非鼻咽部T细胞淋巴瘤与EB病毒的相关性

目的：探讨EB病毒（EBV）感染与非鼻咽部T细胞淋巴瘤的关系。方法：用单克隆抗体UCHL-1、L26及EB病毒编码的潜在膜蛋白-1（LMP-1），免疫组化染色确定肿瘤的免疫表型及EB病毒转化蛋白的表达。采用原位杂交方法检测EBV编码的EBERs。结果：21例非鼻咽部T细胞淋巴瘤EBERs5例阳性的（23．8％），其中给内淋巴瘤3例，肺和胃肠淋巴瘤各1例。阳性细胞约占肿瘤细胞的10％～70％。5例EBERs阳性病例中仅1例表达LMP-1，为结内淋巴瘤。结论：非鼻咽部T细胞淋巴瘤可能与EBV的感染有关，LMP-1的阳性率较EBERs低。     

汉赛巴尔通体的研究进展

随着经济全球化和新发传染病在世界范围内的不断涌现，一种新发的虫媒传染病——巴尔通体感染，越来越引起人们的广泛关注。汉赛巴尔通体（Bartonella henselae）是巴尔通体属中重要的致病菌之一，直到20世纪90年代才被发现，由于其对动物和人的广泛致病性和复杂的临床特征，已引起国内外学者的兴趣。本研究针对汉赛巴尔通体的流行病学、临床诊断及治疗、实验室诊断、动物易感性及传播媒介等方面做一综述。     

汉赛巴尔通体媒介和宿主的实验室研究进展

汉赛巴尔通体（Bartonella henselae）是一类革兰阴性的兼性厌氧菌，属于α-变形杆菌纲（Alphaproteobacteria）、根瘤菌目（Rhizobium）、巴尔通体科（Bartonellaceae）、巴尔通体属（Bartonella），该种又可分为2个亚型即：Houston型和Marseille型。汉赛巴尔通体为致病巴尔通体，可以引起猫抓病（CatScratch Disease，CSD）、慢性淋巴结病、心内膜炎、杆菌样血管肉瘤杆菌样紫瘢（BAP）、视神经病变等，其中以CSD最为普遍。     

EBV－DNA酶全基因扩增克隆和鉴定

根据Ｂｅａｒ的ＥＢ病毒（ＥＢＶ）基因全序列，设计包括ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶全基因的一对引物，在引物上设计有一个ＳａｌⅠ切点，以便于克隆。选用蛋白酶Ｋ裂解的Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ为模板，扩增出一条１４６０ｂｐ的特异条带，纯比后经ＴａｑⅠ酶切形成１１９８ｂｐ和２６２ｂｐ的两个片段，证实该扩增片段即为ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶的全基因片段。以ＪＭ１０３为宿主菌，以高效表达质粒ＰＢＶ２２１为载体，按常规方法作酶切、连接、转化，最后在含氨中青霉素的培养基上挑取单菌落扩大培养，用快速法少量制备质粒ＤＮＡ。根据质粒电泳结果粗筛，再行ＢａｍＨⅠ酶切初步鉴定，确定质粒大小为５１１７（１４５１＋３６６６）ｂｐ的菌落为阳性克隆。先后用ＢａｍＨⅠ和ＴａｑⅠ消化阳性重组体，以形成１２００ｂｐ和３９１７ｂｐ两片段的确定为正向连接重组体。本实验首次将ＥＢＶ－ＤＮＡ酶全基因片段克隆到高效表达载体ｐＢＶ２２１上获得成功     

鼻咽癌患者鼻咽组织和血清中EBV检测

目的：比较血清爱泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）抗体滴定度测定与癌组织ＥＢＶ基因组检测对鼻咽癌（ＮＰＣ）的诊断价值。方法：１４６例患者采用双盲法测定血清ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ,ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ和活检组织ＥＢＶ－ＤＮＡ（ＰＣＲ）。全组病例按活检病理检查结果分析：ＮＰＣ组,非ＮＰＣ组（对照组）。结果：ＮＰＣ组中ＥＢＶ－ＤＮＡ（ＰＣＲ）,ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ和ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ的阳性率分别为９０．８％     

淋巴组织增生性疾病组织中EB病毒的原位杂交检测

目的探讨ＥＢ病毒与我国各类淋巴组织增生性疾病的关系。方法以ＥＢ病毒ＬＭＰ基因为探针,对２１４例淋巴组织增生性疾病组织中ＥＢ病毒进行原位杂交检测,并用ＳＹＳＴＡＴ软件对实验结果进行分析。结果霍奇金淋巴瘤（ＨＤ）、非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）、淋巴组织良性增生（ＢＬＰ）组织中ＥＢ病毒阳性率分别为３０．０％（１５／５０）,１４．０％（１８／１２９）及２．９％（１／３５）。在ＮＨＬ中,高度恶性（ＨＮＨＬ）、中度恶性（ＭＮＨＬ）及低度恶性（ＬＮＨＬ）ＥＢ病毒阳性率分别为２８．１％（９／３２）、１０．５％（９／８４）及０％（０／９）。ＨＤ与ＨＮＨＬ间ＥＢ病毒阳性率均显著高于ＢＬＰ（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）,ＭＮＨＬ和ＬＮＨＬ与ＢＬＰ间ＥＢ病毒阳性率差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论ＥＢ病毒与ＨＤ及ＨＮＨＬ的发生有关,而与ＭＮＨＬ及ＬＮＨＬ的发生关系不大。     

EB病毒与原发性鼻咽部B细胞性淋巴瘤有关与继发性者无关

目的：对１９ 例鼻咽部Ｂ细胞性恶性淋巴瘤与ＥＢ 病毒（ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒ ｖｉｒｕｓ,ＥＢＶ） 感染的相关性进行研究。方法：利用免疫组织化学及原位杂交方法对ＥＢＶ 进行检测,并用免疫组化及原位杂交双染法标记肿瘤细胞,以鉴定ＥＢＶ阳性的细胞为Ｂ淋巴瘤细胞。结果：ＥＢＶ 编码的小ｍ ＲＮＡ探针（ＥＢＥＲ） 原位杂交显示,８ 例原发性鼻咽部Ｂ细胞性恶性淋巴瘤中３ 例绝大多数肿瘤细胞呈阳性表达,１ 例潜在性膜蛋白１（ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １,ＬＭＰ１）阳性。而１１ 例继发性鼻咽部Ｂ细胞性恶性淋巴瘤ＥＢＥＲ全部为阴性。全部病例进行了ＬＭＰ１ 检测,除１ 例原发者,全部阴性。利用ＥＢＥＲＩＳＨ（ＥＢＥＲ原位杂交） 和免疫组化ＣＤ 标记物进行双标记染色证实,ＥＢＥＲ 和ＬＭＰ１阳性细胞为ＣＤ２０ 阳性,ＣＤ４５ＲＯ 阴性。鼻咽部原发性Ｂ细胞性恶性淋巴瘤ＥＢＶ 表达４／８ ,而继发者为０／１１。结论：ＥＢＶ 与鼻咽部原发性Ｂ细胞恶性淋巴瘤有较高的相关性,而与继发性者无关。     

EGCG干预LMP1激活的AP-1信号转导通路

目的　探讨EGCG对鼻咽癌细胞激活蛋白 1(AP 1)信号转导通路的干预作用 ,阐明在鼻咽癌细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)活化的AP 1信号转导通路中靶分子的机制。方法　采用EB病毒阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1 LMP1细胞。利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察EGCG对CNE1和CNE1 LMP1细胞的生存率的影响。采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对AP 1活性的作用。利用间接免疫荧光法观察EGCG对JNK核移位的影响 ,再分别提取CNE1和CNE1 LMP1的胞浆及胞核蛋白 ,Westernblot分析EGCG抑制JNK的核移位后 ,胞浆及胞核蛋白中JNK的变化。采用Westernblot分析EGCG对c Jun的磷酸化水平的影响。采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对cyclinD1启动子活性的影响 ,并用Westernblot分析EGCG对cyclinD1蛋白表达的作用。结果　EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性 ,并可抑制AP 1的活性。EGCG能抑制JNK的核移位 ,并抑制c Jun的磷酸化。EGCG对AP 1信号通路下游的靶基因cyclinD1的启动子活性及其蛋白表达都有抑制作用。结论　EGCG对信号转导通路上的AP 1、JNK、c Jun、cyclinD1多个靶点分子具有干预作用。LMP1是EB病毒这种编码的蛋白 ,因此 ,EGCG抑制与病毒相联系的信号转导通路 ,可能是EGCG抑制与病毒相关的肿瘤的分子机     

利用分子生物学方法检测鼻咽癌颈部转移性淋巴结中EB病毒基因研究(二)

目的利用分子生物学方法聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＳＢＨ）为隐性鼻咽癌和原发灶不明的颈部转移癌提供诊断和鉴别诊断的参考依据。材料与方法利用ＰＣＲ基因扩增技术和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交检测经针吸活检取材或活检取材的２０例鼻咽癌（ＮａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌＣａｒｃｉｎｏｍａ，ＮＰＣ）（实验组）３３份标本和２６例非鼻咽癌（对照组）２７份标本中ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）。结果在ＮＰＣ组中ＥＢＶ基因检测，１７／２０例是阳性，１８份针吸活检取材标本中１３／１８呈阳性；对照组中仅３／２０例ＥＢＶ检测呈阳性，其中２例为霍奇金病，１例鼻咽腺样增殖体。结论ＥＢ病毒基因检测结果再次显示本研究能准确地为隐性鼻咽癌提供诊断和鉴别诊断的参考依据，而且针吸活检取材较石腊切片取材更省时，痛苦小而经济。应强调的是分析ＥＢＶ检测结果应与病理，临床检查相结合     

山东省家猫检出汉赛巴尔通体

汉赛巴尔通体是一种可引起人类猫抓病的革兰染色阴性、营养条件要求苛刻兼性细胞内寄生的需氧杆菌,猫是汉赛巴尔通体的自然宿主,人通过猫抓伤或咬伤而感染患病.为了解家猫巴尔通体感染状况,我们于2005年4月在山东省采集家猫血液,进行巴尔通体分离培养及检测鉴定.