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目的应用酵母双杂交系统筛选小鼠、大鼠、人类大脑文库中与DRP2相互作用的蛋白,分析中枢神经系统中DRP2分子复合体的组成成分。方法设计3个含有DRP2不同蛋白结构域的诱饵质粒,在完成诱饵质粒的自激活性的鉴定后,对小鼠、大鼠、人类脑MATCHMAKER cDNA文库进行筛选。结果运用DRP2蛋白N-Bait筛选大鼠脑MATCHMAKER cDNA文库,笔者获得了一个阳性文库质粒。该质粒的插入子编码一种SNAP25相互作用的蛋白质Scoilin。Scoilin又被命名为Zwint-1蛋白。同时笔者还确定了这两种相互作用蛋白质的精确结构域:DRP2蛋白以其含有两个Spectrin重复和一个WW蛋白结构域的氨基端与Scoilin(Zwint-1)全蛋白相互作用。结论应用酵母双杂交,笔者于大鼠大脑中找到了DRP2的相互作用的蛋白质Scoilin(Zwint-1),并且确定了这两种相互作用蛋白质的精确结构域。 相似文献
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Anne-Sophie Bach Danielle Derocq Valérie Laurent-Matha Philippe Montcourrier Salwa Salwa Sebti Béatrice Orsetti Charles Theillet Céline Gongora Sophie Pattingre Eva Ibing Pascal Roger Laetitia K. Linares Thomas Reinheckel Guillaume Meurice Frank J. Kaiser Christian Gespach Emmanuelle Liaudet-Coopman 《Oncotarget》2015,6(29):28084-28103
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Li DD Chen JH Chen Q Li GW Chen J Yue JM Chen ML Wang XP Shen JH Shen X Jiang HL 《Acta pharmacologica Sinica》2005,26(2):220-222
AIM: To search the peroxisome proliferator-activated receptor g (PPAR(gamma)) agonists from Swietenia mahagony extract (SmE) and observe the possible ameliorative effects of SmE on diabetic db/db mice. METHODS: The PPAR(gamma) agonistic activity of SmE was screened by yeast-two hybrid system. The blood glucose levels of diabetic db/db mice were measured using a blood glucose level monitor and the data were statistically analyzed by NDST8.8W software. RESULTS: By using the clinical drug rosiglitazone as a positive control, it was found that the PPARg agonistic activity of SmE at a concentration of 50 microg/L was approximately half that of 35.7 microg/L (0.1 micromol/L) of rosiglitazone. At the dose of 1000 mg/kg, SmE remarkably decreased the blood glucose concentration of db/db mice from (15.26+/-2.98) to (7.58+/-2.20) mmol/L, and reduced the blood glucose levels by 55.49% compared with the control group (P<0.01). Conclusion: SmE shows agonistic activity to PPARg and can ameliorate the blood glucose levels of diabetic db/db mice. SmE may be thus used as a potential agent for diabetes therapy. 相似文献
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乙型肝炎病毒核心抗原肝细胞结合新蛋白的功能研究 总被引:3,自引:1,他引:2
目的为探讨乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)在乙型肝炎发病机制中的作用,筛选、克隆出人肝细胞中与HBcAg相互作用的未知蛋白基因C12并进一步对其功能作初步研究.方法应用酵母双杂交系统-3筛选到与肝细胞蛋白结合的蛋白编码基因C12,克隆该基因并用再次用重回交实验证实作用可靠后,将基因与荧光蛋白基因融合表达,分析该基因表达产物在哺乳动物细胞中的定位;用MTT代谢实验了解C12表达对哺乳动物细胞生长代谢的影响作用;酵母双杂交实验寻找肝细胞中与之相互作用的蛋白;基因芯片技术了解C12基因表达对其他基因表达的影响.结果成功地筛选并克隆出HBcAg的肝细胞结合蛋白C12基因,经回交实验再次证实C12基因的表达产物C12蛋白与HBcAg确切的结合作用.该基因与荧光蛋白基因融合表达转染293细胞、L02细胞后48 h细胞呈现均匀分布的强绿色荧光信号,提示C12蛋白可能主要定位在细胞质内;通过在Bel7402、L02细胞系中进行MTT检测,发现C12在上述细胞中表达没有对细胞的生长繁殖产生明显影响;用酵母双杂交系统-3筛选出肝细胞中与C12蛋白相互作用的蛋白基因16种;基因芯片技术在1 152个基因中筛选出17个差异表达的基因.结论 C12蛋白主要定位在细胞质内,对哺乳动物细胞生长繁殖无明显影响,能与肝细胞中多种蛋白结合,在细胞内的过表达引起的生物过程涉及许多不同基因表达的变化. 相似文献
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