酶法浸提枸杞的研究

通过对外源酶酶解枸杞效果的研究，结果表明：外源酶能显著提高枸杞浸提液中可溶性固形物和营养成分的含量，其单一纤维素酶和木瓜蛋白酶浸提枸杞的适宜pH值分别是5．0～5．5和pH值6．0，适宜的酶质量浓度分别为0．20g／dL和0．40～0．60g／dL，温度分别为55．C和65℃，适宜时间都为50-60min；两种酶组合浸提枸杞的较适pH值、温度、时间和酶组合分别为pH值5．5～6．0，55-60℃．50min和0．20g／dL纤维素酶＋0．40g／dL木瓜蛋白酶。     

其他植物产品专利题录及专利号

●含姜根、茴香籽、胡椒薄荷、从番木瓜树衍生的木瓜蛋白酶、从菠萝衍生的菠萝蛋白酶等组方的饮食和维生素补充剂治疗和减轻胃肠道功能紊乱US2006115468-A1●山楂、枣和人参提取物治疗肝癌或胃癌、前列腺癌或乳腺癌WO2006059104-A1●含银杏叶、黄杞、茶叶、香蜂花叶和茎以及花生皮提取物的过敏原减活剂用于花粉或螨类过敏原失活JP2006143700-A●以香液和山茶油为活性成分的皮肤外用剂防治过敏、炎症和瘙痒病症JP2006143659-A●含玛卡和王浆提取物的药品和食品补充剂防治自主失调如身体不适、疲劳和头痛JP2006143664-A●用石胡荽属Cen…     

SARS-CoV-2 PLpro在对IFN-α应答的肝细胞中独立诱导过度炎症相关坏死性死亡

目的：探讨新型冠状病毒（SARS-CoV-2）木瓜蛋白酶样蛋白酶（PLpro）在对干扰素α(IFN-α)应答的肝细胞中所介导的功能蛋白质组改变及其效应机制。方法：构建稳定表达PLpro的三株单克隆Huh7肝细胞（PLpro1～3）和对应的空载细胞（NC）,分别以IFN-α刺激各株细胞建立处于IFN-α应答状态的肝细胞模型,采用数据非依赖质谱分析PLpro和NC组的定量蛋白质组,以生物信息学分析,预测PLpro对IFN-α应答性肝细胞的作用机制,并采用RT-qPCR、Western blot、细胞促炎因子水平分析、乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性分析和Annexin V-Alexa Fluor 647/PI凋亡检测等方法对上述机制进行生物学验证。结果：IFN-α可显著上调空载Huh7细胞株（NC细胞）中的ISG化蛋白（P<0.01）,而相同条件下,PLpro细胞蛋白的ISG (IFN-stimulated gene)化修饰被显著下调（P<0.01）,表明PLpro细胞株表达了具去ISG化活性PLpro,提示本研究成功建立了细胞模型。质谱分析鉴定和定量得到5 619个交集蛋白质和1...     

玻璃酸钠对关节腔内注入木瓜蛋白酶所致兔膝关节退行性改…

采用在兔膝关节内注入木瓜蛋白酶造成的膝关节退行性改变模型，考察关节腔内长期多次注射玻璃酸钠对这种退行性改变的抑制和改善作用。结果表明：玻璃酸钠对已造成退行性改变的关节软骨有减轻和改善其病变程度的作用。     

不同自身抗体吸收法的比较与分析

目的：通过比较和分析不同的自身抗体吸收法,寻找一个合适、经济和有效的自身抗体吸收法,以更好地筛选和鉴定自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者血清中的同种抗体。方法取20例 AIHA 患者血清,分别采用木瓜蛋白酶自身红细胞温吸收法、聚乙二醇（PEG）自身红细胞温吸收法、木瓜蛋白酶同种红细胞吸收法和 PEG 同种红细胞吸收法对自身抗体进行吸收,比较吸收时间、吸收次数、吸收后血清抗体鉴定结果。结果 PEG 同种红细胞吸收法平均每例吸收1．8次,明显低于木瓜蛋白酶同种红细胞法的平均值4．1次（P＜0．05）。两种方法平均吸收时间分别为90．0 min 和225．1 min ,二者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。两种吸收方法同种抗体的特异性、效价检测结果一致,均为 RH 系统的同种抗体。结论 PEG 法可以快速、经济和有效去除 AIHA 患者血清中的自身抗体,便于同种抗体鉴定。     

抗体Fc片段的离子交换法制备和印渍法鉴定

免疫球蛋白经羧甲基纤维素(CM22)柱交换,并用增加盐浓度分段洗脱,可分得4个蛋白峰。其中,用0.1M醋酸钠缓冲液洗脱出的3个蛋白峰具Fc性质,而用0.225M醋酸钠缓冲液洗脱的蛋白质不与葡萄球菌A蛋白(SPA)相结合。将具Fc性质的组分合并,由木瓜蛋白酶消化后,各蛋白质片段再经CM22柱分段洗脱,得到5个蛋白峰。分离出的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳后转移至滤膜上。膜上各蛋白质用SPA-HRP探针作酶分析,从而鉴定IgG的Fc片段。实验提示,0.225M醋酸钠缓冲液洗脱出的蛋白蜂是抗体Fc片段。     

可溶性固定化木瓜蛋白酶的制备及其性质研究

目的 制备一种可溶性固定化木瓜蛋白酶并对其部分酶学性质进行研究.方法 将木瓜蛋白酶偶联在亲水性高分子聚合物羧甲基纤维素醋酸琥珀酸酯(AS-L)上制备得到水溶性固定化木瓜蛋白酶.在相同的条件下测定游离的木瓜蛋白酶和水溶性固定化木瓜蛋白酶的活力,得到两种状态的酶的最适作用pH值和最适作用温度,再于它们各自的最适条件下测定活力,得到各自的Km值;在相同的条件下测定两种状态的酶的热稳定性、酸碱稳定性、低温稳定性和回收稳定性.结果 游离木瓜蛋白酶和可溶性固定化木瓜蛋白酶的最适作用pH值分别为6.0和5.0,最适作用温度分别为60℃和70℃,Km值分别为2.53、3.07mg·ml-1;可溶性固定化木瓜蛋白酶在60℃条件下,保温12h,仍有62%的活性;在4℃条件下,30d后活性保留达90%以上;在pH6.0时稳定性最好,在pH4.0-7.0范围内也比较稳定(相对活性＞80%).结论 可溶性固定化木瓜蛋白酶能够在pH5.5以上的溶液中完全溶解,最适作用pH值范围变窄,最适作用温度和Km值升高;热稳定性和酸碱稳定性均明显增强.     

木瓜蛋白酶与石膏制动建立兔膝骨关节炎模型的比较

目的 比较木瓜蛋白酶关节腔注射与关节石膏伸直位制动建立兔膝骨关节炎模型的效果.方法 将21只实验兔采用随机区组分组法分为正常组、木瓜蛋白酶组及石膏组,每组7只.木瓜蛋白酶组予6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液于实验开始第1、4、7天行右膝关节腔注射,注射结束4周后造模完成;石膏组予膝关节伸直位固定6周;记录实验期间动物不良情况发生率,造模完成后处死实验兔,取软骨标本进行大体观察、Pelletier评分、Mankin′s评分,免疫组化测定软骨Ⅱ型胶原蛋白含量, ELISA法检测血清和关节液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)以及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的含量.结果 大体观察显示木瓜蛋白酶组与石膏组均出现关节肿胀、关节间隙变窄、软骨缺损、滑膜增生硬化、炎症改变、骨赘形成;Pelletier 评分、Mankin′s 评分、Ⅱ型胶原蛋白含量、血清和关节液中TNF-α、COMP以及MMP-3的含量,木瓜蛋白酶组、石膏组与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);木瓜蛋白酶组与石膏组比较,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05).木瓜蛋白酶组动物不良情况发生率明显低于石膏组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 木瓜蛋白酶关节腔注射与石膏关节伸直位制动均能成功建立膝骨关节炎模型,但木瓜蛋白酶关节腔注射法更为快捷、简便,并发情况少,可行性好.     

4种检测IgG红细胞抗体方法的比较

目的比较木瓜蛋白酶、抗球蛋白实验、聚凝胺和微柱凝胶4种检测IgG红细胞抗体方法的特异性、敏感性、效价及所需时间.方法将12种IgG抗体:抗-D、抗-E、抗-C、抗-c、抗-e、抗-Jka、抗-Jkb、抗-Fya、抗-Fyb、抗-k抗-S、抗-s分别采用上述4种方法检测.结果木瓜蛋白酶检出了抗-D、抗-E、抗-C、抗-c、抗-e、抗-Jka、抗-JKb7种抗体(7/12);抗球蛋白试验检出了所有12种抗体(12/12);聚凝胺法检出了除抗-k以外的抗体(11/12);而微柱凝胶也检出了所有12种抗体(12/12).木瓜蛋白酶检测Rh及Kidd血型系统的抗体效价低于其它3种方法,而微柱凝胶检测这12种抗体效价较其它3种方法更为敏感.4种方法检测IgG抗体所需时间分别为:木瓜蛋白酶45min,抗球蛋白实验60min,聚凝胺5 min,微柱凝胶30 min.结论木瓜蛋白酶检测IgG抗体具有一定的局限性;抗球蛋白实验因需要反复洗涤红细胞费工费时;聚凝胺是目前最快速简便检测IgG抗体的方法;而微柱凝胶是检测IgG抗体最为敏感的方法.     

薄层层析和反相高效液相色谱检测木瓜蛋白酶催化合成的Aspartame及其中间产物

本文报道以TLC和HPLC法检测以木瓜蛋白酶在水-乙酸乙酯两相反应体系中合成的Aspartame及其中间产物（I）（Ⅱ）。TLC条件为：展开剂（正丁醇：冰醋酸：水=3：1：1），展开时间（4-5h)，检测（荧光检测253.7nm，1%茚三酮丙酮溶液显色）。HPLC条件为：流动相（乙腈：水=45：55），流速1ml/min，检测（紫外检测260nm)，进样量20ul,灵敏度6，纸速1-4mm/min，分析周期10min。该方法简便、准确、灵敏度高。用该方法也证实以木瓜蛋白酶催化合成的Aspartame及其中间产物（Ⅱ）与以嗜热蛋白酶（Thermolysin)催化合成的Aspartame及其中间产物（Cbz-Asp-PheOMe)完全一致。