淫羊藿、巴戟天中药提取物对恒河猴M0、M1型单核衍生巨噬细胞基因表达的影响

【目的】探讨中药淫羊藿、巴戟天提取物(中药注射液喘可治的组成)对恒河猴单核衍生的巨噬细胞在未极化(M0)、M1极化条件下基因表达的影响,分析其可能的免疫调节的作用机制。【方法】采用密度梯度离心法分离中国恒河猴外周血单个核细胞(PBMCs),采用贴壁法纯化出单核细胞,并以粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激5 d以使单核细胞分化成巨噬细胞;然后不加入极化因子(M0)或以干扰素γ(IFN-γ,继续培养2 d)诱导巨噬细胞极化为M1表型,同时分别加入淫羊藿、巴戟天提取物进行干预;然后提取m RNA并逆转录后,采用实时荧光定量PCR检测CCR5、CD4、CTLA-4、Fox P3、IDO、IL-10、TGF-β等基因表达量。【结果】与空白对照组比较,加入巴戟天提取物培养的M0巨噬细胞基因表达上调不明显;经淫羊藿提取物培养的M0巨噬细胞,CCR5基因表达量上调4.21倍,TGF-β上调7.66倍,Fox P3、IL-10轻度上调,而CD4、CTLA-4、IDO等基因表达改变倍数无明显变化。经巴戟天提取物刺激的M1型巨噬细胞,CTLA-4基因表达量上调3.22倍,Fox P3上调3.69倍,CCR5、CD4、IL-10、IDO基因改变倍数均无明显变化,TGF-β未测出;而由淫羊藿提取物刺激的M1型巨噬细胞,IL-10的表达量上调11.83倍,Fox P3上调4.55倍,IDO、CCR5、CD4、CTLA-4基因改变倍数无明显变化,TGF-β未测出。【结论】巴戟天和淫羊藿提取物培养能够上调M1型巨噬细胞IL-10、Fox P3、CTLA-4等抑炎基因表达,淫羊藿提取物能够上调M0巨噬细胞CCR5和TGF-β等基因表达,促进病原体清除和组织修复,从而发挥多效免疫调节作用。     

微小RNA-1266对钠通道蛋白表达和分布的影响

目的探讨心房颤动(AF)相关微小RNA-1266-5p(miR-1266-5p)与AF相关钠离子通道蛋白α亚基编码基因SCNA5的靶向调控关系。方法构建含有预测结合位点3'非翻译区(3'UTR)序列的靶基因,将其与阴性对照质粒以及miRNA共转染入人胚肾HEK293细胞,实验分为空白对照组、阴性对照组、实验一组(pc DNA3. 1-SCN5A 3'UTR改建质粒+miR-1266)和实验二组(pc DNA3. 1-SCN5A WT质粒,不含3'UTR端+miR-1266),荧光定量PCR法和Western blot法检测各组钠通道蛋白SCN5A mRNA和Nav1. 5蛋白表达变化,免疫荧光实验观察SCN5A Nav1. 5蛋白表达和分布变化。结果与空白对照组和阴性对照组比较,实验一组SCN5A mRNA表达分别下调49. 4%和46. 0%,差异有统计学意义(0. 557±0. 016 vs 1. 101±0. 132和1. 031±0. 020,P 0. 05),而实验二组SCN5A mRNA表达无显著变化(P 0. 05);实验一组SCN5A Nav1. 5蛋白表达下降,而实验二组SCN5A Nav1. 5蛋白表达无显著变化;实验一组和实验二组的SCN5A Nav1. 5蛋白分布都无显著变化。结论 SCN5A可能是miR-1266的直接靶基因,miR-1266可能通过负性调控SCN5A表达参与AF电重构。     

IFI 30、PD-L1在人脑胶质瘤中的表达及与病人预后的关系

目的 探讨γ干扰素诱导蛋白30（IFI 30）、程序性死亡因子配体1（PD-L1）在人脑胶质瘤中的表达及与病人预后的关系。方法 选择2015年5月~2019年5月手术切除的103例人脑胶质瘤组织和瘤旁组织，采用免疫组织化学染色检测IFI 30、PD-L1表达情况。随访24个月，记录无进展生存期和总生存期。结果 胶质瘤组织IFI 30、PD-L1高表达率[分别为70.87%（73/103）、68.93%（71/103）]明显高于瘤旁组织[分别为19.42%（20/103）、21.36%（22/103）；P<0.001]。胶质瘤组织IFI 30表达水平与PD-L1表达水平呈明显正相关（r=0.583，P<0.05）。随访24个月，生存75例，死亡28例；多因素logistic回归分析显示，IFI 30高表达、PD-L1高表达是增加病人死亡风险的独立危险因素（P<0.05）。生存曲线分析显示，IFI 30高表达组2年累积生存率（64.52%）和2年累积无进展生存率（65.56%）均明显低于低表达组（分别为82.25%、89.45%；P<0.05）。PD-L1高表达组2年累积生存率（61.78%）和2年累积无进展生存率（60.14%）均明显低于低表达组（分别为88.52%、79.86%；P<0.05）。结论 人脑胶质瘤组织IFI 30、PD-L1呈高表达，与病人不良预后密切相关。     

介入性肺脏病学在早期非小细胞肺癌诊断及治疗中的应用

肺癌的治疗非常复杂,需要多学科联合来提供综合治疗。介入性肺脏病学是利用微创的方式为疑似肺癌的患者进行初步诊断和分期,在目前仍是一个不断发展的学科领域。支气管超声引导下的对纵隔淋巴结采样进行分期,同时进行驱动突变检测是早期和晚期肺癌诊断及治疗的重要工具,支气管超声引导下支气管镜的进步使得可疑周围性病变的组织学采样的并发症发生率大大降低同时为立体定向放疗植入基准标记。此外,介入性肺脏病学可以缓解不可手术的癌症及晚期癌症。由于低剂量CT扫描用于肺癌的早期发现,对肺部结节的治疗有经验的肺病专科医师来说,最重要的是尽可能减少侵袭性采样,整合多学科诊治的模式进行分期。     

MACC1基因干涉对食管癌细胞Eca109体外和体内增殖的影响

目的:探讨MACC1对食管癌细胞Eca109增殖的影响。方法:利用慢病毒载体介导的小发卡RNA(shRNA)干涉食管癌细胞Eca109中MACC1的表达。利用MTT法和平板克隆试验检测MACC1对食管癌细胞增殖的影响,利用流式细胞仪检测细胞周期的变化,最后利用裸鼠成瘤试验检测MACC1对食管癌细胞体内增值的影响。结果:成功建立MACC1干涉的食管癌细胞,MTT和平板克隆结果显示MACC1基因干涉后抑制食管癌细胞的增殖,并使食管癌细胞发生G1期阻滞。体内试验进一步证实MACC1干涉后抑制食管癌细胞在体内的增值。结论:干涉MACC1基因可抑制食管癌细胞的增殖。     

表达谱基因芯片筛选体外循环前后心肌细胞因子的变化

Objestive Systemic inflarmmation may be triggered by injury, hypothermia, ischemia-reperfusion and the contact of the blood with foreign body during cardiopulmonary bypass (CPB). To determine the application values of gene chip technique in the clinical practice and the study of cardiovascular stagery, as well as to provide clues to the study of inflammatory responess during CPB, microarry for gene expression profiles was used to identify the differences in the gene expression of myocardium between pre-and post- CPB. Methods Six adult patients who underwent CPB from March to May in 2003 were involved. Samples of right atrium were col- lected before and at immediate end of CPB. BD AtlasTM cDNA Expression Arrays was used to identify the differences in the gene ex- pression of cytokines. The results were compared with that of semi-quantative RT-PCR. Resellts The mean age of 6 patients (5 males and 1 female) was (32.67± 11.72) years. The baseline heart function was gradeⅡin 3 cases and grade Ⅲ in 3 other cases. The baseline left ventricular ejection fraction(LVEF)was (58.17±7.91)%. The mere duration was (91.67±43.88) minutes for CPB and was (58.67±43.46) minutes for aorta blocking. The minimum nasopharynx/rectal temperture was (29.37±1.90)℃/ (32.15±1.52)℃. Gene expression profiles of cytokines in the myocardium pre- and post-CPB were analysed successfully. The ex- pression of IL-6, IFN-γ,Wnt5a, TNFRSF1B, a member of tumor necrosis factor receptor superfamily, PIGF and MFNG in the myo- cardium were unpregulated after CPB. Conclusion Microarray technique is applicable in the study of cytokines changes dying CPB. cDNA microarray identified pleliminarily the differences in the gene expression between pre- and post-CPB. These genes may be in- valved in inflammation and other psthophysiological responses incuced by CPB. The myocardiym is probably one of the major sources of cytokines during CPB. Further study may be helpful in understanding the llngthe development of inflammation during CPB, and eventually, reducing the post-operative complications.     

基因表达谱芯片对结肠癌相关基因的研究

基因芯片技术是一项低消耗、高灵敏度、高通量地分析细胞内基因表达谱的新技术[1] ,目前已广泛应用于基因功能的研究 ,尤其是肿瘤发生的分子生物学方面的研究。结肠癌是消化道常见的恶性肿瘤 ,发病率在逐年增加 ,已成为严重危害人民健康的主要疾病之一。结肠癌的发生和发展与许多已知的和未知的基因相关 ,用基因芯片方法寻找在结肠癌组织中特异性表达差异的基因 ,会对结肠癌的早期诊断、防治起到积极的作用。一、材料与方法(一 )组织材料我院普外科经病理证实的 3例Ｄｕｋｅｓ改良分期Ⅰ期的结肠腺癌新鲜标本及距肿瘤边缘 5ｃｍ、ＨＥ染色无…     

利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子—2（IGF—2）

目的；研制有生物活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子－2（rhIGF-2)。方法：将14kD hIGF-2前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒（BmNPV)转移载体pBakPAK8中，经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后，通过体内同源重组的方式获得重组病毒BmNPV/IGF-2。以BmNPV/IGF-2感染5龄家蚕幼虫，分别在蚕染后24，48，72，96，108，120h提取家蚕血淋巴液，以ELISA法测定不同时家蚕血中IGF－2浓度，采用Westernblot分析鉴定IGF－2免疫学活性，MTT法观察其对NIH3T3细胞增殖的影响。结果：ELISA测定显示，BmNPV/IGF-2感染家蚕幼虫96h后IGF－2表达率最高，每毫升血淋巴中约含IGF－2 14μg，Western-blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成7.0kD成熟hIGF-2，并对NIH3T3细胞具有良好促增殖效应，其促细胞生长能力明显优于来源于E.coli的IGF－2标准品。结论；本研究实现具有免疫学活性及生物学活性的rhIGF-2在家蚕杆状病毒表达系统的高效表达。