维生素A酸对小鼠囊胚细胞凋亡的影响

目的:探讨全反式维生素A酸(ATRA)对体外培养小鼠囊胚中内细胞群(ICM)和滋养层(TE)细胞凋亡的影响。方法:获取妊娠3.5d小鼠囊胚,分别培养在含0μmol/l、1μmol/l和10μmol/l的ATRA的M199培养基中24h,用带有荧光(FITC)标记的原位末端标记(TUNEL)检测法,观察ATRA对小鼠囊胚细胞凋亡的效应。结果:ATRA可诱导囊胚细胞凋亡,并增强小鼠囊胚Fas蛋白表达。结论:维生素A酸对小鼠胚胎的发育具有细胞毒性作用。     

囊胚玻璃化冷冻的研究进展

随着序贯培养液的出现，囊胚移植被认为是提高胚胎种植率、降低多胎妊娠率的有效方法．因此囊胚冷冻愈显重要。囊胚的玻璃化冷冻因其简化了冷冻过程；避免细胞内冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤：并且在冷冻过程中可迅速通过临界温度区，减轻了胚胎冷冻中常见的冻伤现象，使存活率提高等优点，近几年得到逐步发展。现对囊胚玻璃化冷冻（vitrification）的原理、要领、现状及应用前景进行综述。     

囊胚玻璃化冷冻预平衡时间对辅助生殖妊娠结局的影响

目的 探讨囊胚激光皱缩后缩短玻璃化冷冻预平衡时间对临床妊娠及新生儿结局的影响。方法 回顾性分析2018年1月至2021年12月于海口玛丽医院进行囊胚复苏移植患者的临床资料,从中筛选501例患者518个移植周期。根据实验室囊胚玻璃化冷冻技术标准操作程序修订前后的预平衡时间将其分为A组（9~10min）和B组（7~8min）,比较两组间的妊娠结局和新生儿结局。结果 两组患者的年龄、移植胚胎数、卵泡刺激素、体质量指数、不孕年限、原发不孕比例、移植日内膜厚度和内膜方案比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;两组的囊胚存活率、着床率、临床妊娠率、活产率、早期流产率、多胎妊娠率、母体并发症比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。两组的新生儿性别比、孕周、早产儿比例、出生体质量、低出生体重儿、巨大儿、剖宫产、出生缺陷比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 囊胚激光皱缩后,缩短玻璃化冷冻预平衡时间不影响囊胚复苏移植的妊娠结局。     

人胚胎干细胞原代克隆生长及其传代的研究

目的 评价人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长的关系。方法 D3废弃胚胎成组共培养获得不同质量的囊胚，免疫刀去除囊胚滋养外胚层细胞后，将内细胞团(ICM)接种到饲养细胞层上生长、传代。结果 从质量好的囊胚得到的人胚胎干细胞传代的代数更多；原代克隆生长快的人胚胎干细胞传代效率更高。结论 人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长情况密切相关。     

小鼠囊胚与肿瘤细胞共培养时的生长行为观察

目的 观察小鼠囊胚与肿瘤细胞共培养时的生长行为。方法 应用胚胎与肿瘤细胞在体外共培养体系,观察小鼠囊胚与肿瘤细胞共培养时生长行为。结果 人肺癌细胞株A529对囊胚体外脱带、贴附及扩展的能力无显著性影响。结论 在体外小鼠囊胚同人肺癌细胞株A549间的粘附与扩展无明显的种属特异性,并与相作用的细胞的分化水平无关。     

PGT-A患者不同活检日囊胚的染色体非整倍体情况及妊娠结局

目的比较行胚胎植入前染色体非整倍体遗传学检测(PGT-A)患者的D5和D6囊胚的染色体非整倍体情况及妊娠结局。方法收集2018年9月至2020年9月在郑州大学第一附属医院生殖中心行PGT-A并进行解冻移植的268例患者的临床及实验室资料, 比较D5和D6囊胚(分别为975个、710个)的染色体非整倍体情况及妊娠结局。结果 D5囊胚的整倍体占比显著高于D6囊胚(49.1%vs. 41.1%, P=0.001 1), 非整倍体的占比则显著低于D6囊胚(50.9%vs. 58.9%, P=0.001 1), 其中D6囊胚染色体数目异常率显著高于D5囊胚(27.9%vs. 20.2%, P=0.000 5)。>35岁者D5/D6囊胚整倍体和非整倍体率无差异, 而≤ 35岁者D5囊胚整倍体比率显著高于D6囊胚(53.8%vs. 44.3%, P=0.001), 非整倍体率则显著低于D6囊胚, 且以染色体数目为甚(16.3%vs. 23.9%, P=0.001)。无论D5还是D6囊胚, ≤ 35岁者整倍体比率均显著高于>35岁者, 非整倍体率均显著低于>35岁者, 且均以染色体数...     

小鼠胚胎切割及半胚体外培养

目的 为基因型完全相同的同卵双胞脂人类动物模型的建立积累基础资料。方法C57BI/6J雌性小鼠与KM雄性小鼠交配,见栓3．5d采集小鼠晚期桑椹胚和早期囊胚,应用显微手术刀直接分割法进行胚胎二等份分割,所得半胚体外培养,观察其发育情况。结果 晚期桑椹胚分割成功率是91．3％,半胚发育率为57.1％,早期囊胚分割成功率约为89．2％,半旺发育率为71.2％。结论 C57BI/6J小鼠与KM小鼠的F1代胚胎经切割后能在体外良好发育,该资料可用于同卵双胞胎分化发育的研究及人类双胞胎动物模型的制作。     

小鼠扩张囊胚颗粒法玻璃化冷冻保存技术研究

在２５℃室温下,用ＥＦＳ３０玻璃化溶液,对小鼠扩张囊胚进行颗粒法玻璃化冷冻保存。结果,胚胎在ＥＦＳ３０溶液中平衡１ｍｉｎ后滴入液氮中,解冻后的胚胎发育率达１００％,囊胚孵化率达７６％。而在１０％乙二醇溶液中将胚胎预处理５ｍｉｎ,再移入ＥＦＳ３０中平衡１ｍｉｎ后冷冻保存的胚胎,解冻后的发育率和囊胚孵化率分别为９８％和６３％。上述２组的胚胎发育率与对照组无明显差异,而囊胚发育率均明显低于对照组（Ｐ＜０．０１）。上述２组胚胎解冻后植入假孕小鼠子宫后的受体妊娠率分别为９０％和８１％,产出率分别为７１％和５８％,与对照组（６１％）相比均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。     

胚胎体外共培养研究的进展

共培养是模拟早期胚胎在体内发育环境,延长体外发育时间,提高囊胚获得率的方法.因其可提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的成功率,特别是提高反复种植失败(IF)者的妊娠率.尽管有不少争议,近年仍有较多与共培养有关的研究.对共培养系统的改进、应用、作用机制的探讨作介绍.     

SD大鼠体外受精与早期胚胎体外培养体系的初步建立

目的改造IVF-30和HTFplus培养液,观察在改造后培养液里卵的受精和早期胚胎的发育状况,寻找适合SD大鼠体外受精和早期胚胎培养的实验体系。方法采用两种方法(超数排卵及体内成熟)采集成熟卵母细胞用于体外受精。选择两种商品化的培养液IVF-30(Vitrolife),HTFplus(Lifeglobal)。分别在以上的培养基中增加10、20、30mmol/L的NaCl,将培养液的渗透压提升至325~355mOsM之间,观察在改造前与改造后的培养液内SD大鼠卵母细胞受精率和囊胚发育率等指标。结果经改造的培养液HTFplus和IVF-30,体外受精率分别从13%、15%提升至70%、67%。改造后的IVF-30和HTFplus的2细胞,大于4细胞及囊胚的发育率分别为85%,74%,22%;96%,75%,32%。HTFplus,IVF-30经过改造后更适合于SD大鼠的体外受精及早期胚胎培养。与超排相比较更多的在自然周期的体内成熟卵母细胞(16%,28%)发育到了囊胚。结论成功建立了SD大鼠的体外受精和体外培养系统。