重组人血管内皮抑制素、孟鲁司特和布地奈德对小鼠哮喘模型气道重建的作用比较

目的：探讨重组人血管内皮抑制素、孟鲁司特和布地奈德对小鼠哮喘模型气道重塑的影响。方法：BALB／ c小鼠按随机数字表法分为正常对照组、哮喘模型组(100 μg OVA腹腔内注射)、重组人血管内皮抑制素组（2.25 mg? kg-1腹腔注射）、孟鲁司特组（3 mg?kg-1灌胃）、布地奈德雾化液吸入组（1 mg?kg-1雾化吸入）,每组各10只。用酶 联免疫吸附测定(ELISA)法对各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中血管内皮生长因子（VEGF）进行定量分析;采用医学 图像分析软件测定小支气管管壁面积（S1）、管腔的内周长(P1)、管壁平滑肌面积(S2)、小血管平滑肌面积（S3）及内 周长（P2）。结果：对照组支气管管壁面积(S1／P1)、支气管平滑肌面积(S2／P1)、血管壁平滑肌面积(S3／P2)分别为 (16.4±1.5),(2.2±0.4)和(5.2±0.6 )μm2?μm-1, 模型组S1／P1,S2／P1,S3／P2分别为(35.3±4.4),(12.9 ± 2.4)和(23.6±4.8 )μm2 ?μm-1,两组比较差异均有统计学意义(P<0．001)。给药各组S1／P1,S2／P1和S3／P2分别为 ：重组人血管内皮抑制素组（24.5±0.7）,（5.5±0.5）和（9.3±1.2）μm2 ?μm-1;孟鲁司特组（22.8±4.3）, （5.3±1.8）和（15.0±2.1）μm2 ?μm-1;布地奈德组（21.4±2.5）,（4.9±1.1）和（13.8±1.4）μm2 ?μm-1 ,给药各组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0．05)。给药各组间比较不存在显著性差异。各组BALF中的VEGF水平 ：对照组（19.2±3.8）pg?mL-1,模型组（108.48±28.4） pg?mL-1 ,重组人血管内皮抑制素组（70.3±20.1）pg? mL-1,孟鲁司特组（89.3±23.4） pg?mL-1 ,布地奈德组（82.3 ±21.4）pg?mL-1,与模型组相比,给药组BALF中的 VEGF水平显著下降(P<0.05) ,具有统计学意义。结论：血管内皮生长因子在小鼠哮喘模型气道及肺内过度表达,重组 人血管内皮抑制素﹑孟鲁斯特钠﹑布地奈德可显著减少VEGF在小鼠气道及肺内的表达。 重组人血管内皮抑制素﹑孟鲁 斯特钠﹑布地奈德均可以延缓气道重建包括减少气道壁增厚﹑气道平滑肌的增厚及气道内血管平滑肌的增厚。其中重组 人血管内皮抑制素对气道内血管平滑肌的增厚的改善作用更加明显。     

日本血吸虫乳酸脱氢酶原核表达、纯化及鉴定

目的原核表达日本血吸虫乳酸脱氢酶（SjLDH）,对表达产物进行纯化及生物活性鉴定。方法将SjLDH编码序列克隆入pET-28a原核表达载体并转染大肠埃希菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后亲和层析法对表达产物进行纯化,并用聚丙烯酰胺变性凝胶电泳（SDS-PAGE）、蛋白印迹（Western blot）、酶联免疫吸附实验（ELISA）、酶活性染色及活性测定进行鉴定。结果成功构建pET28a-SjLDH重组质粒并在大肠埃希菌中获得可溶性表达,亲和层析纯化表达产物。SDS-PAGE及Western Blot结果显示,表达及纯化产物分子量约36kDa,与SjLDH理论分子量相符。ELISA结果表明,重组蛋白具有良好的免疫活性,酶活性染色表明重组蛋白具有乳酸脱氢酶活性,活性单位为379U/mg。结论成功进行SjLDH的原核表达并获得纯化的重组蛋白,重组蛋白具有良好的免疫原性及酶活性,为研究SjLDH的功能奠定了基础。     

重组人血管内皮抑制素、孟鲁司特和布地奈德对小鼠哮喘模型气道重建的作用比较

目的：探讨重组人血管内皮抑制素、孟鲁司特和布地奈德对小鼠哮喘模型气道重塑的影响。方法：BALB／ c小鼠按随机数字表法分为正常对照组、哮喘模型组(100 μg OVA腹腔内注射)、重组人血管内皮抑制素组（2.25 mg? kg-1腹腔注射）、孟鲁司特组（3 mg?kg-1灌胃）、布地奈德雾化液吸入组（1 mg?kg-1雾化吸入），每组各10只。用酶 联免疫吸附测定(ELISA)法对各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中血管内皮生长因子（VEGF）进行定量分析；采用医学 图像分析软件测定小支气管管壁面积（S1）、管腔的内周长(P1)、管壁平滑肌面积(S2)、小血管平滑肌面积（S3）及内 周长（P2）。结果：对照组支气管管壁面积(S1／P1)、支气管平滑肌面积(S2／P1)、血管壁平滑肌面积(S3／P2)分别为 (16.4±1.5),(2.2±0.4)和(5.2±0.6 )μm2?μm-1， 模型组S1／P1,S2／P1,S3／P2分别为(35.3±4.4)，(12.9 ± 2.4)和(23.6±4.8 )μm2 ?μm-1，两组比较差异均有统计学意义(P<0．001)。给药各组S1／P1,S2／P1和S3／P2分别为 ：重组人血管内皮抑制素组（24.5±0.7），（5.5±0.5）和（9.3±1.2）μm2 ?μm-1；孟鲁司特组（22.8±4.3）， （5.3±1.8）和（15.0±2.1）μm2 ?μm-1；布地奈德组（21.4±2.5），（4.9±1.1）和（13.8±1.4）μm2 ?μm-1 ，给药各组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0．05)。给药各组间比较不存在显著性差异。各组BALF中的VEGF水平 ：对照组（19.2±3.8）pg?mL-1，模型组（108.48±28.4） pg?mL-1 ，重组人血管内皮抑制素组（70.3±20.1）pg? mL-1，孟鲁司特组（89.3±23.4） pg?mL-1 ，布地奈德组（82.3 ±21.4）pg?mL-1，与模型组相比，给药组BALF中的 VEGF水平显著下降(P<0.05) ，具有统计学意义。结论：血管内皮生长因子在小鼠哮喘模型气道及肺内过度表达，重组 人血管内皮抑制素﹑孟鲁斯特钠﹑布地奈德可显著减少VEGF在小鼠气道及肺内的表达。 重组人血管内皮抑制素﹑孟鲁 斯特钠﹑布地奈德均可以延缓气道重建包括减少气道壁增厚﹑气道平滑肌的增厚及气道内血管平滑肌的增厚。其中重组 人血管内皮抑制素对气道内血管平滑肌的增厚的改善作用更加明显。     

用重组PCR技术缺失突变人单核细胞趋化蛋白-1基因

目的：用重组PCR技术对人单核细胞趋化蛋白-1(hμMCP-1)基因cDNA进行缺失突变，构建其突变体-7NDcDNA。方法：根据hμMCP-1基因缺失突变前后的两段基因分别设计两对含有酶切位点的引物，以pBluescdpt-hμMCP-1为模板，进行重组PCR反应，将PCR产物与T载体连接进行TA克隆，酶切鉴定并测序确定其长度为342bp，继之将目的基因克隆入pcDNA3．1真核表达载体。结果：成功构建hμMCP-1cDNA突变体-7ND的真核细胞表达载体，测序结果表明，该突变体N端第2至8位氨基酸缺失。结论：重组PCR技术是十分有效、可靠的基因缺失突变方法。     

人DNA聚合酶β全长cDNA的克隆、鉴定及真核表达载体的构建

【目的】克隆人类DNA聚合酶 (pol β)基因全长cDNA ,构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤维细胞HLF总RNA进行RT PCR扩增 ,用pGEM T载体经T/A克隆、DNA测序确定后 ,用双酶切将 pol β全长cDNA定向克隆到绿色荧光蛋白表达载体 pEGFP C1,转染大肠杆菌DH5α ,筛选阳性克隆 ,双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT PCR获得 1 0 3kb的产物 ,经DNA测序 ,确定所扩增片段为人类 pol β基因全长cDNA ,进而成功筛选出真核表达载体 pEGFP C1 β。【结论】成功构建人 pol β基因全长cDNA真核表达载体 ,为进一步建立该基因的高表达细胞株提供基础     

重组人血管内皮抑制素、孟鲁司特和布地奈德对小鼠哮喘模型气道重建的作用比较

目的：探讨重组人血管内皮抑制素、孟鲁司特和布地奈德对小鼠哮喘模型气道重塑的影响。方法：BALB／ c小鼠按随机数字表法分为正常对照组、哮喘模型组(100 μg OVA腹腔内注射)、重组人血管内皮抑制素组（2.25 mg? kg-1腹腔注射）、孟鲁司特组（3 mg?kg-1灌胃）、布地奈德雾化液吸入组（1 mg?kg-1雾化吸入），每组各10只。用酶 联免疫吸附测定(ELISA)法对各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中血管内皮生长因子（VEGF）进行定量分析；采用医学 图像分析软件测定小支气管管壁面积（S1）、管腔的内周长(P1)、管壁平滑肌面积(S2)、小血管平滑肌面积（S3）及内 周长（P2）。结果：对照组支气管管壁面积(S1／P1)、支气管平滑肌面积(S2／P1)、血管壁平滑肌面积(S3／P2)分别为 (16.4±1.5),(2.2±0.4)和(5.2±0.6 )μm2?μm-1， 模型组S1／P1,S2／P1,S3／P2分别为(35.3±4.4)，(12.9 ± 2.4)和(23.6±4.8 )μm2 ?μm-1，两组比较差异均有统计学意义(P<0．001)。给药各组S1／P1,S2／P1和S3／P2分别为 ：重组人血管内皮抑制素组（24.5±0.7），（5.5±0.5）和（9.3±1.2）μm2 ?μm-1；孟鲁司特组（22.8±4.3）， （5.3±1.8）和（15.0±2.1）μm2 ?μm-1；布地奈德组（21.4±2.5），（4.9±1.1）和（13.8±1.4）μm2 ?μm-1 ，给药各组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0．05)。给药各组间比较不存在显著性差异。各组BALF中的VEGF水平 ：对照组（19.2±3.8）pg?mL-1，模型组（108.48±28.4） pg?mL-1 ，重组人血管内皮抑制素组（70.3±20.1）pg? mL-1，孟鲁司特组（89.3±23.4） pg?mL-1 ，布地奈德组（82.3 ±21.4）pg?mL-1，与模型组相比，给药组BALF中的 VEGF水平显著下降(P<0.05) ，具有统计学意义。结论：血管内皮生长因子在小鼠哮喘模型气道及肺内过度表达，重组 人血管内皮抑制素﹑孟鲁斯特钠﹑布地奈德可显著减少VEGF在小鼠气道及肺内的表达。 重组人血管内皮抑制素﹑孟鲁 斯特钠﹑布地奈德均可以延缓气道重建包括减少气道壁增厚﹑气道平滑肌的增厚及气道内血管平滑肌的增厚。其中重组 人血管内皮抑制素对气道内血管平滑肌的增厚的改善作用更加明显。     

pmRNA IRWS-hKDR重组质粒的构建、表达及鉴定

目的利用基因工程技术构建pmRNA IRES-hKDR重组质粒载体,为肿瘤的基因治疗研究奠定基础.方法利用本实验室保存的pDC520 hKDR用XbaⅠ和NcoⅠ顺序酶切,pmRNA IRES-Luc亦用XbaⅠ和NcoⅠ顺序酶切,通过分子生物学技术构建了pmRNA IRES-hKDR重组质粒,用PCR、酶切鉴定,然后用脂质体转染Hepall-6细胞,用G418筛选后通过ELISA和Western blot检测该融合蛋白.结果重组质粒中含有pmRNA IRES-hKDR基因,转染Hepall-6细胞后,其表达产物能分泌到肿瘤细胞外,分泌到细胞外的产物用Westem blot检测证明能与特异性hKDR抗体结合.结论成功构建含pmRNA IRES-hKDR真核表达重组质粒,有助于进一步研究其抗肿瘤作用.     

T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗诱发小鼠体液免疫反应

目的：研究T淋巴瘤TCRβ链独特型DNA疫苗诱发小鼠体液免疫反应。方法：大剂量提取质粒，将BALB／c小鼠随机分为pcNSA3．1组、pcDNA3．1／TCRVβ8组、pcDNA3．1／TCRVβ8＋IL－2组、pcDNA3．1／TCRVβ8＋CpG＋脂质体组和全硫代CpG组共5组（每组6），双侧股四头肌内注射疫苗免疫，于第0、2、4周各免疫1次，共3次。每次免疫前及免疫开始后至第8周，取鼠血，应用间接免疫荧光检测小鼠抗体生成情况。结果：pcDNA3．1／TCRVβ8组、pcDNA3．1／TCRVβ8＋CpG＋脂质体组、pcDNA3．1／TCRVβ＋IL－2组小鼠血清中均产生了特异性抗独特型抗体，抗体滴度在第4周开始增高，第6周时达到高峰。在同一取血时间，pcDNA3．1／TCRβV8＋CpG＋脂质体组和pcDNA3．1／TCRVβ8＋IL－2组小鼠抗体滴度均高于pcDNA3．1／TCRβ8组（P＜0．001。结论：DNA重组质粒pcDN3．1/TCRVβ8可诱导小鼠产生特异性抗体淋巴瘤细胞的独特型抗体；IL－2、CpG和脂质体增强了TCRVβ8基因疫苗诱导的体液免疫反应。     

重组人血管内皮抑制素、孟鲁司特和布地奈德对小鼠哮喘模型气道重建的作用比较

目的：探讨重组人血管内皮抑制素、孟鲁司特和布地奈德对小鼠哮喘模型气道重塑的影响。方法：BALB／ c小鼠按随机数字表法分为正常对照组、哮喘模型组(100 μg OVA腹腔内注射)、重组人血管内皮抑制素组（2.25 mg? kg-1腹腔注射）、孟鲁司特组（3 mg?kg-1灌胃）、布地奈德雾化液吸入组（1 mg?kg-1雾化吸入），每组各10只。用酶 联免疫吸附测定(ELISA)法对各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中血管内皮生长因子（VEGF）进行定量分析；采用医学 图像分析软件测定小支气管管壁面积（S1）、管腔的内周长(P1)、管壁平滑肌面积(S2)、小血管平滑肌面积（S3）及内 周长（P2）。结果：对照组支气管管壁面积(S1／P1)、支气管平滑肌面积(S2／P1)、血管壁平滑肌面积(S3／P2)分别为 (16.4±1.5),(2.2±0.4)和(5.2±0.6 )μm2?μm-1， 模型组S1／P1,S2／P1,S3／P2分别为(35.3±4.4)，(12.9 ± 2.4)和(23.6±4.8 )μm2 ?μm-1，两组比较差异均有统计学意义(P<0．001)。给药各组S1／P1,S2／P1和S3／P2分别为 ：重组人血管内皮抑制素组（24.5±0.7），（5.5±0.5）和（9.3±1.2）μm2 ?μm-1；孟鲁司特组（22.8±4.3）， （5.3±1.8）和（15.0±2.1）μm2 ?μm-1；布地奈德组（21.4±2.5），（4.9±1.1）和（13.8±1.4）μm2 ?μm-1 ，给药各组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0．05)。给药各组间比较不存在显著性差异。各组BALF中的VEGF水平 ：对照组（19.2±3.8）pg?mL-1，模型组（108.48±28.4） pg?mL-1 ，重组人血管内皮抑制素组（70.3±20.1）pg? mL-1，孟鲁司特组（89.3±23.4） pg?mL-1 ，布地奈德组（82.3 ±21.4）pg?mL-1，与模型组相比，给药组BALF中的 VEGF水平显著下降(P<0.05) ，具有统计学意义。结论：血管内皮生长因子在小鼠哮喘模型气道及肺内过度表达，重组 人血管内皮抑制素﹑孟鲁斯特钠﹑布地奈德可显著减少VEGF在小鼠气道及肺内的表达。 重组人血管内皮抑制素﹑孟鲁 斯特钠﹑布地奈德均可以延缓气道重建包括减少气道壁增厚﹑气道平滑肌的增厚及气道内血管平滑肌的增厚。其中重组 人血管内皮抑制素对气道内血管平滑肌的增厚的改善作用更加明显。     

Management of haemophilic arthropathy

Summary.  Despite the tremendous benefit offered by primary prophylaxis, recurrent joint bleeding with progression to chronic synovitis and haemophilic arthropathy is still a daily concern for the multidisciplinary health care teams managing patients with severe haemophilia or haemophilia complicated by inhibitor development. Advanced stages of arthropathy could be prevented by regular assessment of musculoskeletal status and thus early detection of symptoms, daily rehabilitation exercises at home, and implementation of appropriate physiotherapy and medical training. Patient's education and psychological counselling are crucial. New tools such as magnetic resonance imaging are promising for the monitoring of these patients and might promote early detection of arthropathy and thus appropriate preventive measures to avoid further joint deterioration can be implemented. Medical synovectomy such as radionucleide synoviorthesis is a simple and non-invasive procedure that often delays the need for surgery which despite considerable improvement in techniques and postoperative rehabilitation remains a high-risk strategy in patients with severe haemophilia, especially those with inhibitors. In these high risk patients, availability of specific clotting factors such as activated prothrombin complex concentrate (FEIBA^®, Baxter, Vienna, Austria) and more recently, recombinant factor VIIa (rFVIIa, NovoSeven^®, Bagsvaerd, Denmark) has allowed to perform effective and safe orthopaedic procedures. The on-going EUREKA study will undoubtedly provide additional information about the optimal use of rFVIIa in this context.