Comparative Study on the Immunogenicity between Recombinant MS-Sj26GST Vaccine and Recombinant BCG-Sj26GST Vaccine in Schistosoma japonicum

TuberculosisandSchistosomiasisarethemajorcontagiousdiseaseswhicharethemostdangeroustothepeople’shealth Inordertogetridofthem ,wemustlookforamoreusefulvaccine Bythetech niquesofmolecularbiology ,2 6 0 0 0DaGlutathionStransferase (GST) genewasclonedintotheE coli MycobacteriumtransferringandexpressionvectorpBCG 2 0 0 0totransformittoMycobacteriumsmeg matismc2 15 5 (MS)andBCGseparatelyinordertoconstructrMS Sj2 6GSTvaccineandrBCG Sj2 6GSTvaccine Inthisstudy ,theBALB/cmicewereimmu niz…     

结核分枝杆菌重组耻垢分枝杆菌疫苗的研究进展

结核分枝杆菌引起的结核病是一种人兽共患的慢性传染病，短程督导化疗是治疗该病的主要措施，卡介苗是预防该病的唯一疫苗，但其免疫效果极不稳定。文章介绍了4种结核分枝杆菌重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究进展。     

利用噬菌体杀灭巨噬细胞内耻垢分枝杆菌的实验研究

目的探讨噬菌体能否杀灭巨噬细胞内耻垢分枝杆菌,并成为减少细胞内活菌量的手段。方法将体外培养的已感染耻垢分枝杆菌的小鼠腹腔巨噬细胞随机分为4组生理盐水组,噬菌体高剂量组、中剂量组和低剂量组。分别加入生理盐水0.1ml、10#噬菌体2.1×107噬菌斑形成单位(PFU)、2.1×106PFU和2.1×105PFU。通过洗涤去除细胞外的噬菌体与耻垢分枝杆菌,观察加入噬菌体24h后巨噬细胞内耻垢分枝杆菌活菌数量变化情况。并在电子显微镜下观察巨噬细胞吞噬噬菌体前后胞内改变情况。结果24h后生理盐水组巨噬细胞内活菌数的对数值为5.74±0.18,噬菌体高、中、低剂量组的活菌数对数值分别为4.77±0.08、4.97±0.17、5.33±0.13。生理盐水组的活菌数高于噬菌体高、中、低剂量组,其中生理盐水组与噬菌体高、中剂量组之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。高、中剂量组间差异无统计学意义(P>0.05),高、低剂量组间差异有统计学意义(P<0.01)。电子显微镜显示噬菌体能感染细胞内的耻垢分枝杆菌,合成子代噬菌体。结论感染了分枝杆菌的巨噬细胞可以同时吞噬10#噬菌体,进入细胞内的噬菌体能感染裂解胞内分枝杆菌使活菌量减少,使噬菌体治疗分枝杆菌感染成为可能。     

靶向递送人颗粒溶素与小鼠单链IL-12真核共表达质粒耻垢分枝杆菌的构建及鉴定

目的:构建携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠单链IL-12基因的真核共表达载体pZM03,并构建可将其靶向递送入巨噬细胞中进行表达的重组耻垢分枝杆菌菌苗.方法:将人GLS,小鼠单链IL-12基因和分枝杆菌复制子OriM同时克隆进多启动子真核共表达载体pBudCE4.1中,得到穿梭质粒pZM03.以pZM03电转化耻垢分枝杆菌mc2-155,通过PCR方法检测重组菌中携带的真核共表达质粒;通过与小鼠巨噬细胞株RAW264.7共孵育检测重组菌的靶向性.结果:成功得到了可靶向递送GLS/IL-12真核共表达质粒pZM03进入巨噬细胞的新型重组菌.结论:利用耻垢分枝杆菌作为减毒生物体载体向巨噬细胞中靶向递送真核表达质粒是可能的.     

重组耻垢分枝杆菌Msmc^2-CFP10-ESAT6的构建

目的构建能表达结核分枝杆菌早期分泌蛋白CFP10-ESAT6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌。方法采用基因拼接（Gene SOEing）法体外扩增结核杆菌1hp-ESAT6融合基因,插入大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pB-CG3000,构建重组穿梭表达质粒pBCG3000-CFP10-ESAT6,电转化耻垢分枝杆菌mc2155,构建耻垢疫苗株Msmc2155-CFP10-ESAT6,热诱导表达CFP10-ESAT6融合蛋白,Western blot分析其免疫原性。结果经PCR、酶切及测序鉴定,证实成功构建重组质粒pBCG3000-CFP10-ESAT6,并在耻垢分枝杆菌中经热诱导表达出分子质量单位约为22 ku的CFP10-ESAT6蛋白,该蛋白可被结核病患者血清、鼠抗ESAT6血清和鼠抗CFP10血清识别。结论结核分枝杆菌lhp-ESAT6融合基因在耻垢分枝杆菌中成功表达。     

异烟肼耐药耻垢分枝杆菌的建立及药物敏感性的测定

耐药结核病的涌现,使发展新型抗耐药结核药物变得尤为迫切。本研究选择生长快且无致病性的耻垢分枝杆菌为研究对象,探索快速评价药物抗异烟肼耐药结核分枝杆菌的能力。inhA是异烟肼的作用靶点,由于inhA的突变或者过表达可以引起结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的产生。通过将inhA克隆入pMV261中,构建过表达inhA的耻垢分枝杆菌。结果显示,过量表达inhA的耻垢分枝杆菌对异烟肼的敏感性下降了100倍以上。建立了利用刃天青为指示剂的抗异烟肼耐药株的快速药效评价方法,可快速对药物的活性进行定性或定量评价,为进行新型抗结核药物的高通量筛选和药效评价奠定基础。     

利用果蝇转座子作载体构建土垢分枝杆菌变异基因文库的研究

目的　利用果蝇mariner转座子作为载体构建土垢分枝杆菌随机变异基因文库以筛选影响脂肪酸代谢的基因。　方法　将果蝇转座子mos1的末端反向重复序列置于卡那霉素抗性基因两侧 ,并将此种基因插入到M2 72B载体 ,用此载体转化土垢分枝杆菌 ,用Southernblot验证外源基因的插入。将变异的基因克隆在不同碳源的培养基上培养 ,筛选只在软脂酸上生长的菌落。　结果　初筛了 4 6 8个菌落 ,有 5个不能在软脂酸上生长 ,其中 2个在ICL基因上发生变异 ,3个在PCKA基因上发生变异。ICL为乙醛酸旁路所必须 ,PCKA编码糖异生的关键酶。　结论　研究证明该转座子载体用于基因变异有效 ,变异筛选分枝杆菌中与脂肪酸代谢的基因可行。     

结核分枝杆菌Ag85B基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达

目的体外扩增结核杆菌Ag85B基因,构建大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-Ag85B,并重组耻垢分枝杆菌(Mycobacteriums megmatis mc2155)。方法采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增结核杆菌Ag85B基因,克隆入pGEMT载体;构建亚克隆ps3000-Ag85B大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒,电转化方法将有Ag85B基因的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌中。热诱导此重组耻垢分枝杆菌,用SDS-PAGE电泳观察Ag85B蛋白的表达,Western blot鉴定其生物学活性。结果PCR扩增结核杆菌Ag85B基因片段大小为990bp,构建的穿梭质粒ps3000-Ag85B酶切片段为990bp,与理论值相符。经Western blot检测,该重组耻垢杆菌表达蛋白能被结核病患者血清识别。结论Ag85B重组耻垢分枝杆菌构建成功,为下一步表达Ag85B蛋白的重组BCG(Bacilli Calmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础。     

耻垢分枝杆菌乳酸氧化酶的制备

用表面薄层培养法大量培养耻垢分枝杆菌,菌体用超声波破壁后提取乳酸氧化酶.粗酶经硫酸铵分级沉淀、热处理、透析抽提、Sephadex G-200柱层析后获得精酶.精酶经醋酸纤维素薄膜电泳分析为一个蛋白质组份.比活力为125;收率为38%.     

Antitubercular Activity of Compounds Isolated from Pelargonium sidoides.

Abstract

The recent increase in the incidence of tuberculosis with the emergence of multidrug-resistant (MDR) cases has lead to the search for new drugs that are effective against MDR strains of Mycobacterium tuberculosis. and can augment the potential of existing drugs against tuberculosis. Pelargonium sidoides. DC (Geraniaceae) is highly valued by traditional healers for its curative properties and is well-known to treat coughs, diarrhea, and tuberculosis. The butanol root extract was found have bioactive inhibitory activity against M. tuberculosis. at a concentration of 2.5 × 10³ µg/mL. Phytochemical analysis of the active fraction from the root of P. sidoides. led to the isolation and identification of six compounds: coumarins (umckalin, scopoletin, 6,8-dihydroxy-5.7-dimethoxy-2H.-benzopyran-2-one, and 6,8-dihydroxy-7-methoxy-2H.-benzopyran-2-one) and flavonoids (catechin and epigallocatechin, which is reported for the first time from P. sidoides.). The isolated compounds were evaluated for antitubercular activity with M. smegmatis. and M. tuberculosis.. Intracellular activity of these compounds was also investigated using THP-1 human macrophages infected with M. tuberculosis.. The isolated compounds did not show activity inhibitory against M. tuberculosis., intracellularly and extracellularly, at the highest concentration tested in the current study. Epigallocatechin and scopoletin showed good inhibitory activity against M. smegmatis., exhibiting a minimum inhibitory concentration (MIC) of 7.8 µg/mL. Catechin and umckalin exhibited MIC values of 31.25 and 62.5 µg/mL, respectively.