灵敏度和阴性预测值;HMAM、CA153和CXCL16联合检测的特异性和阳性预测值高于CA153和CXCL16联合检测,HMAM、CA153和CXCL16联合检测的灵敏度、阳性预测值和阴性预测值高于单一指标检测(P<0.05)。结论HMAM和CA153对乳腺癌预后有一定的预测作用,HMAM、CA153、和CXCL16对术后随访有意义,联合检测有助于提高对乳腺癌诊断的早期诊断。     

HBV免疫标志物及DNA检测结果分析

目的通过了解HBV免疫标志物(HBVM)与HBV DNA的相互关系,为临床诊断和治疗乙肝提供可靠的依据。方法收集1156例受检者临床血清标本,同时采用酶联免疫吸附试验检测HBVM和荧光定量PCR检测HBV DNA,比较HBVM不同血清模式HBV DNA检出率及其含量,分析HBVM与HBV DNA之间的关系。结果血清HBV DNA阳性检出率及其量与HBVM有关,HBsAg、HBeAg抗HBc阳性血清模式组与其它各组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论HBeAg与HBV DNA含量明显相关;HBeAg阴性不能代表病毒复制停止。     

PA感染与定植中细胞因子变化的研究

目的探讨铜绿假单胞菌外毒素(PEA)在铜绿假单胞菌肺部感染及定植表达差异的临床价值。方法 SD大鼠180只,随机分为PA(铜绿假单胞菌)感染模型组,PA咽部定植组及生理盐水对照组。取肺组织HE染色光镜下观察肺部炎症情况。结果①细菌培养结果:模型组在接种后肺组织PA菌落数明显升高;定植组咽拭子培养见大量PA生长;定植组及对照组肺组织未见PA菌生长;②模型组血清IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α表达在接种后第3、7、11天均明显高于定植组及对照组(其差异有统计学意义)。结论血清细胞因子IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α检测有助于对铜绿假单胞菌感染与定植的鉴别诊断。     

HBsAg阳性者前S1抗原和HBV DNA检测的相关性探讨

目的 探讨HBsAg阳性者血清中HBV DNA及乙型肝炎病毒前S1抗原(PreS1Ag)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的关系及其临床应用价值.方法 对368例临床血清标本采用ELISA方法检测HBeAg和PreS1Ag,荧光定量PCR法检测HBV DNA.结果 HBeAg阳性组PreS1Ag阳性率为87.2%,HBV DNA阳性率为91.0%;HBeAg阴性组PreS1Ag阳性率为54.7%,HBV DNA阳性率为55.7%.患者血清PreS1Ag与HBV DNA结果无明显差异(P>0.05).结论 PreS1Ag与HBV DNA符合率较高,比HBeAg更能反映病毒复制情况,可作为一项新的病毒复制指标.