Dectin-2受体介导宿主抵抗烟曲霉菌感染的研究

目的探讨C型凝集素受体Dectin-2在烟曲霉菌感染中的作用及机制。方法用紫外线灭活的烟曲霉菌膨胀态分生孢子刺激野生型(wild type, WT)和Dectin-2缺失(Clec4n-/-)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow derived macrophages, BMDMs)。刺激20min及40min后，利用Western印迹法检测BMDMs中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase, Syk)和核转录因子κB抑制因子(inhibitor-κB, IκBα)的磷酸化水平。刺激16h后，利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测BMDMs细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL-12p40的水平。另一方面，利用压舌感染的方法在WT和Clec4n-/-小鼠中构建烟曲霉菌肺部感染模型。感染2d后，统计小鼠整个肺脏荷菌量，并检测肺脏匀浆液中IL-6和IL-12p40水平。结果体外试验提示，烟曲霉菌刺激后，Dectin-2缺失的BMDMs中Syk和IκBα的磷酸化水平及IL-6、TNF-α和IL-12p40水平显著下降(P＜0.05)。体内试验发现，烟曲霉菌感染后，Dectin-2缺失小鼠中肺脏荷菌量显著升高(P＜0.05)，肺脏匀浆液内IL-6、IL-12p40水平显著降低(P＜0.05)。结论C型凝集素受体Dectin-2激活烟曲霉菌诱导的NF-κB信号通路并介导促炎细胞因子的产生，可在小鼠肺烟曲霉菌病动物模型中发挥保护性作用。     

1例罕见烟曲霉菌多发性感染抢救成功的体会——求实和负责是关键

<正> 1 病例简介与救治进程 患者男性,1月2日因抽搐入院。有多年饮酒史(0.5～1kg/d),查体:皮肤黄染,总胆红素、结合胆红素显著升高,谷氨酰转移酶1000u/L,硷性磷酸酶288u/L,白细胞30×10~9/L,持续发烧,腹部及双下肢水肿明显,B超:全肝浊肿,CT:明显脑萎缩。初诊:癫痫,酒精性肝病并肝毛细胆管炎,酒精性脑损害。予以多种抗菌素(包括三代头胞和泰能)消炎,护肝利胆消肿,大量激素治疗,水肿消失,但出现严重的真菌感     

烟曲霉的致病因子及作用机制的研究进展

早已认识到,真菌与宿主相互作用过程中可产生某些毒性因子或代谢产物,通过消弱机体的防御能力而促进感染的形成.近年来,烟曲霉(Aspergillus fumigatus)已成为临床上仅次于白色念珠菌的一种重要的条件致病真菌,其某些成分或毒素可直接造成机体损害,或降低机体防御能力而有利于曲毒感染形成或扩散,致侵袭性曲霉病,严重可危及生命.     

312例真菌性鼻窦炎患者检出真菌的分布及耐药性分析

目的:分析312例真菌性鼻窦炎患者检出真菌的分布及耐药特点.方法:选取2019年9月-2020年9月医院收治的312例真菌性鼻窦炎患者作为研究对象,患者行鼻内窥镜术时收集脓液标本行真菌培养与药敏试验,分析不同年龄段患者的真菌分布情况,以及348株真菌的构成比与常见真菌的耐药情况.结果:312份脓液标本共检测出348株真菌,其中1～18岁患者28株(8.05％),18～40岁患者93株(26.72％),41～60岁患者185株(53.16％),60岁以上患者42株(12.07％);348株真菌中常见3种为曲霉菌135株(38.79％),烟曲霉菌87株(25.00％),尖端赛多孢子菌22株(6.32％);常见真菌对伏立康唑、酮康唑、咪康唑、氟胞嘧啶、制霉菌素的耐药率较高,对两性霉素B、伊曲康唑、米卡芬净、阿尼芬净的耐药率较低.结论:中青年人群是真菌性鼻窦炎主要发病群体,真菌多以曲霉菌为主;在临床实际工作中,医生需按不同年龄患者自身具体情况及真菌培养与药敏试验结果,合理选用抗真菌药物治疗,以减少耐药现象的发生.     

烟曲霉感染时NADPH氧化酶通过诱导活性氧活化巨噬细胞自噬

目的研究NADPH氧化酶(NOX)参与烟曲霉孢子诱导巨噬细胞自噬及其作用机制。方法取对数生长期的RAW264.7细胞,随机分为3组:以烟曲霉孢子刺激的处理组、烟曲霉孢子联合NOX抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(DPI)的处理组和无处理的空白组。细胞作用2 h后荧光显微镜观察细胞内二氯荧光黄亮度以检测活性氧(ROS)水平,免疫印迹法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达量,免疫荧光技术观察LC3的表达与定位。结果烟曲霉孢子刺激后RAW264.7细胞的ROS与LC3BⅡ表达水平显著升高,同时LC3呈斑点状聚集并与烟曲霉孢子共定位;以DPI抑制后ROS与LC3 BⅡ表达量与空白组相比无明显变化,并且LC3在细胞内弥散分布。结论烟曲霉感染时NOX通过产生ROS活化巨噬细胞自噬。     

绿原酸联合两性霉素B对烟曲霉菌生物膜干预作用的体外研究

目的探讨绿原酸(CRA)对早期(24h)、成熟期(48h)烟曲霉菌生物膜(BF)的破坏及其联合两性霉素B(AMB)的杀菌作用,为临床烟曲霉菌BF相关性感染的治疗提供参考依据。方法构建体外烟曲霉菌24、48h BF模型,分空白组、CRA组、AMB组、CRA+AMB组;两倍稀释法测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC);结晶紫法定量BF;扫描电镜(SEM)观察BF的形态。结果受试菌株经培养24、48h后可形成稳定BF,各组药物作用48h后BF定量显示,早期和成熟期BF空白组和单独AMB组相比差异均无统计学意义,而早期的CRA组较空白组和AMB组的BF减少(P<0.05),与CRA组相比,CRA+AMB组BF则进一步减少(P<0.05);成熟期的CRA+AMB组与空白组、单独AMB组或CRA组比较,BF也明显减少(P<0.05);SEM观察早期和成熟期BF,CRA组均较空白组和AMB组胞外基质明显减少,CRA+AMB组胞外基质和菌丝均显著减少。结论绿原酸可以破坏早期和成熟期生物膜,与AMB联合可以增强AMB对生物膜的渗透性,与AMB具有协同杀菌效果。     

TLR2对曲霉感染支气管上皮细胞时Dectin-1表达的影响

目的 探讨烟曲霉感染人支气管上皮（HBE）细胞时Toll样受体2（TLR2）对树突状细胞植物血凝素-1 （Dectin-1）表达的影响.方法 建立烟曲霉感染HBE细胞模型,通过PCR、Western blot方法分别在mRNA、蛋白水平检测Dectin-1和TLR2的表达情况;沉默TLR2,复制感染模型,应用Western blot及流式细胞技术评价Dectin-1的表达变化.结果 ①烟曲霉感染后HBE细胞TLR2表达水平虽然有所升高,并在感染18h达到峰值,但与静息状态表达水平的差异无统计学意义（P＞0.05）.②沉默TLR2,在烟曲霉感染HBE细胞后18 h时Dectiin1的蛋白表达受到显著抑制（P＜0.05）.结论 HBE细胞静息状态下能够表达TLR2,在烟曲霉感染早期,随着时间的延长其表达有逐步增高的趋势;HBE细胞启动Dectin-1的表达可能是建立在TLR2对烟曲霉早期识别的基础上,通过下游信号通路的激活来实现的。     

烟曲霉致病相关因子的研究进展

毒力因子是在病原体适应生存环境的过程中产生.烟曲霉毒力是多因素相关的,包括微小的孢子结构使之能够吸入到达宿主的肺泡,耐热特征,疏水性,快速的繁殖速度以及抵抗氧化应激反应的能力.此外,烟曲霉适应环境及代谢相关的蛋白、通路信号分子、脂类代谢产物、毒素等均可看作毒力因子.